17. Лабораторная аппаратура

Аппаратура:

Автоклав

Сухожаровой шкаф

Спиртовка, газовая горела

Установки для облучения

Термоста́т — прибор для поддержания постоянной температуры. Поддержание температуры обеспечивается либо за счёт использования терморегуляторов, либо осуществлением фазового перехода.

СТЕРИЛИЗАЦИЯ СУХИМ ЖАРОМ

Прокаливание(фламбирование) на огне, пламени горелки бактериологических петель, игл, пинцетов, скальпелей, предметных стекол.

Стерилизация сухим нагретым воздухом – сушильный шкаф, печь Пастера. Снаружи шкаф облицован теплонепроницаемым материалом, в верхней части - термометр. Внутри шкафа полочки для размещения стерилизуемого материала. Стерилизуют в течение 2 ч при 160°С. Воспламеняющиеся вещества, жидкости, питательные среды, резиновые предметы стерилизовать сухим жаром нельзя.

СТЕРИЛИЗАЦИЯ ВЛАЖНЫМ ЖАРОМ

Кипячение – в металлические стерилизаторы (иглы, шприцы, пинцеты, ножницы) раскладывают инструменты обернутые в 2-3 слоя марли. Наливают воду, чтобы полностью покрывала инструменты. В дистиллированную воду добавляют 2 % соду. Кипятят 20-25 мин. Водопроводную воду нельзя, она дает накипь. По окончании кипячения воду сливают, инструменты берут стерильным пинцетом.

Стерилизация текучим паром. Текучим называется насыщенный водяной пар (без примеси воздуха), имеющий давление 760 мм рт. ст. и температуру 100°С. Стерилизацию текучим паром осуществляют в паровом стерилизаторе или автоклаве при открытом спусковом кране в течение 15 - 60 мин в зависимости от объема раствора. Аппарат Коха представляет собой сосуд цилиндрической формы, сверху закрытый крышкой с отверстиями для термометра и для выхода пара. На дно сосуда помещена подставка с отверстиями, до уровня которой наливают воду. Предназначенные для стерилизации питательные среды ставят на подставку. Для уничтожения спор стерилизацию проводят дробно, а в промежутках среды хранят в термостате для прорастания спор.

Тиндализация -жидкость стерилизуется дробно при 60-65 °С пять дней подряд по 30 мин. Это используют для стерилизации сред, содержащих яичный белок, сыворотку крови, витамины. В первый день среды стерилизуют 2 часа, в последующие дни – по одному часу. В промежутках между прогреваниями среды хранят в термостате, чтобы споры проросли, а затем вегетативные клетки были уничтожены при следующем прогревании.

Пастеризация– это метод частичной стерилизации, предложенный Пастером для обработки пищевых продуктов, нестойких к действию высокой температуры (вино, пиво, молоко, соки). Продукт нагревают до 65-80 °С в течение 10-60 мин, затем резко охлаждают. При этом погибают вегетативные формы бактерий, а споры сохраняются. Последующее хранение при низкой температуре (4-5 °С) препятствует прорастанию спор и размножению оставшихся в продукте микробов.

Стерилизация паром под давлением, или автоклавирование. Автоклав представляет собой двустенный металлический котел с герметически закрывающейся крышкой. В пространство между стенками автоклава наливают воду, уровень которой в котле определяют по уровню ее водомерной трубки. Снаружи котел одет металлическим кожухом, в котором есть два манометра, показывающие давление пара внутри котла и между стенками.

Стерилизуемый объект помещают внутрь паровой камеры. Во время нагревания автоклава после закрывания крана необходимо следить за давлением, параллельно с возрастанием которого увеличивается температура пара.

Обычно стерилизация в автоклаве производится при 120 °С в течение 5-30 мин в зависимости от объема раствора. Этим гарантируется достаточно полная стерилизация независимо от вида микроорганизма. Таким способом стерилизуют посуду, фильтры, инструменты, водные растворы устойчивых к воздействию высокой температуры лекарственных веществ, перевязочный материал, а также трупный материал.

Фильтрация. Растворы, содержащие термолабильные вещества, удобнее всего стерилизовать фильтрованием. Неглазурованные фарфоровые цилиндры (свечи Шамберлена) применялись уже в лаборатории Пастера. Фильтрация проводится через мембранные бактериальные фильтры – диски из нитроклетчатки, вставленные в аппарат Зейтца и глубинные – свечи Шамберлена, Беркефельда. Некоторые из них выпускаются с различной величиной пор, что позволяет разделять организмы разной величины и формы.

Облучение. Для полной или частичной стерилизации применяют ультрафио-летовые, рентгеновские и гамма-лучи. В лабораторных условиях наибольшее значение имеют ультрафиолетовые лучи. В спектре УФ-ламп преобладает излучение в области 260 нм, поглощаемое нуклеиновыми кислотами и при достаточно длительном воздействии вызывающее гибель всех бактерий. УФ-облучение используется для частичной стерилизации помещений; при этом бактерии погибают очень быстро, а споры грибов, гораздо менее чувствительные к ультрафиолету, значительно медленнее. Бокс облучают 2-3 часа, лампы выключают не позднее, чем за 30 мин до начала работы.

Ионизирующее излучение, стерилизацию ультразвуком применяют для стерилизации питательных сред, пищевых продуктов и других компактных материалов.