Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
гфXI_II.doc
Скачиваний:
16
Добавлен:
02.05.2015
Размер:
3.19 Mб
Скачать

0,0004 - Содержание рибофлавина в 1 мл раствора рабочего

стандартного образца в миллиграммах; а - навеска препарата в

граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б - средняя

масса одного драже или одной таблетки в граммах; 1000 - пересчет в

граммы.

Примечание. Приготовление раствора рабочего стандартного

образца рибофлавина: 0,0400 г рибофлавина, предварительно

высушенного при температуре от 100 до 105 град. С в течение 2 ч,

растворяют в горячей воде в мерной колбе вместимостью 1 л при

подогревании на водяной бане, после охлаждения доводят объем

раствора водой до метки (основной раствор). Раствор годен в

течение 1 мес при хранении в банке оранжевого стекла с притертой

пробкой при температуре от 5 до 10 град. С.

1 мл основного раствора помещают в мерную колбу вместимостью

100 мл и доводят объем раствора водой до метки; 1 мл раствора

рабочего стандартного образца содержит 0,0001 мг рибофлавина.

Раствор годен в день приготовления.

5. Определение содержания

пиридоксина гидрохлорида (витамина B6)

Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или

количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок,

указанных в соответствующих частных статьях, количественно

переносят водой в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем

раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют; первые 10 мл

отбрасывают. Из полученного раствора готовят раствор второго

разведения с таким расчетом, чтобы содержание в нем пиридоксина

гидрохлорида было около 0,01 мг в 1 мл; 5 мл полученного раствора

переносят в делительную воронку вместимостью 50 мл, прибавляют 10

мл фосфатного буферного раствора (0,2 моль/л), 1 мл 0,1% раствора

диэтил-п-фенилендиамина сульфата, перемешивают, прибавляют 10 мл

этилацетата, 2 мл 1% раствора калия феррицианида и немедленно

тщательно перемешивают. Дают слоям разделиться, нижний водный слой

сливают в колбу и оставляют для повторного извлечения, верхний

этилацетатный слой фильтруют через сухой бумажный фильтр, на

который помещено около 8 г безводного натрия сульфата, в мерную

колбу вместимостью 25 мл. Нижний водный слой повторно извлекают 10

мл этилацетата, фильтруют, фильтр промывают этилацетатом,

присоединяют его к первому извлечению в мерной колбе и доводят

объем раствора этилацетатом до метки. Измеряют оптическую

плотность полученного раствора синего цвета на спектрофотометре

или фотоэлектроколориметре при длине волны 600 нм в кюветах с

толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют

этилацетат.

Параллельно проводят опыт с раствором рабочего стандартного

образца пиридоксина гидрохлорида. Для этого 5 мл раствора рабочего

стандартного образца пиридоксина гидрохлорида помещают в

делительную воронку и далее поступают так, как описано выше.

Содержание C8H11NO3 х HCl (пиридоксина гидрохлорида) в одном

драже или одной таблетке в граммах (X) вычисляют по формуле:

D1 х 0,01 х 100 х V3 х б D1 х V3 х б

Х = -------------------------- = --------------------,

D0 х а х V2 х 1000 D0 х а х V2 х 1000

где D1 - оптическая плотность испытуемого раствора; D0 -

оптическая плотность раствора рабочего стандартного образца

пиридоксина гидрохлорида; 0,01 - содержание пиридоксина

гидрохлорида в 1 мл раствора рабочего стандартного образца в

миллиграммах; 100, V2 и V3 - разведения в миллилитрах; а - навеска

препарата в граммах или количество таблеток, покрытых оболочкой; б

- средняя масса одного драже или одной таблетки в граммах; 1000 -

пересчет в граммы.

Примечания. 1. Приготовление раствора рабочего стандартного

образца пиридоксина гидрохлорида: 0,0500 г пиридоксина

гидрохлорида растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 250 мл

и доводят объем раствора водой до метки (основной раствор).

Раствор годен в течение месяца при хранении в склянке оранжевого

стекла с притертой пробкой при температуре от 5 до 10 град. С.

5 мл основного раствора помещают в мерную колбу вместимостью

100 мл и доводят объем раствора водой до метки.

1 мл раствора рабочего стандартного образца содержит 0,01 мг

пиридоксина гидрохлорида.

Раствор годен в день приготовления.

2. Приготовление фосфатного буферного раствора (0,2 моль/л) рН

6,9 - 7,1:

1) 71,64 г натрия фосфата двузамещенного (Na2HPO х 12Н2О)

растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 л и доводят объем

раствора водой до метки;

2) 27,22 г калия фосфата однозамещенного (КН2РО4) растворяют в

воде в мерной колбе вместимостью 1 л и доводят объем раствора

водой до метки;

3) 150 мл раствора натрия фосфата двузамещенного смешивают со

100 мл раствора калия фосфата однозамещенного.

рН полученного раствора 6,9-7,1 (потенциометрически).

Раствор годен в течение 5 сут при хранении при температуре от

5 до 10 град. С.

3. Приготовление раствора сульфата диэтил - п -

фенилендиамина: 0,1 г сульфата диэтил - п - фенилендиамина (ч. д.

а. или ч.) растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл,

доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Раствор готовят непосредственно перед употреблением.

6. Определение цианокобаламина (витамина В12)

Содержание цианокобаламина определяют микробиологическим

методом с Escherichia coli 113-3 в качестве тест - микроорганизма.

Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или

количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок,

указанное в соответствующих частных статьях, количественно

переносят водой в мерную колбу определенной вместимости и доводят

объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют. Из

полученного раствора делают разведение 1% раствором натрия цитрата

с таким расчетом, чтобы концентрация раствора для анализа была

близкой к контрольной концентрации раствора Государственного

стандартного образца - 0,05 мкг в 1 мл.

В чашки Петри (6 чашек для построения стандартной кривой и 3

чашки для раствора испытуемого препарата) одинакового диаметра с

ровным и плоским дном, установленные на горизонтальном столе,

отрегулированном по ватерпасу, разливают по 10-12 мл расплавленной

и охлажденной до температуры 48-50 град. С основной среды,

засеянной суспензией Е. coli 113-3 из расчета от 4 до 6 мл

суспензии на 200 мл основной среды. После застывания среды на

каждой чашке стерильным бором делают по трафарету под углом 60

град. С друг к другу 6 лунок диаметром 8 мм.

В три лунки (через одну) 6 чашек, используемых для построения

стандартной кривой, и 3 чашек - для раствора испытуемого

препарата, вносят по 0,1 мл раствора Государственного стандартного

образца контрольной концентрации (0,05 мкг/мл). В три лунки (через

одну) каждых 3 чашек вносят по 0,1 мл одной из концентрации

остальных растворов Государственного стандартного образца, а также

раствора испытуемого препарата. Чашки выдерживают в термостате при