Тема 1.11.Санитарно-бактериологическое исследование воды.

Цель занятия: ознакомить студентов с правилами отбора проб из различных водоемов; изучить методы определения общей загрязненности воды.

Содержание:

1. Отбор проб воды.

2. Микробное число.

3. Коли-титр.

4. Коли-индекс.

Для отбора проб воды используют специальную одноразовую посуду или ем- кости многократного применения, изготовленные из нетоксичных материалов.

Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися (силиконовыми, рези-

новыми) пробками и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бу- маги). Многоразовая посуда должна выдерживать стерилизацию сухим жаром или автоклавированием.

Пробу отбирают в стерильные емкости с соблюдением правил асептики.Ем- кость открывают непосредственно перед отбором. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду запрещается.

С поверхности водоема или из крана водопровода пробу берут в стерильные флаконы с притертой пробкой емкостью 0,5 л, а с глубины - привязанным к шесту батометром или стеклянным сосудом с притертой пробкой, к которой прикреплен шнур. Водопроводную воду наливают после предварительного обжигания крана и стекания первых порций воды из него в течение 10-15 мин. Вода из колодца долж- на быть взята до начала пользования им или через 10-12 ч после прекращения пользования.

После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой. Отобранную про- бу маркируют и сопровождают актом отбора проб воды с указанием названия пробы, места забора, даты, цели исследования, куда направляется проба для ис- следования, подпись лица, взявшего пробу.

К исследованию проб в лаборатории необходимо приступить как можно бы- стрее (через 2 часа после забора). Доставка проб осуществляется в контейнерах- холодильниках при температуре 4-10 °С. В холодный период года необходимо предохранить пробы от промерзания и срок исследования увеличивается до 6 ча- сов с момента забора.

Лабораторная посуда должна быть тщательно вымыта, ополоснута дистилли- рованной водой и высушена. Пробирки, колбы, бутылки, флаконы должны быть заткнуты силиконовыми или ватно-марлевыми пробками и упакованы так, чтобы исключить загрязнение после стерилизации в процессе работы и хранения. Новые резиновые пробки кипятят в 2 % растворе соды 30 минут и 5 раз промывают водо- проводной водой (кипячение и промывание повторяют дважды). Затем пробки 30 минут кипятят в дистиллированной воде, высушивают, заворачивают в бумагу или фольгу и стерилизуют в паровом стерилизаторе. Резиновые пробки, использован-

ные ранее, обеззараживают, кипятят 30 минут в водопроводной воде с нейтраль- ным моющим средством, промывают в водопроводной воде, высушивают, монти- руют и стерилизуют. Пипетки со вставленными тампонами из ваты, чашки Петри должны быть уложены в металлические пеналы или завернуты в бумагу.Подго- товленную посуду стерилизуют в сушильном шкафу или автоклаве.

После выполнения анализа всю посуду обеззараживают в автоклаве при 130

°С 1 час. Пипетки кипятят в 2 % растворе соды. После ополаскивают дистиллиро- ванной водой.

Питьевая вода не должна иметь постороннего вкуса, запаха, несвойственной ей окраски, содержать ядовитые вещества и патогенные микроорганизмы. Обна- ружить патогенные микроорганизмы в воде ввиду их малой концентрации трудно. О безопасности воды в эпидемиологическом отношении судят по результатам ее санитарно-бактериологического исследования, которое включает определение двух микробиологических показателей: общего микробного числа и количества БГКП (определение коли-титра и коли-индекса).

Определение микробного числа. Это общее количество микробов, выросших на МПА при 37 °С за 24-48 часов. Пробу воды из артезианских колодцев центри- фугируют (для концентрирования бактерий); из открытых водоемов - делают 5 – 7 последовательных разведений 1:10. Из каждой пробирки берут по 1 мл и вносят в стерильную чашку Петри, заливают расплавленным МПА (45-50 °С). Осторожным вращением чашки равномерно перемешивают смесь и ставят в термостат (37 °С) на 24-48 ч. Подсчитывают колонии через лупу. Общее количество бактерий в 1 мл водопроводной воды не должно превышать 100, а открытых водоемов - не более 1000.

Определение титра кишечной палочки (коли-титра) воды. Это наименьшее количество воды, в котором при посеве обнаруживают хотя бы одну кишечную палочку. Для определения коли-титра используют бродильную пробу и метод мембранных фильтров. При бродильном методе пробу исследуемой воды в опре- деленных разведениях высевают на среду накопления, затем при наличии роста,

характерного для кишечной палочки, пересевают на дифференциально- диагностические среды и выявляют кишечную палочку.

Если коли-титр выше установленных норм, исследование повторяют. Для ус- тановления фекального загрязнения,посевы культивируют при43 °С для исклю- чения кишечной палочки холоднокровных, не растущей при этой температуре.

Метод мембранных фильтров. Мембранные фильтры № 2 или № 3, изготов- ленные из нитроклетчатки или нитрохлорвинила, хорошо промывают горячей во- дой. Исследуемую воду под давлением пропускают через фильтр не менее 333 мл для водопроводной, воды из открытых водоемов 0,1; 1,0 и 10 мл. Затем фильтры с соблюдением правил асептики переносят на плотную среду Эндо и помещают в термостат при 37 °С. Через 18-24 ч подсчитывают колонии кишечной палочки, их количество множают на 1000, полученный результат делят на объем профильтро- ванной воды, то есть определяют число кишечных палочек в 1 л воды - коли- индекс.

Микробиологические показатели для питьевой (водопроводной воды) норми- рованы ГОСТ 2874-73. Микробное число должно быть не более 100, коли-титр - не менее 300, коли-индекс – не более 3. Количество патогенов в чистой водопро- водной воде не допускается.

Вода артезианских скважин, распределяемая по водопроводам без очистки и дезинфекции, должна соответствовать следующим нормам: микробное число не более 100, коли-титр не менее 500, коли-индекс не более 2.

Вода открытых водоемов считается доброкачественной, если микробное чис- ло не более 1000, коли-титр не менее 111, коли-индекс не более 9.

В системе санитарно-микробиологического контроля качества питьевой воды различают текущий контроль, экстренный и контроль по эпидпоказаниям.

Текущий контроль питьевой воды по микробиологическим и паразитологиче- ским показателям осуществляется в рамках государственного и ведомственного санитарно-эпидемиологического надзора за качеством питьевой воды в соответст- вии с разработанными региональными программами на соответствующих терри- ториях.

Экстренный санитарно-микробиологический контроль питьевой воды осуще- ствляется ведомственными и производственными лабораториями в случае каких- либо внезапных нарушений или аварий в системе водоснабжения, в результате ко- торых происходит микробное загрязнение водопроводной воды в распределитель- ной сети.

Контроль воды по эпидпоказаниям производят лаборатории учреждений СЭН и ведомственных служб в случае возникновения подъема заболеваемости населе- ния кишечными бактериальными и вирусными инфекциями, уровень которой пре- вышает среднесезонные показатели, а также при вспышке или эпидемии водного происхождения.

Экстренный контроль питьевой воды, а также контроль по эпидпоказаниям предполагают более частые микробиологические исследования, чем установлено по программе.

Анализ результатов санитарно-микробиологического контроля проводится регулярно, а также по представлении месячных, квартальных, годовых отчетов ор- ганизациями, ответственными за подготовку питьевой воды.

При анализе вод источника и по этапам очистки исследуемый объем воды выбирают исходя из предполагаемого загрязнения для получения изолированных колоний и, соответственно, количественного результата. При обнаружении иско- мых бактерий их число пересчитывают на объем воды и выражают в числе коло- ниеобразующих единиц (КОЕ) бактерий или бляшкообразующих единиц (БОЕ) колифагов. При наличии показаний к исследованию питьевой воды на патогенные бактерии или вирусы поиск возбудителя определяется эпидемической ситуацией и его циркуляцией в объектах окружающей среды данного региона.