- •I. Введение. Грипп — заболевание с неизменяющейся симптоматикой, вызываемое изменяющимся вирусом
- •II. Таксономия вирусов гриппа
- •IV. Структурное и функциональное родство вирусов гриппа с другими рнк-содержащими вирусами
- •V. Антигенная изменчивость вируса гриппа и ее отличие от антигенной изменчивости других инфекционных агентов
- •VI. Нерешенные вопросы
- •Структура вируса гриппа
- •I. Введение
- •1. Число и функции полипептидов
- •4. Нейраминидаза
- •5.Белок нуклеокапсида
- •7. Количество полипептидов в вирионе
- •8. Вирусы гриппа в и с
- •1. Гемагглютинин
- •2. Нейраминидаза
- •IV. Сборка вирионов
- •V. Заключение. Модель вириона гриппа
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Гемагглютинин
- •II. Реакция гемагглютинации
- •1. Количественное определение гемагглютинации
- •2. Гемадсорбция
- •3. Ингибирование гемагглютинации
- •III. Структура гемагглютинина
- •1. Химический состав изолированных гликопептидов
- •2. Антигенные свойства гликопептида hAt
- •4. Структура субъединицы на
- •5. Антигенная гомогенность субъединиц на
- •1. Моновалентный гемагглютинин
- •2. Агрегация и диссоциация моновалентного гемагглютинина
- •IV. Функции гемагглютинина
- •V. Заключение
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Нейраминидаза
- •II. Специфичность нейраминидазы
- •III. Субстраты для нейраминидазы
- •IV. Химические свойства нейраминидазы
- •V. Содержание нейраминидазы в оболочке вируса
- •1. Использование протеолитических ферментов
- •2. Использование детергентов
- •VI. Свойства изолированной нейраминидазы а. Состав аминокислот
- •VII. Структура нейраминидазы
- •VIII. Антигенные свойства нейраминидазы
- •IX. Лектины и нейраминидазы
- •X. Ингибиторы активности нейраминидазы
- •XI. Роль нейраминидазы
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Активность транскриптазы в клетках и вирионах гриппа
- •I. Введение
- •II. Активность рнк-полимеразы в инфицированных клетках
- •IV. Заключение
- •Рибонуклеиновые кислоты вирусов гриппа
- •I. Введение
- •II. Методы
- •1. Экстракция рнк из вирионов
- •1. Анализ экстрагированной рнк с помощью градиентного центрифугирования
- •2. Анализ экстрагированной рнк с помощью электрофореза в полиакриламидном геле (паагэ)
- •IV. Комплекс рнк с белком (рнп) а. Физические и химические свойства
- •2, Созревание и упаковка рнк в вирионы
- •1. Внутриклеточная локализация вкРнк
- •2. Кинетика синтеза вкРнк
- •3. Физические свойства информационной рнк (мРнк)
- •VI. Действие ингибиторов на синтез рнк
- •VII. Заключение
- •Генетика вируса гриппа
- •I. Введение. Исторический обзор
- •1. Исследования по генетике, проведенные Burnet и сотрудниками
- •2. Исследования по генетике, проведенные Hirst и Gotlieb
- •II. Геном вируса гриппа
- •III. Мутации, изменчивость, адаптация
- •1. Модификация вирусных гликопротеидов
- •2. Модификация вирусной оболочки
- •3„ Модификации с помощью протеолитических ферментов
- •1964) Или к гуанидвнгидрохлориду (David-West, 1973) явля
- •2. Фенотипы, относящиеся к нейраминидазе
- •3. Морфология вириона
- •1. Чувствительность к клетке-хозяину
- •2. Патогенность
- •3. Механизм рекомбинации
- •10% От выхода вируса при разрешающей температуре. Шля1
- •V!. Фенотипическое смешение и гетерозигозис
- •VII. Изучение функции генов с помощью ts-мутантов
- •VIII. Заключение
- •Репликация вируса гриппа
- •I. Введение
- •II. Адсорбция, проникновение, «раздевание» вируса
- •III. Транскрипция а. Последовательность синтеза рнк
- •2. Циклогексимид
- •3. Глюкозамин
- •IV. Синтез вирусных белков
- •2. Белок нуклеокапсида
- •3. Неструктурные белки
- •4. Мембранный м-белок
- •5. Гемагглютинин
- •VI. Синтез липидов
- •VII. Сборка (см. Также гл. 2)
- •IX. Неправильные формы размножения
- •Культивирование вирусов гриппа человека в лабораторных условиях, круг хозяев среди лабораторных животных и выделение вируса из клинического материала
- •I. Введение
- •II. Культивирование вирусов в лабораторных условиях
- •1. Продуктивная инфекция
- •2. Абортивная инфекция
- •3. Персистентная инфекция
- •4. Параметры инфекции
- •IV. Выделение вируса
- •Антигенная изменчивость вируса гриппа
- •I. Введение
- •II. Грипп в историческом аспекте (см. Также гл. 15)
- •III. Свойства генома вируса гриппа
- •IV. Субъединицы гемагглютинина
- •V. Механизм антигенного дрейфа
- •1955, 1956; Magill, 1955; Hamre et al., 1958). Эпидемиологиче
- •1956, 1957; Takatsy, Furesz, 1957), антигены постепенно за
- •VI. Механизм антигенных сдвигов (значительных антигенных изменении)
- •VII. Дополнительные доказательства,
- •2. Естественная передача вируса и селекция
- •3. Селекция и передача «нового» вируса гриппа в системе in vivo
- •1. Антигенные соотношения между вирусами гриппа человека, низших млекопитающих и птиц
- •2. Круг хозяев
- •Иммунология гриппа
- •I. Введение
- •II. Проявления иммунитета
- •1. Устойчивость к инфекции
- •2. Изменение заболевания
- •3. Передача вируса
- •2. Изменение заболевания
- •3. Передача вируса
- •4. Механизм действия антител к na
- •V. Влияние антигенного дрейфа на иммунитет
- •VII. «первородный антигенный грех»
- •VIII. Клеточный иммунитет и грипп
- •IX. Заключение
- •Грипп у человека
- •2. Инфекция, вызываемая вирусом гриппа а
- •3. Инфекция, вызываемая вирусом гриппа в
- •7. Изменения бактериальной флоры
- •8. Функция легких при неосложненном гриппе
- •9. Выделение больными вируса в окружающую среду
- •10. Интерферон
- •11. Продукция антител
- •1. Пневмония
- •2. Острые заболевания нижних дыхательных путей у детей
- •3. Обострение хронического бронхита
- •III. Экспериментальная гриппозная инфекция у человека
- •3. Продукция интерферона при заболевании
- •IV. Выводы и заключение
1. Продуктивная инфекция
Репликативный цикл вирусов гриппа детально описан
в гл. 8. За введением вируса <в 'культуру чувствительных кле
ток следует период «затмения» ^продолжительностью прибли
зительно 2 ч, в течение которого не обнаруживается каких-
либо 'биологических или серологических проявлений синтеза
вирусных белков. В течение этого периода идет синтез вирус-
специфических яолипептидов, :в том числе вирусслецифиче-
оких 'компонентов, которые не инкорпорируются в вирион.
Приблизительно через 2 ч после заражения в клетках можно
обнаружить антиген нуклешротеида (NP). Количество этого
компонента достигает максимума к 5—6-му часу после зара
жения. Присутствие гемагглютинина или поверхностных ан
тигенов в экстрактах клеток обнаруживается через 3 ч после
заражения. Почкующийся вирус может быть обнаружен на
оболочках клеток спустя приблизительно 5'/г ч после зара
жения. Вскоре после этого, примерно через 6 ч после зара
жения, начинается выход вируса в среду, и инфекционный
вирус' достигает максимальной .концентрации в среде через
7—8 ч после заражения
При заражении (вирусом гриппа человека различных первичных (культур клеток, полученных из тканей птиц или млекопитающих, в них (происходит продуктивный цикл. Перечень, этих культур можно найти у Hoyle (1968). Для того чтобы не повторять этот перечень, мы постараемся суммировать, наиболее существенные^ достижения, полученные рядом исследователей «а протяжении более 20 лет экспериментальной; работы.
Эпителиоидные клетки являются наиболее чувствительной, системой для культивирования in vitro обширного ряда штаммов вируса гриппа А и В. Чаще других используют для этих, целей почки плода человека (Mogabgab et al., 1954), макак резусов или зеленых мартышек (Mogabgab et al., 1961), почки телят (Haas, Wulff, 1957; Lehmann-Grube, 1965), свиней. (Lehmann-Grube, 1964), а также хомяков (Heath, Tyrrell,. 1959)'. Из них чаще используют первичные клетки почек, обезьян, человека и телят. Обычно предпочитают почки обезьян, что обусловлено скоростью «х роста и удобством в. обращении.
Не все культуры элителиоидных клеток пермиссивны для вируса (гриппа. Первичные диплоидные и гетероплоидные клетки человеческого амниона, так же как и другие (гетероплоидные эпителиальные клетки, обычно нечувствительны к нему. К гетероплоидным клеткам относятся такие линии, ясак HeLa, KB, клетки конъюнктивы (Green et al., 1957), а также MAF и клетки сердца и кишечника человека (Wong, Kilbour-ne, 1961).
Культуры эпителиощдных клеток, полученные из органов,, обладают более однородной чувствительностью к вирусам гриппа, чем культуры, полученные из органов эмбриона. По нашим данным, культуры клеток, приготовленные из почек, мертворожденных (Младенцев, столь же чувствительны к вирусам гриппа, как культура клеток почек обезьян, а культуры клеток эмбриональных почек человека менее чувствительны. Существенной проблемой при использовании эмбриональных почек человека является разница в чувствительности между различными партиями клеток. Почки обычно получают от эмбрионов разного возраста, условия их получения тоже варьируют, в результате чего сильно (колеблется процент жизнеспособных клеток. Эти факторы приводят к большому разнообразию в соотношении между эпителиоидными и фиб--робластоиодобными клетками в культурах почки эмбриона, человека. Это в свою очередь может привести к значительным вариациям в чувствительности к вирусам. Эпителиоидные клетки в отличие от фибробластоидных поддерживают репликацию вируса. Аналогичные данные отлучены в отношении клеток почек свиней. Культуры, полученные из почек взрослых свиней, состоят в основном из эпителиоидных «леток, которые поддерживают репликацию вируса гриппа. Культуры, полученные из эмбриональных почек, почти полностью представлены фиброблаетами и практически нечувствительны к вирусу (Lehmann-Grube, 1964). Эта закономерность имеет место у многих видов.
Чувствительность эпителиоидных клеток к гриппозной инфекции снижается при субкультивировании. В некоторых случаях, например при использовании «леток почки эмбриона человека, субпаосаж способствует пролиферации фибро-бластов, нечувствительных к вирусу. В других случаях, например при использовании почек обезьян (Dowdle, неопубликованные данные) и теленка (Lehmann-Grube, 1964), культуры клеток сохраняют свои эпителиоидные свойства при многочисленных пассажах, но спектр их чувствительности к вирусам меняется уже при первом субкультивировании. Ди-плоидность эпителиоидных (клеток сама по себе еще не определяет чувствительность к вирусам.
Некоторые вирусы могут размножаться или приобретать способность к размножению после адаптации в фиброблаетах или в гетероплоидных линиях клеток, но таких штаммов мало. Штамм NWS вируса гриппа A (iHONl) уникален по широте клеточного спектра; он может размножаться в гетероплоидных эпителиальных клетках (Wong, Kilbourne, 1961), в фибробластах (Kilbourne et al., 1964) и IB MDBK, гетеро-плоидной линии клеток бычьей почки (Choppin, 1969). Вирус гриппа В тоже способен размножаться в гетероплоидной линии, полученной из почек собак (Green, 1962).
Специфичность в отношении клетки-хозяина не всегда удается предсказать. Вирусы гриппа свиней не размножаются в культуре клеток почки человека (Hinz, Syverton, 1959), но вирусы гриппа человека хорошо размножаются в клетках почек свиней (Lehmann-Grube, 1964). Культура клеток почек обезьян нечувствительна к вирусам гриппа лошадей (Heq2Neq2) при заражении непосредственно клиническим материалом, но те же вирусы размножаются в клетках почки обезьян после одного пассажа на куриных эмбрионах (Dowdle et al., 1963).
Недостаточно полное устранение сывороточных компонентов перед инокуляцией вируса является одной из главных лричин выделения вируса в малом проценте случаев и получения низких инфекционных титров в чувствительных культурах клеток. Компоненты сыворотки, представляющие собой необходимую составную часть среды для роста клеток, могут неспецифически нейтрализовать вирус. Это в наибольшей
степени касается вирусов, выделенных после 1957 г. Ингиби-рующее действие сыворотки может быть устранено посредством двукратной или многократной отмывки клеток средой, .не содержащей сыворотки.