- •I. Введение. Грипп — заболевание с неизменяющейся симптоматикой, вызываемое изменяющимся вирусом
- •II. Таксономия вирусов гриппа
- •IV. Структурное и функциональное родство вирусов гриппа с другими рнк-содержащими вирусами
- •V. Антигенная изменчивость вируса гриппа и ее отличие от антигенной изменчивости других инфекционных агентов
- •VI. Нерешенные вопросы
- •Структура вируса гриппа
- •I. Введение
- •1. Число и функции полипептидов
- •4. Нейраминидаза
- •5.Белок нуклеокапсида
- •7. Количество полипептидов в вирионе
- •8. Вирусы гриппа в и с
- •1. Гемагглютинин
- •2. Нейраминидаза
- •IV. Сборка вирионов
- •V. Заключение. Модель вириона гриппа
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Гемагглютинин
- •II. Реакция гемагглютинации
- •1. Количественное определение гемагглютинации
- •2. Гемадсорбция
- •3. Ингибирование гемагглютинации
- •III. Структура гемагглютинина
- •1. Химический состав изолированных гликопептидов
- •2. Антигенные свойства гликопептида hAt
- •4. Структура субъединицы на
- •5. Антигенная гомогенность субъединиц на
- •1. Моновалентный гемагглютинин
- •2. Агрегация и диссоциация моновалентного гемагглютинина
- •IV. Функции гемагглютинина
- •V. Заключение
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Нейраминидаза
- •II. Специфичность нейраминидазы
- •III. Субстраты для нейраминидазы
- •IV. Химические свойства нейраминидазы
- •V. Содержание нейраминидазы в оболочке вируса
- •1. Использование протеолитических ферментов
- •2. Использование детергентов
- •VI. Свойства изолированной нейраминидазы а. Состав аминокислот
- •VII. Структура нейраминидазы
- •VIII. Антигенные свойства нейраминидазы
- •IX. Лектины и нейраминидазы
- •X. Ингибиторы активности нейраминидазы
- •XI. Роль нейраминидазы
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Активность транскриптазы в клетках и вирионах гриппа
- •I. Введение
- •II. Активность рнк-полимеразы в инфицированных клетках
- •IV. Заключение
- •Рибонуклеиновые кислоты вирусов гриппа
- •I. Введение
- •II. Методы
- •1. Экстракция рнк из вирионов
- •1. Анализ экстрагированной рнк с помощью градиентного центрифугирования
- •2. Анализ экстрагированной рнк с помощью электрофореза в полиакриламидном геле (паагэ)
- •IV. Комплекс рнк с белком (рнп) а. Физические и химические свойства
- •2, Созревание и упаковка рнк в вирионы
- •1. Внутриклеточная локализация вкРнк
- •2. Кинетика синтеза вкРнк
- •3. Физические свойства информационной рнк (мРнк)
- •VI. Действие ингибиторов на синтез рнк
- •VII. Заключение
- •Генетика вируса гриппа
- •I. Введение. Исторический обзор
- •1. Исследования по генетике, проведенные Burnet и сотрудниками
- •2. Исследования по генетике, проведенные Hirst и Gotlieb
- •II. Геном вируса гриппа
- •III. Мутации, изменчивость, адаптация
- •1. Модификация вирусных гликопротеидов
- •2. Модификация вирусной оболочки
- •3„ Модификации с помощью протеолитических ферментов
- •1964) Или к гуанидвнгидрохлориду (David-West, 1973) явля
- •2. Фенотипы, относящиеся к нейраминидазе
- •3. Морфология вириона
- •1. Чувствительность к клетке-хозяину
- •2. Патогенность
- •3. Механизм рекомбинации
- •10% От выхода вируса при разрешающей температуре. Шля1
- •V!. Фенотипическое смешение и гетерозигозис
- •VII. Изучение функции генов с помощью ts-мутантов
- •VIII. Заключение
- •Репликация вируса гриппа
- •I. Введение
- •II. Адсорбция, проникновение, «раздевание» вируса
- •III. Транскрипция а. Последовательность синтеза рнк
- •2. Циклогексимид
- •3. Глюкозамин
- •IV. Синтез вирусных белков
- •2. Белок нуклеокапсида
- •3. Неструктурные белки
- •4. Мембранный м-белок
- •5. Гемагглютинин
- •VI. Синтез липидов
- •VII. Сборка (см. Также гл. 2)
- •IX. Неправильные формы размножения
- •Культивирование вирусов гриппа человека в лабораторных условиях, круг хозяев среди лабораторных животных и выделение вируса из клинического материала
- •I. Введение
- •II. Культивирование вирусов в лабораторных условиях
- •1. Продуктивная инфекция
- •2. Абортивная инфекция
- •3. Персистентная инфекция
- •4. Параметры инфекции
- •IV. Выделение вируса
- •Антигенная изменчивость вируса гриппа
- •I. Введение
- •II. Грипп в историческом аспекте (см. Также гл. 15)
- •III. Свойства генома вируса гриппа
- •IV. Субъединицы гемагглютинина
- •V. Механизм антигенного дрейфа
- •1955, 1956; Magill, 1955; Hamre et al., 1958). Эпидемиологиче
- •1956, 1957; Takatsy, Furesz, 1957), антигены постепенно за
- •VI. Механизм антигенных сдвигов (значительных антигенных изменении)
- •VII. Дополнительные доказательства,
- •2. Естественная передача вируса и селекция
- •3. Селекция и передача «нового» вируса гриппа в системе in vivo
- •1. Антигенные соотношения между вирусами гриппа человека, низших млекопитающих и птиц
- •2. Круг хозяев
- •Иммунология гриппа
- •I. Введение
- •II. Проявления иммунитета
- •1. Устойчивость к инфекции
- •2. Изменение заболевания
- •3. Передача вируса
- •2. Изменение заболевания
- •3. Передача вируса
- •4. Механизм действия антител к na
- •V. Влияние антигенного дрейфа на иммунитет
- •VII. «первородный антигенный грех»
- •VIII. Клеточный иммунитет и грипп
- •IX. Заключение
- •Грипп у человека
- •2. Инфекция, вызываемая вирусом гриппа а
- •3. Инфекция, вызываемая вирусом гриппа в
- •7. Изменения бактериальной флоры
- •8. Функция легких при неосложненном гриппе
- •9. Выделение больными вируса в окружающую среду
- •10. Интерферон
- •11. Продукция антител
- •1. Пневмония
- •2. Острые заболевания нижних дыхательных путей у детей
- •3. Обострение хронического бронхита
- •III. Экспериментальная гриппозная инфекция у человека
- •3. Продукция интерферона при заболевании
- •IV. Выводы и заключение
1. Количественное определение гемагглютинации
В связи с большим числом рецепторных молекул на поверхности эритроцита к каждой эритроцитарной клетке может присоединиться большое число частиц вируса гриппа. Было подсчитано, что один эритроцит морокой свинки может адсорбировать на своей поверхности около 7000 вирусных частиц (Bateman et al., 1955). Однако, если в системе существует ограниченное число вирионов, вирусные частицы и эритроциты образуют агрегаты, в которых оба участника реакции присутствуют в соотношении 1—20 вирусных частиц на один эритроцит (Tyrrell, Valentine, 1957; Seto et al., 1961; Hoyle, 1968).
Степень гемагглютинации, наблюдаемая с данным количеством вируса, зависит от типа эритроцитов, штамма вируса, а также от температуры, рН и ионного состава среды. Тип используемых эритроцитных клеток является главным фактором, определяющим наличие или отсутствие гемагглютинации. В реакции могут быть использованы эритроциты позвоночных животных — птиц, амфибий и млекопитающих (Hoyle, 1968). Степень агглютинации клеток и количество вируса, которое они способны адсорбировать, варьирует в зависимости от вида, к которому принадлежит животное, и индивидуального представителя данного вида.
Вирусные частицы также различаются по своей способности вызывать гемагглютинацию. Таким образом, количественное описание реакции гемагглютинации зависит от наличия детальных сведений о всех компонентах используемой системы. Например, вирионы вновь изолированных штаммов гриппа (т. е. штаммы, которые прошли только несколько пассажей в лаборатории) часто имеют филаментозную форму, в то время как форма вирионов широко используемых лабораторных штаммов обычно сферическая. Вирусные частицы филаментозной формы могут теоретически агглютинировать большее число эритроцитов; таким образом, степень наблюдаемой агглютинации не обязательно отражает количество присутствующих в системе вирусных частиц.
Для всех вирусных штаммов наблюдаемая степень агглютинации зависит от двух противоположных реакций — адсорбции и элюции. Поскольку для адсорбции необходимы столкновения между эритроцитами и вирусными частицами, скорость этой реакции определяется концентрацией реагентов и почти не зависит от температуры. С другой стороны, элюция обычно представляет результат ферментной деструкции и поэтому является температурозависимым процессом. Вирусные штаммы, обладающие низкой нейраминидазной активностью, могут быть обнаружены по реакции гемагглютинации при 20 °С. Для штаммов же с высокой активностью нейраминидазы скорость элюции при 20 °С может быть достаточно высока, так что агглютинация может и не наблюдаться. Эффект агглютинации для таких вирусов может обнаруживаться -при 4°С или при 20 °С после деструкции вирионной нейраминидазы с (помощью мягкой тепловой обработки (Hirst, 1948b; Stone, 1949).
Разработано большое число различных методик для обнаружения гемагглютинации, индуцируемой вирусными частицами. Обычно кратные разбавления вируса инкубируют совместно со стандартной суспензией эритроцитов и наличие гемагглютинации выявляют визуально (Salk, 1944) либо с помощью денситометрии. В последнем случае спектрофотометрические измерения смеси вирусов с эритроцитами проводят после стандартного периода инкубации для формирования осадка (Hirst, Pickels, 1942; Levine et al., 1953; Horsfall,1954; Drescher, 1957). Совсем недавно разработана методика, согласно которой агглютинацию выявляют количественно с помощью определения количества гемоглобина, высвобождаемого из эритроцитов, не подвергшихся агглютинации данным разведением вируса (Cohen, Belyavin, 1966). Количество гемоглобина определяли и регистрировали с помощью автоматического анализатора. Кроме того, разработаны методики определения концентрации субъединиц гемагглютинина (Drescher, 1966, 1967).
Из всех описанных методик наиболее часто применяют прямое визуальное определение конечной точки титрования по картине агглютинации. При этом обычно используют эритроциты цыпленка и кратные двойные разведения в пробирках или в лунках пластмассовых пластин (при этом реакция может быть проведена в микрообъеме). Когда необходимо провести более точное определение, либо используют метод кратных разведений, разработанный Horsfall и Tamm (1953), либо определяют конечную точку агглютинации с помощью денситометра. Стандартная ошибка конечного вирусного титра, определенного методом кратных разведений, составляет примерно 17% (Horsfall, Tamm, 1953). Drescher (1957) показал, что при использовании спектрофотометрической методики ошибка составляет 3%.