Среды накопления (обогащения)

Среда Шустовой. К МПА добавляют 10 % 50 % водного раствора гипосуль- фита и 2 % раствора Люголя. Применяют для накопления бактерий паратифа.

Среда Раппопорт. К МПБ добавляют 1 % глюкозы, 10 % желчи и 1 % инди- катора Андрэде. Стерилизуют текучим паром.

Синтетические среды

Применяют для изучения метаболизма бактерий и других биологических особенностей. Их составля- ют из химически чистых растворимых в воде ве- ществ, в строго определенных количествах. Напри- мер, среда Сотона.

Для культивирования дрожжей и плесневых грибов используют среду Сабуро – на 100 мл воды

добавляют глюкозы - 4 г, пептона - 1 г, агара - 1,8 г. Стерилизуют автоклавированием (рисунок 48).

Контрольные вопросы:

1. Как готовят МПБ, МПА, как их стерилизуют.

Рисунок 48 - Рост плесне- выхгрибков на среде Са- буро.

2. Каково назначение специальных питательных сред.

3. Как учитывают расщепление микробом сахаров в цветных средах.

4. Каков состав средЭндо, Левина, Плоскирева.

5. На чем основан принцип использования среды Китта-Тароцци и висмут- сульфит агара.

6. Состав среды Сабуро.

7. Какие существуют среды накопления.

Тема 1.7.Посев и культивирование микроорганизмов. Методы выделения чистых культур микробов.

Цель занятия: освоить технику посева материала на питательные среды, тех- нику пересева,отвивки колоний;освоить методы выделения чистых культур аэробных и анаэробных микроорганизмов; освоить методы использования биоло- гических особенностей микроорганизмов: физический (термический) метод для выделения споровых микроорганизмов; химический метод на устойчивость неко- торых микроорганизмов к действию растворов кислот и щелочей; биологический метод заражения чувствительных лабораторных животных.

Содержание:

1. Посев и культивирование микроорганизмов.

2. Методы выделения чистых культур.

Культуральные свойства – рост микроорганизмов на питательных средах.

Посев – это внесение микробов из исследуемого материала в стерильную пи- тательную среду.

Пересев – перенос культуры микроба с одной питательной среды на другую –

новую питательную среду.

Жидкий материал для посева берут бактериологической петлей или пасте- ровской пипеткой. При посеве плотного материала чаще пользуются бактериоло- гической петлей.

Все манипуляции, связанные с посевом и пересевом микробов, производят над пламенем горелки. Бактериологическую петлю прокаливают над пламенем непосредственно перед взятием материала, а затем ее охлаждают. После оконча- ния посева петлю прожигают повторно для уничтожения находящихся на ней микробов.

Техника посева на поверхность плотной питательной среды в чашках Петри

Посев бактериологической петлей – левой рукой приоткрывают чашку Петри, бактериологической петлей посевной материал наносят на поверхность среды у края чашки, избыток снимают, проколов петлей агар, а оставшийся ма-

териал распределяют параллель- ными штрихами по стерильной по- верхности среды. Петлю после по- сева фламбируют в пламени го- релки (рисунок 48).

Посев шпателем – материал наносят на поверхность среды бак- териологической петлей или пас- теровской пипеткой, а затем стек- лянным или металлическим шпа-

телем тщательно втирают его по всей поверхности агара. При этом

Рисунок 48 - Посев на плотную питатель- ную среду в чашки Петри.

Рисунок 49 - Посев на плотную питатель- ную среду в чашки Петри шпателем.

левой рукой придерживают слегка приоткрытую крышку и одновременно враща- ют чашку. После посева металлический шпатель фламбируют, а стеклянный по- мещают в дезинфицирующий раствор (рисунок 49).

Посев тампоном – тампон с исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды. После по- сева тампон помещают в дезинфицирующий раствор.

Посев отпечатком – в лабораторной практике допускается проводить посев кусочком пробы (лимфатический узел, кусочки паренхиматозных органов и др.) путем нанесения отпечатков разными сторонами образца на поверхность пита- тельной среды. Предварительно каждую пробу погружают на 2-3 минуты в спирт, затем обжигают поверхность. После этого стерильными ножницами из глубины различных участков пробы вырезают кусочки размером не менее 2×1,5×2,5 см, которыми и производят посев.

Метод посева «газоном» - 1 мл исследуемого материала (жидкая бульонная культура или взвесь микробов на физиологическом растворе) наносят пипеткой на поверхность среды. Избыток материала отсасывают пастеровской пипеткой и вместе с ней помещают в дезинфицирующий раствор.

Пробирку берут в левую руку пробку из пробирки вынимают мизинцем правой руки, прижав ее к ладони. При этом нельзя касаться пальцами той части пробки, которая входит