- •I. Введение. Грипп — заболевание с неизменяющейся симптоматикой, вызываемое изменяющимся вирусом
- •II. Таксономия вирусов гриппа
- •IV. Структурное и функциональное родство вирусов гриппа с другими рнк-содержащими вирусами
- •V. Антигенная изменчивость вируса гриппа и ее отличие от антигенной изменчивости других инфекционных агентов
- •VI. Нерешенные вопросы
- •Структура вируса гриппа
- •I. Введение
- •1. Число и функции полипептидов
- •4. Нейраминидаза
- •5.Белок нуклеокапсида
- •7. Количество полипептидов в вирионе
- •8. Вирусы гриппа в и с
- •1. Гемагглютинин
- •2. Нейраминидаза
- •IV. Сборка вирионов
- •V. Заключение. Модель вириона гриппа
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Гемагглютинин
- •II. Реакция гемагглютинации
- •1. Количественное определение гемагглютинации
- •2. Гемадсорбция
- •3. Ингибирование гемагглютинации
- •III. Структура гемагглютинина
- •1. Химический состав изолированных гликопептидов
- •2. Антигенные свойства гликопептида hAt
- •4. Структура субъединицы на
- •5. Антигенная гомогенность субъединиц на
- •1. Моновалентный гемагглютинин
- •2. Агрегация и диссоциация моновалентного гемагглютинина
- •IV. Функции гемагглютинина
- •V. Заключение
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Нейраминидаза
- •II. Специфичность нейраминидазы
- •III. Субстраты для нейраминидазы
- •IV. Химические свойства нейраминидазы
- •V. Содержание нейраминидазы в оболочке вируса
- •1. Использование протеолитических ферментов
- •2. Использование детергентов
- •VI. Свойства изолированной нейраминидазы а. Состав аминокислот
- •VII. Структура нейраминидазы
- •VIII. Антигенные свойства нейраминидазы
- •IX. Лектины и нейраминидазы
- •X. Ингибиторы активности нейраминидазы
- •XI. Роль нейраминидазы
- •Биологически активные белки вируса гриппа. Активность транскриптазы в клетках и вирионах гриппа
- •I. Введение
- •II. Активность рнк-полимеразы в инфицированных клетках
- •IV. Заключение
- •Рибонуклеиновые кислоты вирусов гриппа
- •I. Введение
- •II. Методы
- •1. Экстракция рнк из вирионов
- •1. Анализ экстрагированной рнк с помощью градиентного центрифугирования
- •2. Анализ экстрагированной рнк с помощью электрофореза в полиакриламидном геле (паагэ)
- •IV. Комплекс рнк с белком (рнп) а. Физические и химические свойства
- •2, Созревание и упаковка рнк в вирионы
- •1. Внутриклеточная локализация вкРнк
- •2. Кинетика синтеза вкРнк
- •3. Физические свойства информационной рнк (мРнк)
- •VI. Действие ингибиторов на синтез рнк
- •VII. Заключение
- •Генетика вируса гриппа
- •I. Введение. Исторический обзор
- •1. Исследования по генетике, проведенные Burnet и сотрудниками
- •2. Исследования по генетике, проведенные Hirst и Gotlieb
- •II. Геном вируса гриппа
- •III. Мутации, изменчивость, адаптация
- •1. Модификация вирусных гликопротеидов
- •2. Модификация вирусной оболочки
- •3„ Модификации с помощью протеолитических ферментов
- •1964) Или к гуанидвнгидрохлориду (David-West, 1973) явля
- •2. Фенотипы, относящиеся к нейраминидазе
- •3. Морфология вириона
- •1. Чувствительность к клетке-хозяину
- •2. Патогенность
- •3. Механизм рекомбинации
- •10% От выхода вируса при разрешающей температуре. Шля1
- •V!. Фенотипическое смешение и гетерозигозис
- •VII. Изучение функции генов с помощью ts-мутантов
- •VIII. Заключение
- •Репликация вируса гриппа
- •I. Введение
- •II. Адсорбция, проникновение, «раздевание» вируса
- •III. Транскрипция а. Последовательность синтеза рнк
- •2. Циклогексимид
- •3. Глюкозамин
- •IV. Синтез вирусных белков
- •2. Белок нуклеокапсида
- •3. Неструктурные белки
- •4. Мембранный м-белок
- •5. Гемагглютинин
- •VI. Синтез липидов
- •VII. Сборка (см. Также гл. 2)
- •IX. Неправильные формы размножения
- •Культивирование вирусов гриппа человека в лабораторных условиях, круг хозяев среди лабораторных животных и выделение вируса из клинического материала
- •I. Введение
- •II. Культивирование вирусов в лабораторных условиях
- •1. Продуктивная инфекция
- •2. Абортивная инфекция
- •3. Персистентная инфекция
- •4. Параметры инфекции
- •IV. Выделение вируса
- •Антигенная изменчивость вируса гриппа
- •I. Введение
- •II. Грипп в историческом аспекте (см. Также гл. 15)
- •III. Свойства генома вируса гриппа
- •IV. Субъединицы гемагглютинина
- •V. Механизм антигенного дрейфа
- •1955, 1956; Magill, 1955; Hamre et al., 1958). Эпидемиологиче
- •1956, 1957; Takatsy, Furesz, 1957), антигены постепенно за
- •VI. Механизм антигенных сдвигов (значительных антигенных изменении)
- •VII. Дополнительные доказательства,
- •2. Естественная передача вируса и селекция
- •3. Селекция и передача «нового» вируса гриппа в системе in vivo
- •1. Антигенные соотношения между вирусами гриппа человека, низших млекопитающих и птиц
- •2. Круг хозяев
- •Иммунология гриппа
- •I. Введение
- •II. Проявления иммунитета
- •1. Устойчивость к инфекции
- •2. Изменение заболевания
- •3. Передача вируса
- •2. Изменение заболевания
- •3. Передача вируса
- •4. Механизм действия антител к na
- •V. Влияние антигенного дрейфа на иммунитет
- •VII. «первородный антигенный грех»
- •VIII. Клеточный иммунитет и грипп
- •IX. Заключение
- •Грипп у человека
- •2. Инфекция, вызываемая вирусом гриппа а
- •3. Инфекция, вызываемая вирусом гриппа в
- •7. Изменения бактериальной флоры
- •8. Функция легких при неосложненном гриппе
- •9. Выделение больными вируса в окружающую среду
- •10. Интерферон
- •11. Продукция антител
- •1. Пневмония
- •2. Острые заболевания нижних дыхательных путей у детей
- •3. Обострение хронического бронхита
- •III. Экспериментальная гриппозная инфекция у человека
- •3. Продукция интерферона при заболевании
- •IV. Выводы и заключение
VI. Свойства изолированной нейраминидазы а. Состав аминокислот
В связи с тем что NA*, полученная при действии на вирно-ны SDS, после удаления детергента агрегирует «хвостами», вероятно, за счет их гидрофобных свойств (см. 20; Laver, Valentine, 1969), и поскольку известно, что эти части молекулы NA* отщепляются при лротеолизе (Lazdins et al., 1972; Wrigley et al., 1973), интересно сравнить общее число полярных и неполярных остатков для NA* типа N2 (X7/F1), полученной с помощью детергентного (Laver, Baker, 1972) и лро-теолитического (Kendal, Eckert, 1972) методов. Естественно, что более надежно было бы провести такое сравнение, используя данные, полученные одной группой исследователей, однако, к сожалению, таких результатов в настоящее время еще нет. Если считать, что полярными аминокислотными остатками являются лизин, гистидин, аргинин, асларагино-вая кислота, треонин, серии и глутаминовая .кислота, то среди 535 аминокислотных остатков (см. ранее) имеется 280 полярных для NA*, выделенной с помощью детергентного метода, и 264 полярных остатка для фермента, изолированного с помощью протеолиза, т. е. в последнем случае наблюдается дефицит 6% полярных остатков. Если в качестве неполярных остатков рассматривать пролин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин и суммарный цистеин, можно видеть, что в NA*, изолированной с помощью детергента, содержится 186 неполярных остатков, a NA*, полученная при действии протеолитического фермента, включает 171 неполярный остаток, т. е. в процессе обработки ферментом теряется 8% неполярных аминокислотных остатков. Таким образом, аминокислоты в области, которая теряется при лро-теолизе молекулы NA*, не являются в значительной степени более гидрофобными, чем аминокислоты, входящие в состав активной части молекулы. Вероятно, конформация шолипеп-тидной цепи гораздо -более важна для создания гидрофобного характера этой области, чем тип аминокислот, входящих в ее состав.
Число остатков лизина и аргинина представляет интерес в связи с изучением пептидных карт гидролизатов нейраминидазы, полученных с помощью трипсина. Kendal и Eckert (1972) определили, что в каждой субъединице содержится 50,1 остатка лизина и аргинина, Layer и Baker дают величину 57,0 остатков. Данные по общему числу цистеиновых остатков этих авторов также существенно; отличаются. Kendal и Eckert (1972) определили 21 остаток: цистеина,.Laver и Baker (1972) — 14. Эти исследователи нашли также различное число метиониновых остатков:: для одного и того :же типа нейраминидазы Kendal и Eckert (1972) приводят величину 9,3, a Laver и Baker (1972) —5,9. Содержание остатков метиони-на в нейраминидазе важно для исследования структуры этого фермента, с , помощью его расщепления цианидом'брома,
которое происходит .по остаткам метионина. Основываясь на работе Kendal и Eckert (1972), можно предположить, что в результате такого расщепления образуется 9—10 фрагментов, а на основании работы Laver и Baker (1972) таких фрагментов должно наблюдаться 6 или 7. Для разрешения этого противоречия требуются дополнительные исследования по определению состава аминокислот.
Очень мало известно об углеводной части нейраминидаз-■ного гликопротеида. По Kendal и Eckert (1972), в молекуле фермента содержится 5,7 остатка глюкозамина. Lazdins и соавт. (1972) сообщили о потере при выделении нейраминида-зы с помощью протеолитических ферментов в области макромолекулы с высоким содержанием глюкозамина.
Б. АМИНОКИСЛОТЫ АКТИВНОГО ЦЕНТРА
Некоторые исследователи пытались определить природу аминокислотных остатков, входящих в активный центр NA*, однако полученные результаты были неоднозначны. Hoyle (1969) привел доказательства присутствия остатков тирозина и гиетидина в активном центре и не сделал 'каких-либо определенных заключений об остатках цистеина, метионина, триптофана, аргинина и лизина. С другой стороны, Bachmayer (1972), проведя исследование с N-бромсукцинимидной модификацией, с большой уверенностью указывает на наличие в активном центре триптофана. Изолированная с помощью проназы NA* вируса гриппа типа А2 (N2) полностью теряла свою активность после обработки N-бромсукцинимидом. Субстраты NA*, такие, как сиалиллактоза или фетуин, предохраняют фермент от подобного рода инактивации.
В. ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКАЯ ТОЧКА
Изоалектрическая точка была определена для NA*, полученной как протеолитическим (Neurath et al., 1970; Kendal et al., 1973), так и детергентным (Neurath et al., 1970; Grego-riades, 1972) методами. Neurath и соавт. (1970), Kendal и соавт. (1973) обнаружили большие различия в изоэлектри-ческих точках NA* типа N2 в зависимости от того, протеолитическим или детергентным методом был получен фермент. Gregoriades (1972) очищала NA* типа N1 (WSN) с помощью неионных детергентов и получила гомогенный препарат с изоэлектричеокой точкой pi 6,0. Kendal я соавт. (1973) обнаружили при изоэлектрическом фокусировании NA* типа N2 по крайней мере 6 пиков в пределах pi от 5,2 до 6,5 с основными пиками в области 5,5—5,8. В обоих случаях изоэлектрическая точка была слегка сдвинута в кислую область. Денатурированная NA* (Kendal et al., 1973) имела изоэлектрическую точку на 1,5—2,0 единиц рН ниже, чем нативный фермент, что указывает на возможное конформационное маскирование в нативной молекуле NA* большого количества боковых карбоксильных групп. Для NA*, выделенных из штаммов A2/Aichi/68 и B/Mass/66, Neurath и соавт. (1970) обнаружили пики pi в пределах рН от 5 до 9. Это указывает на то, что изоэлектрическая точка у вирусной NA* ближе к нейтральным значениям рН, чем у NA* Clostridium perfringens (pi 4,95) или Vibrio cholerae (pi 4,80), которые имеют фиксированные значения изоэлектрических точек. Neurath и соавт. (1970) не использовали детергент в опытах по электрофокусированию, хотя сама NA* была получена из вирионов с помощью детергента и в связи с этим возможным объяснением гетерогенности изоэлектрической точки может быть эффект агрегации. Gregoriades (1972) получила фиксированную изоэлектрическую точку при рН 6,0 для NA*, изолированной с помощью детергента в присутствии в среде неионных детергентов. Можно ожидать, что препарат NA*, выделенный с помощью обработки протеолитическими ферментами, гетерогенен за счет возможной множественности мест разрывов полипептидной цепи. Однако Kendal и соавт. (1973) обнаружили гетерогенность NA* даже после того, как отделили индивидуальный пик после изоэлектрофокусировки и снова нанесли его на фокусирующую колонку.