6. Методика регистрации величины потенциала покоя нейрона.
При образовании потенциала покоя внутренняя сторона мембраны заряжена отрицательно, так как ионы калия по градиенту концентрации выходят через каналы утечки, а наружная сторона мембраны – положительно.
Чтобы измерить потенциал покоя и тем более проследить его изменения, вызываемые каким-либо воздействием на клетку, применяют технику внутриклеточных микроэлектродов. Микроэлектрод устанавливают над исследуемым объектом, а затем при помощи микроманипулятора - прибора, снабженного микрометрическими винтами, вводят внутрь клетки. При удачном введении микроэлектрода мембрана плотно охватывает его кончик, и клетка сохраняет способность функционировать в течение нескольких часов, не проявляя признаков повреждения.
Микроэлектрод является активным электродом (референтным). Электрод сравнения (индифферентный) обычных размеров погружают в нормальный солевой раствор, в котором находится исследуемая ткань.
До прокола мембраны микроэлектродом разность потенциалов между активным и индифферентным электродом равна нулю. Kак только микроэлектрод прокалывает поверхностную мембрану клетки, регистрируется разность потенциалов между раствором, омывающим клетку, и содержимым клетки, равная потенциалу покоя клетки. Продвижение микроэлектрода внутри протоплазмы или изменение положения электрода внутри клетки на показаниях вольтметра не сказываются. После прокола микроэлектродом мембраны на противоположной стенке клетки от входа в клетку электрода разность потенциалов вновь не регистрируется. Это свидетельствует о том, что разница потенциал действительно определяется между цитоплазмой и окружающим клетку наружным раствором.
7. Методика Определения групп крови в системе ав0. Правило переливания крови.
Определение группы крови с использованием изогемагглютинирующих (стандартных) сывороток. Группы крови определяют путем постановки реакции агглютинации крови реципиента (человека, которому переливают кровь) со стандартными сыворотками I–IV групп крови, полученных от доноров. Стандартные сыворотки содержат только агглютинины соответствующих групп. Сыворотки отличаются друг от друга по цветам.
На пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных сывороток соответствующих групп. Рядом с каждой каплей сыворотки наносят маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови, соблюдая соотношение 10:1. Капля вносимой в сыворотку крови должна быть меньше объема капли сыворотки, чтобы не снизить титра содержащихся в них агглютининов. Смешивают каплю сыворотки с каплей крови индивидуальной чистой стеклянной палочкой, затем, периодически покачивая пластинку, наблюдают за ходом реакции в течение 5 мин.
Агглютинация начинается в течение первых 10–30 с, однако наблюдение следует вести до 5. Через 3 мин в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения 5 мин.
Определение группы крови перекрестным способом проводится одновременно при помощи изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов. При этом способе определяют наличие или отсутствие агглютиногенов и, кроме того, при помощи стандартных эритроцитов устанавливают наличие или отсутствие групповых агглютининов.
Для определения групповой принадлежности крови применяют также стандартные реагенты — моноклональные антитела (цоликлоны) (анти-А и анти-В), реагент содержит краситель (розовый— для антител анти-А, синий— для антител анти-В). Моноклональные анти-А, анти-В, анти-АВ антитела принадлежат к иммуноглобулинам класса М.
Определение групп крови антителами анти-А и анти-В имеет ряд преимуществ по сравнению с определением изогемагглютинирующими сыворотками: обеспечиваются более высокие качество агглютинации, достоверность и надежность результатов, заметно упрощается процедура определения и сокращаются сроки реакции (наступает уже в первые 1–2 с).
Компоненты крови должны переливаться только той группы системы АВ0 и той резус-принадлежности, которая имеется у реципиента.
По жизненным показаниям:
При отсутствии одногруппных по системе АВ0 компонентов крови (за исключением детей) допускается переливание резус-отрицательной крови I группы(отмытой) рецепиенту с любой другой группой крови в количестве до 500 мл.
Резус-отрицательная отмытая эритроцитарная масса от доноров II и III групп могут быть перелиты рецепинту с IV группой, независимо от его резус-принадлежности.
При отсутствии одногруппной плазмы рецепиенту может быть перелита плазма IV группы.