Отбор проб сырья и биологического материала для ветеринарных лабораторий. Учебно-методическое пособие

- несмываемый карандаш или маркер, бланк или образец сопроводительного документа, скотч, лейкопластырь;

-несколько ножей, одноразовых скальпелей, пинцеты разные, сосудистые зажимы разные, ножницы разные, шприцы – 1, 2, 5 10, 20 мл, иглы, в т.ч. для взятия крови, вакуумные системы для взятия крови или пробирки для хранения сыворотки крови;

-стерильные пластиковые пакеты, 500 мл 70 - 90% спирта этилового, консервирующую жидкость для транспортировки, фос- фатно-буферный или физиологический раствор, нейтральный глицерин и др.

Для отбора патологического и биологического материалов используют следующий инструментарий и емкости:

одноразовые или многоразовые защитные костюмы; перчатки, бахилы, шапочка; резиновые сапоги; нож; тканевые ножницы; пинцет;

ножницы куриные; банки с плотно закрывающимися крышками и с фиксата-

рами;

пробирки с транспортной средой; покровные и предметные стекла; ватные тампоны; деревянные палочки;

пластиковый пакет для упаковки трупов, контаминированного оборудования;

раствор детергента или дезинфектанта; пластиковый контейнер (ведро).

Средства индивидуальной защиты.

К средствам индивидуальной защиты относятся специальная одежда, респираторы, противогазы. Спецодежда состоит из халата или комбинезона, колпака или косынки, респиратора, защитных очков, резиновых перчаток. При работе, связанной с особо опасными инфекциями, персонал обеспечивается противочумными костюмами, которые предназначены для защиты.

Тип I - полный противочумный костюм; тип II (облегченный) состоит из комбинезона или пижамы, противочумного хала-

41

та, капюшона или косынки, резиновых перчаток, носков, сапог, полотенца. Тип III - состоит из пижамы, противочумного халата, шапочки, резиновых перчаток, глубоких калош и полотенца, тип IV - состоит из пижамы, хирургического халата, шапочки или косынки, носок, тапочек или другой легкой обуви.

Отбора проб патологического материала и его доставки в лабораторию на исключение бактериальных инфекций.

Материалом для исследований являются трупы животных и птиц, внутренние органы (части органов) павших и вынужденно убитых животных, кровь и сыворотка крови, кал, моча, гной, слизь, экссудат, желчь, выделения из различных полостей, молоко, кожа с волосяным покровом.

Патологический материал отбирают не позднее 2 часов после гибели, убоя животного или аборта и направляют в лабораторию в герметичной упаковке.

При невозможности скорой доставки пат. материал хранят в холодильнике при t 4-60С не более 6 часов или консервируют 30%-ным стерильным водным раствором химически чистого глицерина (доставка в течение 24-30 часов). Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве в 4-5 раз превышающем его объем.

Трупы мелких животных направляют на исследования целыми в непроницаемой таре (целлофан, полиэтиленовая пленка, пластиковая ёмкость).

Фекалии отправляют в хорошо закрывающихся стерильных стаканчиках, пробирках или банках.

Кровь, гной, слизь, желчь, мочу и другой жидкий пат. Материал направляют в стерильных пробирках, флаконах, хорошо закрытых стерильными резиновыми пробками.

Весь материал доставляется в лабораторию в сумкехолодильнике с хладагентами.

Правила отбора и доставки проб в лабораторию.

Отбор проб патологического материала и его доставка требуют выполнения ряда условий, обеспечивающих сохранение активности возбудителя в отобранных пробах и предусматривающих надежную упаковку, т.к. нарушение упаковки сопряжено с риском попадания вируса во внешнюю среду, что может привести к воз-

42

никновению новых очагов болезни на благополучных территориях.

При отборе и перевозке проб следует строго следовать ве- теринарно-санитарным нормам и применять самые жесткие меры личной и общественной безопасности, руководствуясь Законом «О ветеринарии», Ветеринарным законодательством и положениями, которые утверждены Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации. Вскрытие трупов и отбор проб патологического материала следует выполнять в специализированном защитном костюме, руководствуясь СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».

Для установления диагноза или мониторинга при исследовании павших или убитых с диагностической целью отбирают: лимфатические узлы (подчелюстные, портальные и мезентеральные), кусочки внутренних органов, пробы крови (из сердца), костный мозг, головы и др.

Вслучае гнилостного разложения или частичного уничтожения (съедения) туши хищными животными, в качестве патологического материала можно использовать сохранившиеся остатки органов и тканей (трубчатая кость, внутренние органы, мышечная ткань, шкура). Отбирают от каждой обнаруженной павшей или отстрелянной охотниками туши, независимо от пола, возраста и сезона года.

Вслучае, если подозрение на заболевание возникло в изолированно содержащейся группе животных (или группе животных, для ухода за которыми используется одно и то же оборудование и (или) инвентарь)

- от 1 до 15 голов, пробы отбираются от каждого животного группы;

- в случае, если подозрение на заболевание возникло в

группе животных, насчитывающей от 16 до 50 голов свиней, пробы отбираются от 15 голов;

-в группах животных, насчитывающих от 51 до 100 голов свиней, пробы отбираются от 22;

-в группах животных с поголовьем более 100 пробы отбираются от 25 голов животных;

43

-в группах, насчитывающих более 500 голов, пробы отби-

раются от 30 животных.

Во всех случаях пробы крови для диагностических исследований на отбираются от всех животных с гипертермией (лихорадкой), а пробы патологического материала - от всех павших (в случаях наличия падежа).

Для прижизненной диагностики отбирают:

Цельная кровь, плазма крови, сыворотка крови:

Кровь для исследования отбирают в объеме 3-5мл в стерильные пробирки с раствором ЭДТА (этилендиаминтетраацетат) из расчета 10:1. Желательно использовать одноразовые системы взятия крови. Закрытую пробирку с кровью несколько раз переворачивают.

Дополнительно отбирают сыворотки крови. Для получения сыворотки забор крови проводят в пробирку без антикоагулянта.

Мазки:

Мазки со слизистых оболочек и других получают с помощью стерильного зонда, который вместе с материалом помещают в пробирку типа «Эппендорф» с 500 мкл стерильного физиологического раствора.

Упаковка и транспортировка материала.

Упаковку патологического (биологического) материала и его транспортирование осуществляют с обеспечением:

-сохранности патологического материала и его пригодности для исследований в течение срока транспортировки от момента отбора до места исследования

-- исключения риска распространения возбудителя заболевания во внешнюю среду (в том числе, упаковка должна предотвращать утечку (рассеивание) материала во внешнюю среду)

Пробы материала помещают в прочную пластиковую или

стеклянную посуду, которую маркируют, герметически закупоривают, обрабатывают дезинфицирующим раствором.

Хранят и транспортируют в термосе с абсорбционным материалом, для защиты от повреждений и предотвращения утечки (либо термоконтейнере с хладагентами) при температуре от 20С до 80С не более 24ч после отбора.

44

На содержимое контейнера на официальном бланке орга- низации-отправителя составляют сопроводительное письмо в двух экземплярах, в котором указывают дату, время отбора проб, адрес места отбора проб, их перечень, основания для подозрения заболевание, адрес и контактные телефоны отправителя.

Первые экземпляры указанных документов помещают в контейнер, копии остаются у отправителя. Закрытый и опечатанный контейнер снаружи обрабатывают смесью этанола и эфира (1:1) и доставляют в сопровождении ветеринарного специалиста (с нарочным) в лабораторию. Иные способы доставки не допускаются.

При более длительном хранении пробы замораживают (ГОСТ 28573-90) Возможно лишь однократное замораживаниеоттаивание материала.

Отобранный материал для исследований доставляют в ветеринарную лабораторию или профильное научноисследовательское учреждение, имеющие соответствующие условия и возможности, или в аккредитованную на осуществление лабораторных исследований в области ветеринарии лабораторию.

Ответственность за доставку специального груза несет отправитель, который любым видом срочной связи информирует получателя о способе и времени доставки груза.

Правила отбора проб крови на серологические исследо-

вания. При взятии крови необходимо следить, чтобы кровь стекала по стенке пробирки струей, а не каплями. Кровь, взятая каплями вспененная, скорее гемолизируется и часто дает неверные результаты при исследовании.

Кровь берут утром до кормления животных (у жвачных в любое время) в количестве не менее 5-7 мл от крупных животных. От мелких в объеме 2-4 мл.

Улошадей, КРС, МРС кровь берут из яремной вены в верхней трети шеи.

Усвиней кровь берут из уха или кончика хвоста.

Уптиц кровь берут из вены крыла или из гребешка.

Для получения сыворотки кровь необходимо выдержать около часа при t 30-350С для свертывания, а затем поместить в прохладное место ( t 4-100С).

45

Кровь должна быть доставлена в лабораторию в течение 1- х суток (сыворотка кров собак 3- 4ч), в исключительных случаях не позднее 3-го дня после взятия.

При пересылке сыворотки крови на большие расстояния, особенно летом, ее необходимо консервировать.

Консервирование сывороток

-добавлением 1 капли 5%-го раствора фенола на каждый мл сыворотки при тщательном помешивании;

-сухой борной кислотой до получения насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка;

-путем однократного замораживания.

Высушивание сывороток (0,4 мл на фильтровальной бума-

ге)

Неконсервированные сыворотки крови пригодны для ис-

следования в течение 6 суток со дня взятия при условии хранения их при t 4-80С.

Сыворотки консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в течение 30 суток, замороженные – в течение 3 суток после однократного замораживания.

Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки исследованию не подлежат.

.В случае доставки крови без сыворотки её нельзя консервировать или замораживать.

Кровь от абортировавших животных должна доставляться дважды – непосредственно сразу после аборта и через 14-21 день с настоящего момента взятия крови.

На лептоспироз пробы крови берутся не ранее, чем через 5- 7 суток после проявления клинических признаков болезни или не ранее чем через 90 суток после вакцинации КРС, для свиней через 60 суток и других видов животных, а также не ранее, чем через 1012 дней после проведенного лечения.

Упаковка в транспортные контейнеры

Первичные контейнеры - криопробирки или пластиковые контейнеры.

Вокруг первичного контейнера - абсорбирующие материа-

лы.

46

Если несколько проб в первичных контейнерах - они должны быть по отдельности завернуты или изолированы друг от друга, чтобы предотвратить контакт между ними.

Первичные контейнеры и абсорбирующие материалы – помещают во вторичные контейнеры.

Первичные и вторичные контейнеры – должны быть герметичными, выдерживать, не протекая, перепады внутреннего давления не менее 95 kPa, при колебаниях температуры от минус 40 С до плюс 55 С.

Объем жидкости в первичной таре - не более 50 мл, масса твердых образцов - не более 50 г.

Внешняя упаковка - не более четырех килограммов хладоэлементов или сухого льда.

Уточненный список содержимого должен быть вложен в пространство между вторичным контейнером и внешней упаковкой.

Дезинфекция. После работ необходима дезинфекция Разовую спецодежду уничтожают. Спецодежду для многократного использования упаковывают в 2 полиэтиленовых мешка перед транспортировкой к месту, где она может быть обеззаражена

Сопроводительная документация. После отбора проб па-

тологического и биологического материала на все образцы оформляется сопроводительная документация, содержащая следующие сведения:

сведения эпизоотологического обследования неблагополучного хозяйства (района, области); общее поголовье животных; поголовье восприимчивых животных; дата первых признаков заболевания;

сведения о применении вакцинации или ее отсутствии, дата последней вакцинации, серии использованной вакцины; количество заболевших и павших животных; клинические признаки заболевания; номера каждого флакона с пробами с указанием вида жи-

вотных, наименования и количества материала, консерванта, даты отбора проб; почтовый адреса и номера телефонов отправителя.

47

Требования к транспортированию патологических и биоматериалов I-II групп патогенности.

ПБА I - II групп пересылают с одним или с двумя нарочными, знакомыми с требованиями биологической безопасности, причем один из них должен иметь биологическое или ветеринарное (медицинское) образование и быть допущен к работе с ПБА I - II групп.

На содержимое упаковки с ПБА I - IV групп составляют сопроводительное письмо на официальном бланке организации. Для ПБА I - II групп дополнительно составляют акт упаковки в двух экземплярах. Первые экземпляры указанных документов помещают в упаковку с ПБА. Копии документов остаются у отправителя. Организация, получившая ПБА I - II групп, должна составить акт вскрытия упаковки и вместе с письмом, подтверждающим получение ПБА, направить его в организацию, их выдавшую.

Организация - отправитель обязана сообщить любым видом срочной связи организации - получателю дату и вид транспорта, которым отправлены ПБА.

ПБА I - IV групп передают в лиофилизированном состоянии или на плотных питательных средах. Передача токсинов, вирусов (органов, тканей и их суспензий, содержащих эти ПБА) допускается в консервирующей жидкости или в замороженном состоянии.

Требования к транспортированию патологических и биоматериалов I-IV групп патогенности.

Транспортирование ПБА осуществляется в герметически закрытых емкостях.

На адресной стороне контейнера должен быть особый знак (ярлык с отметкой) "Опасно! Не открывать во время перевозки".

Перевозка живых животных, зараженных ПБА I - IV групп, категорически запрещается.

В случае возникновения при транспортировании ПБА I - IV групп аварии, катастрофы, утраты и хищения посылки необходимо сообщать в органы государственного санитарноэпидемиологического надзора, органы ФСБ и МВД для принятия мер по охране места происшествия, ликвидации последствий, организации розыска потерянного или похищенного. Об этом факте информируют организации - отправителя и получателя ПБА.

48

БИБЛИОГРАФИЯ:

1.«Руководящие положения по оценке компетентности испытательных лабораторий, работающих в области контроля продуктов питания при импорте и экспорте» (CAC/GL 27-1997)

2.ISO/IEC 17025:1999 «General requirements for the competence of calibration and testing laboratories»;

3.«The international Harmonized Protocol for the Proficiency Testing of (Chemical) Analytical Laboratories» (Pure & Appl. Chem. 78(2006) 145-196);

4.«Harmonized Guidelines for Internal Quality Control in Analytical Chemistry Laboratories» (Pure & Appl. Chem, 67 (1995) 649– 666).

5.ISO/IEC 58:1993: «Calibration and testing laboratory accreditation systems — General requirements for operation and recognition».

6.•“International Harmonized Protocol for the Proficiency Testing of (Chemical) Analytical Laboratories”, Pure & Appl. Chem.,65 (1993) 2132-2144 and J. AOAC International, 76 (1993);

7.•“Protocol for the Design, Conduct and Interpretation of Method Performance Studies”, Pure & Appl. Chem., 67 (1995);

8.•“Harmonized Guidelines for Internal Quality Control in Analytical Chemistry Laboratories”, Pure & Appl. Chem., 67 (1995)

9.ГОСТ Р ИСО 7002-2012 Продукты сельскохозяйственные пищевые. Схема стандартного метода отбора проб из партии.

10.СП 1.3.3118-13 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)", утверждены постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.11.2013 N 64, зарегистрированы в Минюсте России 19.05.2014, регистрационный N 32325;

11.СП 1.3.2322-08. "Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней. Санитарно-эпидемиологические правила", утверждены постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2008 N 4, зарегистрироваы в Минюсте России 21.02.2008 регистрационный N 11197;

12.СП 1.2.1318-03 "Порядок выдачи санитарноэпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I - IV

49

групп патогенности (опасности), генно-инженерно- модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами", утверждены постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 30.04.2003 N 85, зарегистрированы в Минюсте России 19.05.2003, регистрационный N 4558.

13.Приказ МСХ России и ФТС от 05.11.2009г. №542/2013 «О ветеринарно-санитарных требованиях к складам временного хранения и таможенным складам»;

14.Приказ МСХ России от 05.11.2008г. №490 «Об утверждении правил проведения лабораторных исследований в области ветеринарии»;

15.Закон №29-ФЗ от 02.01.200 "О качестве и безопасности пищевых продуктов";

16.СанПиН 2.3.2.1324-03 Продовольственное сырье и пищевые продукты. Гигиенические требования к срокам годности и условиям хранения пищевых продуктов. Санитарноэпидемиологические правила и нормативы";

17.СП 2.3.6.1079-01. 2.3.6. Организации общественного питания. Санитарно-эпидемиологические требования к организациям общественного питания, изготовлению и оборотоспособности в них пищевых продуктов и продовольственного сырья. Санитарноэпидемиологические правила;

18.-Положение о едином порядке проведения совместных проверок объектов и отбора проб товаров (продукции), подлежащих ветеринарному контролю (надзору) (Утверждено Решением

Комиссии таможенного союза от 09 октября 2014 года № 94)

19.-Положение о Едином порядке осуществления ветеринарного контроля на таможенной границе таможенного союза и на таможенной территории таможенного союза (Утверждено Решением Комиссии таможенного союза от 18 июня 2011 года № 317)

20.-Приказ «О проведении лабораторных исследований в рамках реализации мероприятий Россельхознадзора для обеспечения выполнения требований Соглашения ВТО по СФС при вступлении России в ВТО»

21.ФЗ - №29 - ФЗ от 02.01.2000г «О качестве и безопасности пищевых продуктов»;

22.-Закон РФ от 14.05.1993 г. №4979-1 "О ветеринарии"

50