5. Антигенная гомогенность субъединиц на

Как было указано выше, активный гемагглютинин включает более одной субъединицы НА. Это наблюдение совместно с тем экспериментальным фактом, что для некоторых вирусных штаммов в составе [гемагглютинина обнаруживается несколько различных антигенных центров, важен для выяснения вопроса о том, содержит ли индивидуальный вирусный штамм субъединицы НА с существенно различными последовательностями аминокислот. Этот вопрос имеет особое значение для вируса гриппа в связи с фрагментарностью его генома (см. гл. 6). Предполагалось, что при упаковке случайным образом фрагментов вирусной РНК (может произойти образование вирусных частиц с наличием экстракопий сегментов генома (Compans et al., 1970a). Поскольку в этом случае вирусные частицы были бы частично диплоидными, один вирусный штамм мог бы содержать генетическую информацию для синтеза двух различных типов субъединицы НА, если обе аллели пройдут через несколько циклов вирусной репродукции.

Один из способов выяснить, содержит ли вирусная частица один или несколько типов субъединиц НА, состоит в сравнении количества пептидов, обнаруживаемых с помощью тр'илтичеекого пептидного картирования субъединиц НА, с количеством пептидов, рассчитанным на основе содержания в субъединицах остатков лизина и аргинина. Это сравнение не может быть осуществлено в настоящее время, поскольку изучение цельной молекулы НА с помощью метода пептидных карт еще не проводилось.

Другой подход к решению этого вопроса состоит в использовании специфических антисывороток для выяснения того, разделены ли антигенные детерминанты пространственно. Используя этот метод, Laver и соавт. (1974) показали, что антисыворотка, приготовленная против одной из двух детерминант, 'ассоциированных с субъединицами НА, преципи-тирует обе детерминанты. Эти эксперименты являются первым аргументом в пользу пространственной связанности антигенных детерминант (т. е. локализация их на одной и той же субъединице НА). Опыты Laver и соавт. указывают также на то, что использованные штаммы не синтезируют двух различных в антигенном отношении субъединиц НА.

В. СТРУКТУРА «ШИПОВ» ГЕМАГГЛЮТИНИНА

1. Моновалентный гемагглютинин

Изолированные субъединицы НА с молекулярной массой 80 000 не обладают гематглютияирующей активностью. Наименьшей по размерам активной молекулой является олиго-мер, сформированный либо субъединицами НА, либо продуктами их расщепления—HAi и НА2. Этот моновалентный НА*1 был впервые изолирован из вириона с помощью SDS (Laver, 1964; Laver, Valentine, 1969). Он адсорбировался на эритроцитах, но не вызывал агглютинации. Гемагглютинин в присутствии SDS имел коэффициент седиментации, равный приблизительно 7,5S (Laver, Valentine, 1969), и представлял собой палочкообразные частицы размером около 4-14 нм. Морфология этих образований показана на 33 (см. гл. 10). Ранее предполагалось, что моновалентный НА* имеет молекулярную массу около 150 000 и состоит из двух субъединкц НА (Laver, Valentine, 1969). Эта точка зрения базировалась на размерах моновалентного НА*, полученных с помощью электронной микрооколии, на молекулярной массе субъединицы НА, измеренной с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии SDS, на величине коэффициента седиментации моновалентного НА. При этом считали, что удельный парциальный объем равен 0,73 ем3/г. Однако позднее было показано, что моновалентный НА* представляет собой, вероятно, тример. Молекулярная масса, определенная методом равновесной седиментации, оказалась равной приблизительно 215 000 i(Skenel, Charlwood, персональное сообщение). Эта величина примерно в 3 раза превышает величину молекулярной массы субъединицы НА. Кроме того, на электронных микрофото частично разрушенных вирусных частиц иногда обнаруживаются треугольные структуры соответствующих размеров, которые, вероятно, являются

«шипами» НА*1, наблюдаемыми «в торец» (Laver, 1973; Schulze, 1972, 1973). Этот вид (Молекулы в настоящее время твердо установлен с помощью экспериментов, когда кристаллическую каталазу смешивали с высокоочищенным НА*, изолированным с помощью SDS из вируса гриппа штамма АО/Bel (см. 33, гл. 10). В этих условиях молекулы НА* упаковываются регулярным образом так, что фактически все частицы наблюдаются «в торец». При негативном контрастировании каждая молекула представляет собой треугольник, что также указывает на то, что «шип» НА* состоит из трех субъединиц.

Сравнение морфологии и размеров слоя «шипов» на поверхности интактно.го вируса с размерами изолированного НА* однозначно подтверждает точку зрения, что молекулы моновалентного НА* соответствуют отдельным «шипам», извлеченным из липидного двойного слоя. Высвобождение НА* может осуществляться либо за счет использования (Молекул детергента, которые могут взаимодействовать с гидрофобной областью «шипа», либо с помощью отщепления гидрофобной области от НА2-части субъединицы при протеолизе. Одна вирусная частица содержит 300—450 «шипов» (Schulze, 1973), которые присоединены к липидному слою за счет (взаимодействия с ним НА2-частей тримеров. Некоторые штаммы вируса, вероятно, содержат менее одной молекулы HAj на молекулу НА2 ;(Schulze, 1973). Таким образом, некоторые «шипы» вир иона, содержащие расщепленный НА, могут иметь дефектную структуру1.