Метод Пешкова:
Мазок фиксируют, красят метиленовой синькой с подогреванием до кипе- ния, смывают.
Докрашивают 1 % водным раствором фуксина Пфейффера в течение 10 се- кунд, смывают, высушивают.
В результате споры окрашиваются в синий цвет, а бактериальные клетки – в красный.
Метод Виртца:
На фиксированный мазок помещают фильтровальную бумагу, смачивают малахитовой зеленью при подогревании над пламенем горелки до появления па- ров в течение 5 минут.
Фильтровальную
бумагу убирают, мазок остужают, промывают
водой,
до-
крашивают
водным раствором сафранина 2 минуты,
промывают водой, высуши- вают на воздухе
и изучают под
иммерсионной
сис-
темой.
В результате споры окрашиваются в зеленый цвет, а вегетативные клетки - в красный.
Капсула – это непостоянный структурный элемент бактериальной клетки, она не является обязательной структурой бактериальной клетки:
потеря её не приводит к гибели клетки (рисунок Рисунок 23 - Бактериаль-
Ные капсулы.
В природе известны бескапсульные штаммы бактерий.
Представляет из себя слизистый слой над клеточной стенкой бактерии. Капсула может окружать как одну так и несколько бактериальных клеток.
Существуют бактерии,синтезирующие слизь на поверхности клеточной стенки в виде бесструктурного слоя полисахаридной природы. Слизистое вещество, окру- жающее клетку, по толщине часто превосходят толщину последней. Например, у сапрофитной бактерииLeiconostoc наблюдается образование одной капсулы для многих особей. Такие скопления бактерий, заключённые в общую капсулу назы- вают зооглеями.
Капсулы обеспечивают выживание бактерий, защищая их от механических повреждений, высыхания, токсических веществ, заражения фагами, а у патоген- ных форм от действия фагоцитов. У некоторых видов бактерий, в том числе и па- тогенных, капсула способствует прикреплению клеток к субстрату.
В зависимости от толщины слоя и прочности соединения с бактериальной клеткой различают видимую макрокапсулу (толщина 0,2 мкм) и микрокапсулу (толщина менее 0,2 мкм), обнаруживаемую лишь при электронной микроскопии или химическими и иммунологическими методами.
Макрокапсулу (истинную капсулу) образуют B.anthracis,Cl.perfringens, мик- рокапсулу– некоторые штаммыEscherichiacoli.
Вещество капсулы – муциноподобное, состоит из высокогидрофильных фиб- рилл, которые по химической структуре представляют из себя:
высокомолекулярные полисахариды, являющиеся производными наруж- ного слоя оболочки (гомо-или гетерополисахаридыу энтеробактерий);
полипептиды (B.anthracis);
гликопептиды (корд-фактор у M.tuberculosis);
рыхлый слизистый слой.
Капсулы образуются в организме хозяина и на питательных средах, содержа- щих белки. Капсулообразованию кроме нативного белка способствует щелочная среда и наличие углекислого газа. При попадании в иммунный организм капсулы, по-видимому, образуются очень медленно и довольно редко.
Синтез капсулы – сложный видоспецифический процесс у различных прока- риот. Биополимеры капсулы синтезируются на наружной поверхности цитоплаз- матической мембраны и выделяются на поверхность клеточной стенки в опреде- лённых специфических её участках.
Капсула – полифункциональный органоид, выполняющий важную биологи- ческую роль. Служит местом локализации капсульных антигенов, определяющих вирулентность, антигенную специфичность и иммуногенность бактерий. У пато- генных бактерий при утрате капсулы резко снижается вирулентность, например у бескапсульных штаммов B.anthracis.
В ветеринарной микробиологии выявление капсулы используют в качестве дифференциального морфологического признака.
Микрокапсулу и слизистый слой определяют серологическими реакциями: реакцией агглютинации (РА), антигенные компоненты капсулы идентифицируют при помощи реакции иммунной флюоресценции (РИФ) и реакции диффузной преципитации (РДП).
Капсулы легко окрашиваются и также легко обесцвечиваются, поэтому для ее выявления выделяют методы окраски, основанные на явлении метахромазии (это свойство клеток и тканей окрашиваться в цветовой тон, отличающийся от цвета самого красителя, а также свойство изменённых клеток и тканей окрашиваться в иной цвет по сравнению с нормальными клетками и тканями). Для окрашивания бактерий на наличие капсулы необходимо исследовать только свежий материал, так как капсулы быстро лизируются.
Для обнаружения капсул применяют специальные методы – Романовского- Гимзы, Гинзы-Бурри, Ольта, Михина и др., рассмотрим два из них: по Ольту и по Михину.