15. Окраска спор, капсул бактерий, методы определения подвижности бактерий

Бактериальная спора, эндоспора – непостоянный структурный элемент бактериальной клетки, защищающая ее от неблагоприятных воздействий внешней среды. Споры представляют собой покоящиеся формы прокариот, выдерживающие влияние высокой температуры, ультрафиолетовое облучение, радиации, вакуума, высушивание, действие химических дезинфектантов, растворителей, различного рода токсических веществ и других неблагоприятных факторов, приводящих к гибели вегетативные клетки.

Для окрашивания спор используют специальные, сложные методы окраски, где используются контрастные краски.

Рассмотрим два метода окраски по Пешкову и Виртцу.

Метод Пешкова:

1.Мазок фиксируют, красят метиленовой синькой с подогреванием до кипения, смывают.

2.Докрашивают 1 % водным раствором фуксина Пфейффера в течение 10 секунд, смывают, высушивают.

В результате споры окрашиваются в синий цвет, а бактериальные клетки – в красный.

Метод Виртца:

1.На фиксированный мазок помещают фильтровальную бумагу, смачивают малахитовой зеленью при подогревании над пламенем горелки до появления паров в течение 5 минут.

2.Фильтровальную бумагу убирают, мазок остужают, промывают водой, докрашивают водным раствором сафранина 2 минуты, промывают водой, высушивают на воздухе и изучают под иммерсионной системой.

В результате споры окрашиваются в зеленый цвет, а вегетативные клетки - в красный.

Капсула – это непостоянный структурный элемент бактериальной клетки, она не является обязательной структурой бактериальной клетки: потеря её не приводит к гибели клетки

Для обнаружения капсул применяют специальные методы –, Ольта, Михина и др.

Метод Михина:

1.На фиксированный мазок наносят метиленовую синь на 5-7 минут и подогревают до появления паров.

2.Краску смывают водой, высушивают мазок на воздухе и смотрят в световой микроскоп под иммерсионной системой.

В результате бактериальная клетка окрашивается в синий, а сама капсула становится бледно розовый цвет.

Метод Ольта:

1.На фиксированный мазок наносят свежий2 %раствор сафранина на 5 –7

минут.

2.Препарат промывают водой, высушивают на воздухе и просматривают в световой микроскоп под иммерсионной системой.

Бактериальная клетка окрашивается в кирпично-красный, капсула в желто- оранжевый цвет.

Жгутики имеются только у подвижных микроорганизмов. Они очень тонкие, т.к. их величина за пределами разрешающей способности светового микроскопа, и они плохо окрашивают, их редко красят. Обычно исследуют на подвижность в живом состоянии. На подвижность исследуют микроорганизмы с опущенным конденсором и затемненном полем зрения. Используют метод висячей и раздавленной капли

Метод раздавленной капли. На центр предметного стекла наносят каплю исследуемого материала и накрывают покровным стеклом так, чтобы не появились пузырьки воздуха. Проводят исследование подвижности микроорганизмов под микроскопом. Недостатком данного метода является быстрое высыхание препарата, поэтому при длительном исследовании рекомендуется смазывать края покровного стекла вазелином.

Метод висячей капли. Используют специальные толстые предметные стекла с лункой в центре. Края лунки смазывают вазелином и на центр покровного стекла помещают каплю исследуемого материала. Предметное стекло накладывают на покровное так, чтобы капля находилась в центре лунки. Затем его осторожно переворачивают, и капля свисает в центре герметически закрытой лунки (так капля защищена от высыхания). Недостатком метода являются оптические дефекты из-за толщины стекла и наличия лунки.