19. Санитарно-бактериологическое исследование почвы

Краткий санитарно-микробиологический анализ почвы включает определение количества МАФАнМ в 1 г; коли-титра почвы; в отдельных случаях в почве определяют наличие возбудителей сибирской язвы, для исключения старых сибиреязвенных захоронений. Например, при строительстве детских оздоровительных лагерей, новых животноводческих помещений и т. д.

Отбор проб почвы. На обследуемой территории до 1 тыс. м3 выделяют два участка по 25 м2 каждый: один участок выбирают вблизи, другой - вдали от источника загрязнения. С каждого отбирают среднюю пробу, составленную из 5 образцов, взятых по диагонали. Образцы берут на глубине до 20 см, при исследовании почвы скотомогильников - ниже глубины захоронения не менее чем на 25 см. 97 Пробы отбирают стерильной железной лопатой или специальным буром в стерильные широкогорлые банки, которые закрывают ватными пробками. К банке приклеивают этикетку с датой и номером образца. Масса каждого образца должна быть 200-300 г, а смешанного - не менее 1 кг. Отобранные пробы почвы направляют в лабораторию и исследуют сразу же или не позднее 12-18 ч при обязательном хранении в холодильнике.

Определение количества МАФАнМ в 1 г почвы методом серийных разведений. В производственных лабораториях в колбу емкостью 500 мл наливают 270 мл стерильной водопроводной воды и вносят 30 г исследуемой почвы, затем колбу с содержимым встряхивают в течение 10 мин. Из полученного разведения почвы 1:10-1 готовят последующие 10-кратные разведения: для чистых почв от 1:10-2 до 1:10-4 , для загрязненных - до 1:10-6 и больше. Из двух последних разведений почвы (10-5 и 10-6 ) берут по 1 мл и переносят в стерильные чашки Петри (не менее двух чашек на каждое разведение), которые заливают 13-15 мл расплавленного и охлажденного до температуры 50 °С МПА, тщательно перемешивают (метод горячей заливки). Посевы культивируют в термостате 24-48 ч при температуре 30 °С. Учету подлежат чашки Петри, в которых выросло от 30 до 300 колоний. Колонии считают в каждой чашке отдельно, определяют среднеарифметическое число по двум чашкам. Полученное число умножают на степень разведения исследуемой почвы и получают число бактерий в 1 г почвы. Результаты выражают в «колонии образующих единицах» - КОЕ/мл, г.

Определение коли-титра почвы методом бродильных проб и использованием среды Кесслера.

Исследования проводят в три этапа.

1. Готовят следующие разведения: для чистых почв - от 1:10-1 до 1:10-4 ; для загрязненных - от 1:10-3 до 1:10-6 . После тщательного перемешивания 1 г почвы по 1 мл получен ной суспензии из различных разведений переносят в пробирки со средой Кесслера с поплавками. Посевы культивируют при температуре 43 °С в течение 48 ч (при такой температуре дает рост Е.coli только теплокровных).

2. Просматривают посевы на среде Кесслера. Для установления показателя коли-титра почвы находя г пробирку с наибольшим разведением почвы, в результате посева которой появились признаки брожения. Из пробирок с помутнением и газом делают высев на агар Эндо штрихом. Посевы сутки культивируют при 37 °С.

3. Исследуют колонии, выросшие на среде Эндо. Для этого выбирают изолированные колонии, типичные для бактерий БГКП, готовят из них мазки, красят по Граму, микроскопируют. При обнаружении в мазках коротких грамотрицательных палочек проводят высев на среду Кесслера для подтверждения газообразования в чистой культуре.

Особую трудность представляет выделение сибиреязвенных спор из почвы, т.к. в ней находится огромное количество различных микроорганизмов, в том числе спорообразующих сапрофитных аэробов. Существующие бактериологические методы не всегда позволяют выделить возбудителя сибирской язвы из почвы. Основная трудность состоит в отделении спор от частиц почвы.

Из многих известных методов более надежным является метод предварительной подготовки пробы почвы по следующей технологии:

1. 100 г исследуемой почвы заливают 5-10-кратным объемом стерильного фосфатного буфера или воды;

2. шуттелируют взвесь в течение 20-30 мин, с последующим 5-8-минутным отстаиванием;

3. проводят фильтрование через 2-3 слоя марли;

4. прогревают полученную суспензию в водяной бане в течение 30 мин при температуре 70 °С для уничтожения сопутствующей вегетативной микрофлоры;

5. переносят суспензию на поверхность МПА в чашках Петри для получения изолированных колоний, а из них чистой культуры;

6. полученной культурой заражают 5-10 белых мышей подкожно в дозе 0,1- 0,2 мл; проводят вскрытие павших мышей и выделяют чистую культуру возбудителя сибирской язвы из органов трупа.