Определение сахаролитических свойств микробов

Свойство расщеплять углеводы и многоатомные спирты (сахара) присуще многим микроорганизмам. Под действием сахаролитических ферментов сахара расщепляются на альдегиды и кислоты. Конечными продуктами их расщепления являются углекислый газ и вода. Различные микробы обладают разной способно- стью расщеплять сахара. Одни микробы расщепляют сахара до конечных продук- тов, другие только до кислот. Эти свойства учитывают при определении вида микроба(рисунок 59).

Рисунок 59 - Биохимические свойства микроорганизмов.

В средах Гисса расщепление сахара до промежуточных продуктов (кислот) определяют по покраснению среды, до конечных продуктов (газов) – по накопле- ниюпузырьков газа в специальных газовичках,помещенных в среду.При отсутст- вии ферментации сахара рост микробов выражается в равномерном помутнении среды без изменений цвета.

В полужидком агаре с индикатором ВР (водный голубой или розовая ки- слота) о расщеплении сахаров до кислот судят по изменению цвета среды с серо- розового до голубого. Образующийся при расщеплении сахара газ накапливается в толще среды.

На среде Эндо в результате расщепления лактозы, входящей в состав этой среды, происходит восстановление цвета индикатора основного фуксина, в ре- зультате чего выросшие колонии микробов окрашиваются в красный цвет. Анало- гично учитывают результаты на средах Левина и Плоскирева. Лактозоположи- тельные колонии окрашиваются на этих средах в цвет индикатора: в фиолетовый или черный на среде Левина, в розовый на среде Плоскирева. Лактозоотрицатель- ные не окрашиваются.

В молоке при расщеплении микробом лактозы, т.е. при наличии у него фер- мента лактазы, происходит свертывание в результате накопления кислых продук- тов.

Определение окислительно-восстановительных ферментов

В культуре микробов важно определить наличие окислительно- восстановительных ферментов, связанных с функцией дыхания. Диагностическое значение имеет наличие у микробов оксидазной и каталазной активности, а иногда

– рецидирующей способности.

Определение оксидазы проводят несколькими методами, например по Кова- чу. В этом случае на поверхность колоний суточной агаровой культуры наносят несколько капель реактива Ковача, содержащего диметилпарафенилендиамин. Че- рез несколько секунд оксидазоположительные колонии окрашиваются в темно-

красный (пурпурный) цвет. Оксидазоположительная – синегнойная палочка, окси- дазоотрицательная – кишечная палочка, сальмонелла.

Определение каталазы. В культуру вносят 1-2 мл 3 % перекиси водорода.

При наличии у микроба каталазной активности происходит пенообразование в ре- зультате расщепления перекиси водорода под действием каталазы на кислород и воду. Каталазной активностью, например, обладают листерии и кампилобактеры. Не обладают – стрептококки.

Определение редуцирующих свойств

Редуцирующие свойства – способность бактерий восстанавливать одно со- единение в другое, например, соли азотной кислоты (нитраты) в соли азотистой (нитриты). Исследуемую культуру высевают на пита-

тельную среду, содержащую органическую краску (лакмусовою настойку, метиленовый синий, ней- тральный красный и др.). При наличии у микроба ферментов дегидраз происходит отщепление водоро- да от субстрата и присоединение его к краске, в ре-

зультате краситель восстанавливается и превращается в бесцветное соединение. По обесцвечиванию краски в присутствии микроба судят о редуцирующих свой-

Рисунок 60 - Определе- ние редуцирующих свойств микробов.

ствах исследуемой культуры (рисунок 60). Например, этим свойством обладают листерии и не обладает возбудитель рожи свиней, что учитывают при их диффе- ренциации.