Определение гемолитических свойств
Проводят с целью определения вида и для диф- ференциации от непатогенных микробов на кровяном агаре (рисунок 61). При наличии у микроба гемоток- сина вокруг колонии образуется зона гемолиза. Раз- личают α-гемолиз, при котором вокруг колоний на-
блюдают непрозрачную зеленоватую зону свидетель- ствующую о неполном расщеплении гемоглобина
Рисунок 61 - Гемолиз во- круг колоний, растущих на агаре с кровью.
эритроцитов и β-гемолиз, характеризующийся полным растворением эритроцитов, зона вокруг колонии прозрачная. Например, патогенные стафилококки обладают β-гемолизом, непатогенные гемолизом не обладают. Исключением являются: воз- будитель сибирской язвы не имеет гемотоксина,непатогенные почвенные бацил- лы имеют гемотоксин.
Контрольные вопросы:
Что относится к культуральным свойствам микроорганизмов.
Что относится к биохимическим свойствам микроорганизмов.
Какой может быть характер роста микроорганизмов на плотных питатель- ных средах.
Каков может быть характер роста на жидких питательных средах.
Как определить протеолитическую активность микроорганизмов.
Как определить сахаролитическую активность.
Тема 1.9.Изучение действия антибиотиков,антисептиков и бактерио-
фагов на микроорганизмы.
Цель занятия: изучить антимикробный спектр действия антибиотиков; дей- ствие антисептиков и бактериофагов на микроорганизмы.
Содержание:
Действие антибиотиков на микроорганизмы.
Действие антисептиков на микроорганизмы.
Действие бактериофагов на микроорганизмы.
В настоящее время есть много антибиотиков, имеющих свой антимикробный спектр действия. Чувствительность микробов к антибиотику может снизиться или совсем исчезнуть за счет появления резистентных вариантов у данного вида мик- роба. Поэтому при назначении антибиотиков больным необходимо определить степень чувствительности к ним возбудителя с целью подбора самого эффектив- ного средства.
Метод диффузии антибиотиков в агар с применением дисков
Метод основан на формировании зоны задержки роста микроорганизмов во- круг бумажного диска, пропитанного антибиотиком, на плотной питательной сре- де.
Биологическая промышленность выпускает диски из фильтровального карто- на диаметром 6 мм, пропитанные растворами антибиотиков определенной концен- трации. Диски с различными антибиотиками отличаются друг от друга по цвету картона или кода, который представляет собой две-три буквы из названия анти- биотика, вытесненные на диске. Диски фасуют во флаконы по 100 штук. Учитывая гигроскопичность некоторых антибиотиков, на дно флакона помещают силика- гель, вещество, быстро поглощающее влагу и меняющий при этом свою окраску с синей на розовую. Изменение цвет силикагеля является показателем присутствия влаги во флаконе. Диски из флаконов, в которых силикагель окрашен в розовый цвет, использовать нельзя. После вскрытия флаконов диски можно хранить в ус- ловиях холодильника в течение срока. Указанного на этикетке набора. Перед ис- пользованием флаконы с дисками необходимо выдержать при комнатной темпера- туре в течение 1 часа для предотвращения образования конденсата на внутренней поверхности флаконов.
Для получения достоверных результатов используют стандартные среды, диски и условия проведения исследования.
Для определения чувствительности применяют следующие питательные сре-
ды:
среда АГВ (Андреева, Гивинталь, Гриднева, Ведьмина) – сухая готовая сре-
да, в состав которой входит питательный бульон, порошок агара, лизат кормовых дрожжей, крахмал растворимый, натрия фосфат двузамещенный;
диагностический агар ДОИ – рекомендованная ВОЗ сухая готовая среда. Для микроорганизмов, не растущих на обычных питательных средах, в среды до- бавляют 5 % дефибринированной крови.
Расплавленные среды разливают по 20 мл в стерильные чашки Петри. Глуби- на агарового слоя в чашках должна составлять 3-4 мм. После застывания агара их
подсушивают при комнатной температуре 30-40 минут с приоткрытыми крышка- ми. Готовые чашки со средой можно хранить при 10 °С не более 7-10 дней.
Для
посева используют 12-20 часовые агаровые
культуры исследуемых мик- робов,которые
смывают физиологическим раствором и
по стандарту мутности го- товят
одномиллиардную взвесь. Для посева
можно использовать также чистую 20-
часовую бульонную культуру.
На поверхность питательной среды наливают 1 мл взвеси культуры и покачиванием чашки равномерно распределяют ее по всей поверхности. Излишек жид- кости отсасывают пипеткой.
Приоткрытые чашки подсуши-
вают при комнатной температуре
10-15 минут.
Диски с различными анти-
Рисунок 62 - Тест на чувствительность бакте- рий к различным антибиотикам.
биотиками раскладывают стерильным пинцетом на поверхность засеянной среды на одинаковом расстоянии друг от друга и на расстоянии 2 см от края чашки. На одну чашку следует помещать не более 6 дисков для диффузии антибиотиков в агар чашки выдерживают в течение 2 часов при комнатной температуре, а затем помещают в термостат при 37 °С вверх дном.
Результаты учитывают через 16-18 часов по величине зоны задержки роста микробов вокруг диска (рисунок 62). Чашки помещают вверх дном на темную ма- товую поверхность так, чтобы свет настольной лампы падал на них под углом 45
°. Определяют диаметр зоны с помощью линейки, штангенциркуля или миллимет- ровой бумаги с учетом диаметра самого диска, с точностью до 1 мм. При диаметре зон в 15-25 мм микробы следует считать чувствительными к антибиотику, при зо- не до 15 мм – малочувствительны, отсутствие зон задержки роста указывает на нечувствительность культуры к данному антибиотику. При не резко очерченных краях зон или зонах с двойными контурами следует измерять диаметр зоны по
наиболее четкому контуру, не принимая во внимание мелкие колонии или едва заметный газон у края колонии.