- •I. Введение. Грипп — заболевание с неизменяющейся симптоматикой, вызываемое изменяющимся вирусом
- •II. Таксономия вирусов гриппа
- •IV. Структурное и функциональное родство вирусов гриппа с другими рнк-содержащими вирусами
- •V. Антигенная изменчивость вируса гриппа и ее отличие от антигенной изменчивости других инфекционных агентов
- •VI. Нерешенные вопросы
- •Структура вируса гриппа
- •I. Введение
- •1. Число и функции полипептидов
- •4. Нейраминидаза
- •5.Белок нуклеокапсида
- •7. Количество полипептидов в вирионе
- •8. Вирусы гриппа в и с
- •1. Гемагглютинин
- •2. Нейраминидаза
- •IV. Сборка вирионов
- •V. Заключение. Модель вириона гриппа
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Гемагглютинин
- •II. Реакция гемагглютинации
- •1. Количественное определение гемагглютинации
- •2. Гемадсорбция
- •3. Ингибирование гемагглютинации
- •III. Структура гемагглютинина
- •1. Химический состав изолированных гликопептидов
- •2. Антигенные свойства гликопептида hAt
- •4. Структура субъединицы на
- •5. Антигенная гомогенность субъединиц на
- •1. Моновалентный гемагглютинин
- •2. Агрегация и диссоциация моновалентного гемагглютинина
- •IV. Функции гемагглютинина
- •V. Заключение
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Нейраминидаза
- •II. Специфичность нейраминидазы
- •III. Субстраты для нейраминидазы
- •IV. Химические свойства нейраминидазы
- •V. Содержание нейраминидазы в оболочке вируса
- •1. Использование протеолитических ферментов
- •2. Использование детергентов
- •VI. Свойства изолированной нейраминидазы а. Состав аминокислот
- •VII. Структура нейраминидазы
- •VIII. Антигенные свойства нейраминидазы
- •IX. Лектины и нейраминидазы
- •X. Ингибиторы активности нейраминидазы
- •XI. Роль нейраминидазы
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Активность транскриптазы в клетках и вирионах гриппа
- •I. Введение
- •II. Активность рнк-полимеразы в инфицированных клетках
- •IV. Заключение
- •Рибонуклеиновые кислоты вирусов гриппа
- •I. Введение
- •II. Методы
- •1. Экстракция рнк из вирионов
- •1. Анализ экстрагированной рнк с помощью градиентного центрифугирования
- •2. Анализ экстрагированной рнк с помощью электрофореза в полиакриламидном геле (паагэ)
- •IV. Комплекс рнк с белком (рнп) а. Физические и химические свойства
- •2, Созревание и упаковка рнк в вирионы
- •1. Внутриклеточная локализация вкРнк
- •2. Кинетика синтеза вкРнк
- •3. Физические свойства информационной рнк (мРнк)
- •VI. Действие ингибиторов на синтез рнк
- •VII. Заключение
- •Генетика вируса гриппа
- •I. Введение. Исторический обзор
- •1. Исследования по генетике, проведенные Burnet и сотрудниками
- •2. Исследования по генетике, проведенные Hirst и Gotlieb
- •II. Геном вируса гриппа
- •III. Мутации, изменчивость, адаптация
- •1. Модификация вирусных гликопротеидов
- •2. Модификация вирусной оболочки
- •3„ Модификации с помощью протеолитических ферментов
- •1964) Или к гуанидвнгидрохлориду (David-West, 1973) явля
- •2. Фенотипы, относящиеся к нейраминидазе
- •3. Морфология вириона
- •1. Чувствительность к клетке-хозяину
- •2. Патогенность
- •3. Механизм рекомбинации
- •10% От выхода вируса при разрешающей температуре. Шля1
- •V!. Фенотипическое смешение и гетерозигозис
- •VII. Изучение функции генов с помощью ts-мутантов
- •VIII. Заключение
- •Репликация вируса гриппа
- •I. Введение
- •II. Адсорбция, проникновение, «раздевание» вируса
- •III. Транскрипция а. Последовательность синтеза рнк
- •2. Циклогексимид
- •3. Глюкозамин
- •IV. Синтез вирусных белков
- •2. Белок нуклеокапсида
- •3. Неструктурные белки
- •4. Мембранный м-белок
- •5. Гемагглютинин
- •VI. Синтез липидов
- •VII. Сборка (см. Также гл. 2)
- •IX. Неправильные формы размножения
- •Культивирование вирусов гриппа человека в лабораторных условиях, круг хозяев среди лабораторных животных и выделение вируса из клинического материала
- •I. Введение
- •II. Культивирование вирусов в лабораторных условиях
- •1. Продуктивная инфекция
- •2. Абортивная инфекция
- •3. Персистентная инфекция
- •4. Параметры инфекции
- •IV. Выделение вируса
- •Антигенная изменчивость вируса гриппа
- •I. Введение
- •II. Грипп в историческом аспекте (см. Также гл. 15)
- •III. Свойства генома вируса гриппа
- •IV. Субъединицы гемагглютинина
- •V. Механизм антигенного дрейфа
- •1955, 1956; Magill, 1955; Hamre et al., 1958). Эпидемиологиче
- •1956, 1957; Takatsy, Furesz, 1957), антигены постепенно за
- •VI. Механизм антигенных сдвигов (значительных антигенных изменении)
- •VII. Дополнительные доказательства,
- •2. Естественная передача вируса и селекция
- •3. Селекция и передача «нового» вируса гриппа в системе in vivo
- •1. Антигенные соотношения между вирусами гриппа человека, низших млекопитающих и птиц
- •2. Круг хозяев
- •Иммунология гриппа
- •I. Введение
- •II. Проявления иммунитета
- •1. Устойчивость к инфекции
- •2. Изменение заболевания
- •3. Передача вируса
- •2. Изменение заболевания
- •3. Передача вируса
- •4. Механизм действия антител к na
- •V. Влияние антигенного дрейфа на иммунитет
- •VII. «первородный антигенный грех»
- •VIII. Клеточный иммунитет и грипп
- •IX. Заключение
- •Грипп у человека
- •2. Инфекция, вызываемая вирусом гриппа а
- •3. Инфекция, вызываемая вирусом гриппа в
- •7. Изменения бактериальной флоры
- •8. Функция легких при неосложненном гриппе
- •9. Выделение больными вируса в окружающую среду
- •10. Интерферон
- •11. Продукция антител
- •1. Пневмония
- •2. Острые заболевания нижних дыхательных путей у детей
- •3. Обострение хронического бронхита
- •III. Экспериментальная гриппозная инфекция у человека
- •3. Продукция интерферона при заболевании
- •IV. Выводы и заключение
1. Химический состав изолированных гликопептидов
Протеолитическое расщепление субъединицы НА полезно для вирусологов (даже если этот процесс окажется не столь существенным для самого вируса), поскольку оно позволяет нам анализировать две части молекулы раздельно и описывать функции каждой из этих частей. Гликопептиды НА, я НА2 из штаммов АО/Bel H0N1 и B/Lee, культивированных на куриных эмбрионах, были разделены с помощью ультрацентрифугирования в градиенте сахарозы; содержащем гуа-видилгидрохлорид и дитиотриэтол (Laver, 1971; Laver, Baker, 1972).
НА2 выделенные из штамма АО/Bel после их деградации трипсином, свидетельствуют об отчетливых различиях, что в свою очередь указывает на отличие в их лоследовательно-стшяяашслот (Laver, 1971; см. также тл. 11, где описаны триптические пептидные карты гликопептидов НА, и НА2 для долгих штаммов вируса).
Laver и Webster (1972, 1973) использовали пептидные карты для выяснения молекулярных механизмов антигенных сдвигов в гемагтлютинине. Используя только триптические пептиды, растворимые при рН 6,5, они сравнили пептидные карты двух указанных выше гликопептидов, выделенные из различных штаммов вируса гриппа тина А. В штаммах антигенно достаточно удаленных друг от друга, они обнаружили большую разницу в последовательности аминокислот как для НАь так и для НА2, а в близкородственных штаммах наблюдались только небольшие различия. Генетическое объяснение этих результатов будет дано в ,гл. 10. Что касается структуры гемагглютинина, то из полученных различии пептидных карт ясно, что гликопептиды даже с резко различными последовательностями аминокислот способны принимать конфигурацию активного гемагглютинина. В связи с этим понятно, почему вирус гриппа так вариабелен по своим антигенным свойствам. Если бы стерические требования для образования биологически активного гемагглютинина были достаточно жестки, то не были бы возможны существенные, изменения в последовательности его аминокислот. И как следствие этого положения мутации в гемагглютинине вместо того, чтобы быть полезными вирусу, были бы для него губительны. Большая часть углеводов, входящих в состав субъединицы НА, по-видимому, ассоциирована с гликопептидом НАь В вирусе штамма АО/Bel в состав НА, входит в 5 раз больше глюкозамина, чем его находится в НА2, хотя эти два гликопептида отличаются по содержанию белка только в 2 раза (Laver, 1971). Таким образом, углеводы «оставят большую часть в гликопептиде НАь чем в гликопептиде НА2. Кроме глюкозамина, в состав НА, входят фукоза, галактоза и манноза (Laver 1971) Сиаловая кислота, вероятно, в вирионе отсутствует (Klenk, Choppin, 1970; Klenk et al., 1970). Однако может быть присоединена к обеим частям субъединиц НА (штамм A0/WSN) уже после сформирования цельных вирионов с помощью специального фермента (Schulze, 1973a, см. также часть IV этой главы). К НА, присоединялось в 5 раз больше остатков сиаловой кислоты, чем к НА2. Используемый фермент переносит остаток сиаловой кислоты с -цити-дУйн 5> монофосфата сиаловой кислоты на лицевой остаток галактозы, локализованный на гликопротеиде (Bartholomew, Jourdian, 1966).
Образовались ли концевые галактозные остатки гемагглютинина путем отщепления сиаловой кислоты с помощью нейраминидазы .или неполного синтеза углеводной цепи, — неизвестно. Фукоза — другой сахар, часто обнаруживаемый в концевом положении у олигосахаридов, не включен в НА2 некоторых вирусных штаммов, в то время как глюкозамин всегда входит в состав этого гликопептида (см. гл. 2). Может ли фукоза включаться в состав сформированных вирусных частиц in vitro — неизвестно.
Как видно из табл. 9, НА] и НА2 содержат примерно равное молярное количество тирозина. Stanley и Haslam (1971), однако, обнаружили, что НА2, меньший из двух гликонептидов, может быть йодирован в большей степени, чем НАь Таким образом, вероятно, остатки тирозина в НА части НА менее доступны за счет конформационных ограничений.
И, наконец, аминокислотный состав гемагглютинина, выделенного из штамма B/Lee, как было показано Laver и Baker (1972), сходен с аминокислотным составом гемагглютинина АО/Bel эти исследователи также показали, «то в состав гликопептида HAj входит около 90% пролина гемагглютинина. Поскольку этот аминокислотный остаток препятствует образованию а-спиральной конфигурации, его неравное распределение между двумя частями субъединицы НА может иметь важные «информационные последствия.