10. Методика количественного подсчета эритроцитов и лейкоцитов в крови взрослого человека.

Для подсчета количества указанных клеток крови чаще используют счетные камеры и электронно-счетные приборы. При подсчете числа клеток крови применяют различные счетные. Наибольшее распространение получила счетная камера Горяева. Счётная камера представляет собой толстое предметное стекло, в средней части которого имеются четыре желобка. Между ними образуются три узкие пластинки. Средняя пластинка ниже боковым на 0.1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от желобка расположены сетки. Так как высота боковых пластинок на 0.1 мм больше средней, то при наложении на них покровного стекла над сеткой образуется камера глубиной в 0.1 мм. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15 x 15). Каждый третий квадрат разделён дополнительно поперечными и продольными линиями на 16 маленьких квадратиков. Таких больших квадратов, разделённых на маленькие, в сетке 25.

С торона маленького квадратика равняется 1/20 мм, площадь 1/20 * 1/20 – 1/400 мм²; так называемый «объём малого квадратика» равен 1/400 * 1/10 = 1/4000 мм³.

Для разбавления крови пользуются смесителями. Смеситель представляет собой пипетку с ампулообразным расширением. В ампуле находится стеклянная бусинка для наилучшего размешивания крови. На капилляре нанесены две метки: 0,5 и 1; третья метка стоит за ампулообразным расширение: на смесителе для эритроцитов – 101, на смесители для лейкоцитов – 11. Для разбавления крови при подсчёте эритроцитов используют 3% раствор хлорида натрия, в котором эритроциты сморщиваются; для подсчёта лейкоцитов применяют 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовой синью. Кислота разрушает оболочки форменных элементов, а краска окрашивает ядра. При этом эритроциты становятся невидимыми и не мешают подсчёту лейкоцитов. В смеситель для эритроцитов насасывают кровь до отметки 0,5, а затем переносят в раствор хлорида натрия и насасывают его до метки 101 (т.е. разводят в 200 раз). Кровь в смеситель для лейкоцитов также набирают до отметки 0,5, а затем уксусную кислоту до отметки 11 (т.е. разводят кровь в 20 раз).

Далее берут заполненный смеситель для эритроцитов и встряхивают его. Затем наносят небольшую капельку на сетку камеры и плотно закрывают её покровным стеклом. Излишек раствора при этом стекает в желобки. Заполнив камеру, ставят её под микроскоп, и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчёту. Подсчиты­вают эритроциты в левом верхнем большом квадрате (раз­деленном на 16 маленьких квадратиков), а затем еще в 4 больших квадратах по диагонали сетки (всего в 5 больших квадратах). Подсчет клеток в боль­шом квадрате начинают с левого верхнего маленького квадратика, а далее перехо­дят во 2, 3 и 4-й квадратики. После верхнего ряда считают эритроциты в ниже­расположенном ряду, на­чиная с 1-го правого квадра­тика и т. д. Эритроциты внутри маленьких квадрати­ков, а также на верхней и левой сторонах большого квадрата сосчитывают, а эритроциты на нижней и пра­вой сторонах не учитывают (правило Егорова). Подсчитав таким образом число эритроцитов (А) в 5 больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадратике (А/80). Зная, что объём части камеры над одним маленьким квадратиком 1/4000 мм³, умножают найденное число на 4000. Получается число эритроцитов в 1 мм³ разведённой крови. Умножив на разведение – 200, получают количество эритроцитов в 1 мм³ цельной крови. Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая:

Для получения точных результатов при подсчёте лейкоцитов подсчёт производят в 25 больших квадратах, что составляет 400 маленьких квадратиков. Формула для вычисления количества лейкоцитов в 1 мм³ цельной крови: