6. Вопросы для самоподготовки:

6.1. Химический состав крови.

6.2. Физико – химические свойства крови.

6.3. Классификация и функции белков крови.

6.4. Характеристика хромопротеинов (строение, свойства, функции).

6.5. Гемсодержащие белки: строение, свойства, функции.

6.6. Гемсодержащие ферменты: строение, свойства, функции. Примеры гемсодержащих ферментов.

6.7. Нормальные и патологические производные гемоглобина, механизм их образования.

6.8. Кооперативный эффект на примере оксигенации гемоглобина. Факторы, влияющие на сродство гемоглобина к кислороду.

6.9. Метгемоглобин: строение, образование, свойства, реакции восстановления.

6.10. Метгемоглобинемии: определение, классификация, лечение. Какие энзимопатии могут быть причиной метгемоглобинемий?

6.11. Гемоглобинопатии (серповидноклеточная анемия) и талассемии.

6.12. Дыхательная функция крови.

6.13.Этапы синтеза гема.

6.14. Порфирии, диагностика порфирий, классификация.

6.15. Этапы распада гемоглобина.

6.16. Что такое прямой и непрямой билирубин: механизмы образования, свойства.

6.17. Диагностическое значение определения общего билирубина и его фракций в сыворотке крови.

6.18. Виды желтух и их дифференциальная диагностика.

6.19. Принцип метода определения билирубина в сыворотке крови.

7. Этапы занятия, контроль усвоения и распределения учебного времени.

Этапы занятия	Форма усвоения	Время
7.1.Постановка задачи. 7.2. Контроль исходного уровня знаний. 7.3.Разбор теоретического материала. 7.4. Приобретение практических навыков. 7.5. Подведение итогов занятия.	Излагает преподаватель. Тестовый контроль. Опрос студентов, дискуссия. Выполнение лабораторной работы. Излагает преподаватель.	5 мин. 10 90 70 5

Пример билета проверочного контроля:

1) Гемсодержащие ферменты: строение, свойства, функции. Примеры гемсодержащих ферментов.

2) Что такое прямой и непрямой билирубин сыворотки крови, место их образования и диагностическое значение.

Количественное определение в крови метгемоглобина (метод л.Э.Горна).

Цель работы: ознакомиться с методом количественного определения метгемоглобина в крови.

Мотивация: метгемоглобин образуется в результате реакции окисления железа в геме гемоглобина

HbFe⁺²  e ^ MetHbFe⁺³, т.е. MetHb образование идет под действием любых веществ с дефицитом e^. Этому способствует изменение конформации белковой части молекулы гемоглобина вследствие окисления ряда функциональных групп белка. В крови здорового человека содержание метгемоглобина не более 3%,что достигается равновесием между реакциями его образования и реакциями восстановления метгемоглобина. Из реакций восстановления наиболее значимыми являются следующие:

причем, НАДФН+Н⁺ образуется в ключевых реакциях ПФЦ

причем, НАДН+Н⁺ образуется в ключевых реакциях гликолиза.

причем, данная реакция является неферментативной. Если содержание метгемоглобина в крови превышает 3%- это называется метгемоглобинемия. Метгемоглобинемии делятся на врожденные и приобретенные. Врожденная метгемоглобинемия имеет место при энзимопатиях и гемобинозах. Энзимопатии – генетически обусловленные нарушения синтеза ключевых ферментов, участвующих в восстановлении МеtHb или ключевых ферментов ПФЦ, генерирующих восстановленный НАДФН. Гемоглобинозы делятся на гемоглобинопатии – генетически обусловленные нарушения строения белковой части Hb, возникающие в результате точечных мутаций, и талассемии – состояния развивающиеся в результате генетически обусловленного снижения синтеза какой либо из цепей Hb.

Приобретенные метгемоглобинемии делятся в зависимости от причины на эндогенные и экзогенные. Эндогенная метгемоглобинемия может возникать при различных патологических состояниях или заболеваниях, которые сопровождаются недостаточностью АОС (например: хронический энтерит, хронический гепатит, сахарный диабет и другие).

Экзогенная метгемоглобинемия возникает в случае избыточного поступления в организм человека окислителей, в том числе и лекарственных препаратов со свойствами окислителей. Так как MetHb теряет способность транспортировать О₂, метгемоглобинемия сопровождается признаками гемической гипоксии, которые обусловлены различными нарушениями в обмене веществ. Для профилактики и лечения осложнений необходимо контролировать уровень MetHb в крови.

Быстрым, нетрудоемким методом определения % содержания MetHb в крови является фотоколориметрический метод Л.Э.Горна. Этот метод удобен как для профилактического обследования людей, контактирующих с MetHb образователями, так и в гигиенических исследованиях при производственных и пищевых отравлениях некоторыми химическими соединениями (нитриты,

оксиды азота, пары нитробензола, нитроанилин, гексацианоферрат калия, хлорат калия и др.), при проведении токсикологических исследований на животных.

Принцип метода: метод основан на определении оптической плотности раствора, содержащего метгемоглобин. Метгемоглобин избирательно погло-щает свет с длиной волны 619 нм. Содержание метгемоглобина рассчитывают в процентах, принимая за 100% оптическую плотность раствора полностью окисленного (гексацианоферратом) гемоглобина. Эритроциты разрушают в аммиачной среде.

Ход работы:

В три пробирки отмеривают по 7,3 мл 0,25% раствора аммиака. В две пробирки вносят по 0,2 мл крови, взятой у крысы до затравки. Первая пробирка содержит HbO₂ (100%). Во вторую пробирку добавляют 1 каплю насыщенного раствора K₃Fe(CN)₆, принимая ее за эталон со 100% содержанием MetHb. В третью пробирку отмеривают 0,2 мл крови крысы, отравленной нитритом натрия или другими метгемоглобинообразователями, и определяют в этой крови MetHb.

Пробы оставляют стоять в течение одного часа при комнатной температу-ре, затем растворы фотометрируют, определяя их оптическую плотность. Условия колориметрии: светофильтр красный (длина волны 610 нм), кювета - 10 мм, сравнение против воды.

Для расчета процентного содержания метгемоглобина в исследуемой пробе используют формулу:

Х% MetHb = (D MetHb оп – D HbO₂)  100

D MetHb 100% – D HbO₂

DHbO₂ – оптическая плотность раствора, не содержащего метгемоглобин (кровь, взятая до затравки крысы);

DMetHb100%. – оптическая плотность раствора, содержащего метгемо-глобин в максимальной концентрации;

DMetHbоп – оптическая плотность раствора, содержащего метгемоглобин в неизвестной концентрации (кровь крысы, затравленной нитритом).