Контрольные вопросы:

1. Чем отличается стерилизация от дезинфекции.

2. Как осуществляют стерилизацию текучим паром.

3. Что такое тиндализация. Для каких сред ее применяют.

4. Объяснить метод пастеризации.

5. В чем сущность дробного метода стерилизации.

Тема 1.6.Приготовление питательных сред.

Цель занятия: изучить требования к питательным средам классификацию пи- тательных сред, ознакомиться с составом, назначением простых, специальных, элективных и дифференциально-диагностических сред. Ознакомиться с приготов- лением питательных сред.

Содержание:

1. Требования, предъявляемые к питательным средам.

2. Состав питательных сред.

3. Классификация питательных сред.

Для культивирования микроорганизмов в лабораторных условиях применяют различные искусственные питательные среды. На них микроорганизмы выделяют, изучают, накапливают и хранят.

Питательные среды по своей сущности являются искусственной средой оби- тания микробов и поэтому должны соответствовать следующим требованиям:

• содержать основные питательные вещества, из которых строится мик- робная клетка:макроэлементы (азот,углерод,водород,кислород,фосфор,железо, калий, кальций, сера, магний), микроэлементы (кобальт, йод, марганец, молибден, цинк, медь и др.), витамины. Все элементы должны находится в легкоусвояемой для конкретного микроорганизма форме. В питательные среды добавляют амино- кислоты, органические кислоты, витамины, сахара, многоатомные спирты, белки, соли различных кислот и воду;

• иметь достаточную влажность (не менее 20 % воды), т.к. поступление веществ в микробную клетку осуществляется при помощи диффузии и осмоса;

• быть изотоничными, т.е. иметь концентрацию солей соответствующую концентрации солей в микробной клетке (для большинства микроорганизмов 0,5

%, для галлофилов – 3 %);

• быть нетоксичными для исследуемых микробов;

• обладать оптимальной для выращиваемого микроорганизма концентра- цией водородных ионов (рН). Питательные вещества могут усваиваться микроба- ми только при определенной реакции питательной среды, т.к. от этого показателя зависит проницаемость оболочки микробной клетки. Для большинства микроор- ганизмов оптимум роста наблюдается при рН 7,2-7,4;

• быть по возможности прозрачными, т.к. это облегчает изучение в них роста микробов;

• быть стерильными, чтобы была возможность размножать в них культуру только одного вида микроба.

Классификация питательных сред

Потребность в питательных веществах у различных микробов неодинакова, поэтому нет возможности создать для них универсальную питательную среду. На основании разных показателей питательные среды классифицируют следующим образом.

1. По консистенции: жидкие, плотные, полужидкие;

2. По происхождению - животного, растительного происхождения и синте- тические среды постоянного состава;

3. По назначению:

-обычные(простые)-для выращивания большинства микроорганизмов;

• специальные - для культивирования микробов, не растущих или плохо рас- тущих на обычных питательных средах;

• дифференциально-диагностические - употребляемые для определения родо- вых или видовых особенностей исследуемых бактериальных культур (гемолити- ческих, сахаролитических, протеолитических, редуцирующих и других свойств);

• элективные - для выделения микробов одного рода или вида из материала, содержащего смесь разных видов микроорганизмов, на которых одни виды хоро- шо растут, а другие не растут;

• среды обогащения (накопительные).

Основой многих питательных сред животного происхождения является мясная вода. Ее готовят из свежего нежирного говяжьего мяса, освобожденного от костей, фасций, сухожилий. Измельченное мясо (мелкие кусочки или фарш) за- ливают дистиллированной водой в соотношении 1:2 (на 1 кг мяса 2 л воды). Экс- трагируют 12-24 ч, кипятят 1,5-2 ч, фильтруют, добавляют дистиллированной воды до первоначального объема, разливают в бутыли, колбы, закрывают ватно- марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве.

Простые питательные среды Мясо-пептонный бульон (МПБ) - жидкая питательная

среда (рисунок 38). Для его приготовления к 1 л мясной во- ды добавляют 1 % пептона, 0,5 % химически чистой пова- ренной соли и кипятят. Мясная вода слабокислой реакции, поэтому МПБ подщелачивают – добавляют небольшое ко- личество 10-15 % раствора КОН или NaOH, кипятят 2-3

мин. МПБ фильтруют через бумажный фильтр, разливают по пробиркам, автоклавируют.

Рисунок 38 - МПБ.

Мясопептонный агар (МПА) - плотная пи- тательная среда (рисунок 39). К МПБ добавляют 2 % агар-агара (органическое вещество, полученное из морских водорослей)и кипятят до его расплавления, в горячем виде устанавливают рН, кипятят 5-10 мин,

фильтруют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки или колбочки, авто-

Рисунок 39 - МПА.

клавируют. После стерилизации горячие пробирки с агаром раскладывают на- клонно под углом 5-6°. При застывании образуется скошенная плотная поверх- ность.

Мясо-пептонный полужидкий агар готовят так же, как и МПА но агар-агара добавляют меньше – 0,2 %.

Мясо-пептонный желатин (МПЖ). К МПБ добавляют 10-20 % желатина (продукт, получаемый из клейдающих тканей животных), расплавляют и в горя- чем виде устанавливают нужную реакцию среды, пропускают через ватно- марлевый фильтр, разливают в пробирки, стерилизуют текучим паром дробно. На рисунке 40 представлены различные формы разжижения желатина.

Рисунок 40 - Формы расщепления желатина.

Молоко – натуральная естественная питательная среда. Цельное молоко обезжиривают центрифугированием, разводят водой 1:1, устанавливают рН 7,0-7,3 с помощью питьевой силы. Молоко стерилизуют дробно текучим паром 3 дня в автоклаве при 110 °С 20 мин. При изучении редуцирующих свойств микробов пе-

ред стерилизацией добавляют 2 % раствор метиленового синего из расчета 2 мл краски на 100 мл среды.