19. Посев и культивирование микроорганизмов

Культуральные свойства – рост микроорганизмов на питательных средах.

Посев – это внесение микробов из исследуемого материала в стерильную питательную среду.

Пересев – перенос культуры микроба с одной питательной среды на другую – новую питательную среду.

Жидкий материал для посева берут бактериологической петлей или пастеровской пипеткой.

При посеве плотного материала чаще пользуются бактериологической петлей. Все манипуляции, связанные с посевом и пересевом микробов, производят над пламенем горелки. Бактериологическую петлю прокаливают над пламенем непосредственно перед взятием материала, а затем ее охлаждают. После окончания посева петлю прожигают повторно для уничтожения находящихся на ней микробов.

Техника посева на поверхность плотной питательной среды в чашках Петри Посев бактериологической петлей – левой рукой приоткрывают чашку Петри, бактериологической петлей посевной материал наносят на поверхность среды у края чашки, избыток снимают, проколов петлей агар, а оставшийся материал распределяют параллельными штрихами по стерильной поверхности среды. Петлю после посева фламбируют в пламени горелки (рисунок 48).

Посев шпателем – материал наносят на поверхность среды бактериологической петлей или пастеровской пипеткой, а затем стеклянным или металлическим шпателем тщательно втирают его по всей поверхности агара. При этом левой рукой придерживают слегка приоткрытую крышку и одновременно вращают чашку. После посева металлический шпатель фламбируют, а стеклянный помещают в дезинфицирующий раствор.

Посев тампоном – тампон с исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды. После посева тампон помещают в дезинфицирующий раствор.

Посев отпечатком – в лабораторной практике допускается проводить посев кусочком пробы (лимфатический узел, кусочки паренхиматозных органов и др.) путем нанесения отпечатков разными сторонами образца на поверхность питательной среды. Предварительно каждую пробу погружают на 2-3 минуты в спирт, затем обжигают поверхность. После этого стерильными ножницами из глубины различных участков пробы вырезают кусочки размером не менее 2×1,5×2,5 см, которыми и производят посев.

Метод посева «газоном» - 1 мл исследуемого материала (жидкая бульонная культура или взвесь микробов на физиологическом растворе) наносят пипеткой на поверхность среды. Избыток материала отсасывают пастеровской пипеткой и вместе с ней помещают в дезинфицирующий раствор.

Техника посева на скошенный агар. Пробирку берут в левую руку пробку из пробирки вынимают мизинцем правой руки, прижав ее к ладони. При этом нельзя касаться пальцами той части пробки, которая входит в пробирку. Петлю с исследуемым материалом опускают на поверхность питательной среды у дна пробирки и скользящими движениями делаю посев штрихом снизу вверх. После пересева горлышко пробирки обжигают в пламени и пробирку закрывают пробкой (рисунок 50). Техника посева на жидкую среду Петлю с находящимся на ней материалом погружают в питательную среду. Если материал вязкий и с петли не снимается, его растирают по стенки пробирки (рисунок 51).

Техника пересевов культур микробов Культуру микроорганизма, выращенную на питательной среде, с целью изучения культурально-биохимических свойств пересевают на другие среды. При этом в левую руку берут две пробирки: с культурой микроба, из которой производится пересев и со стерильной питательной средой. Пересев делают бактериальной петлей, которую держат в правой руке. Мизинцем и безымянным пальцем правой руки, извлекают одновременно две пробки из пробирок. Горлышки пробирок обжигают в пламени горелки. Обожженную петлю охлаждаю тприкосновением к внутренней стенки пробирки и погружают в культуру микроба, материал на петле переносят в стерильную среду. Затем обжигают горлышки пробирок, одновременно закрывают их пробками и ставят в штатив.

Все посевы подписывают и помещают в термостат при температуре 37° С на сутки, за исключением посевов в МПЖ, который выдерживают при комнатной температуре или в термостате при 22°С в течение трех и более суток.

В жидкой средерост микроорганизмов проявляется либо равномерным помутнением за счет увеличения числа бактериальных клеток, в основном подвижных или продуктов обмена бактерий; либо образующимся осадком (в этом случае среда остается прозрачной). Осадок может быть рыхлый, легко разбивающийся при встряхивании пробирки, или слизистый, поднимающийся в виде «косички», «смерчика», а также в виде сплошной массы на дне пробирки или мелких крупинок, располагающихся на стекле пробирки. Есть виды микроорганизмов, которые в силу особой потребности в кислороде воздуха растут на поверхности жидкой среды, образуя пленку и не вызывая помутнения бульона. Пленка может быть сухой и слизистой, гладкой и складчатой. В ряде случаев бактериальные культуры дают одновременно помутнение среды, обильный осадок и пристеночное кольцо на поверхности.

На плотной средекультуральные свойства определяют по характеру развивающихся колоний. При внесении на поверхность среды большого количества бактериальных клеток наблюдают сплошной рост микробной массы. При высеве небольшого количества клеток на среду с большой поверхностью из каждой бактериальной клетки в результате ее деления (размножения) формируется колония.

Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросших из одной клетки (клон клеток). В зависимости от того, где растет микроорганизм (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее), различают поверхностные, глубинные и донные колонии. Колонии в диаметре могут быть мелкие (1-2 мм), крупные (более 4 мм) или совсем маленькие в виде мельчайших росинок. Различают колонии сухие, влажные (сочные) или слизистые; гладкие, глянцевые, шероховатые с неровной поверхностью, с ровными или неровными краями, выпуклые, плоские и с углублением посередине, прозрачные и матовые, бесцветные или пигментированные.

При описании колоний учитывают следующие признаки:

- форму - округлая, амебовидная, неправильная и т.д.;

- размер - очень мелкие (точечные) (0,1-0,5 мм), мелкие (0,5-3 мм), средних размеров (3-5 мм) и крупные (более 5 мм в диаметре);

- поверхность – гладкая (S-форма) – микробные клетки располагаются, соприкасаясь своими боковыми поверхностями, шероховатая (R-форма)

- микробные клетки располагаются цепочками, которые, накладываясь друг на друга, обуславливают шероховатую поверхность и неровный край колоний, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная;

- профиль - плоский, выпуклый, конусовидный, кратерообразный и т.д.;

- прозрачность - тусклая, матовая, блестящая, прозрачная, мучнистая;

- цвет (пигмент) - бесцветная или пигментированная (белая, желтая, золотистая, красная, черная), особо отмечают выделение пигмента в среду с ее окрашиванием; - край - ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т.д.;

- структура - однородная, мелко или крупнозернистая, струйчатая; край и структуру колонии определяют с помощью лупы или на малом увеличении микроскопа, поместив чашку Петри с посевом на столик микроскопа крышкой вниз;

- консистенция - определяют прикасаясь к поверхности петлей, колония может быть плотной, мягкой, врастающей в агар, слизистой (тянется за петлей), хрупкой (легко ломается при соприкосновении с петлей).