Контрольные вопросы:
В чем особенности строения грибов.
Каковы особенности строения актиномицетов.
Как называются гифы, несущие спорангии.
Как называются гифы, несущие конидии.
Назовите видоизменения мицелия.
Чем характеризуется вегетативное размножение.
Чем характеризуется репродуктивное размножение.
Назовите классификацию грибов.
Какие болезни у животных могут вызыватьмикроскопические грибки.
Тема 1.5. Лабораторная аппаратура. Методы стерилизации.
Цель занятия: изучить разные методы стерилизации. Ознакомить студентов с физическим и механическим методами стерилизации. В зависимости от стерили- зуемого материала ставят задачу уничтожить микробы и не испортить стерили- зуемый материал.
Содержание:
Лабораторная аппаратура
Методы стерилизации
Стерилизация (лат. – sterilis, бесплодие) – обеспложивание, уничтожение па- тогенных и непатогенных микроорганизмов, их вегетативных и споровых форм.
Стерилизации подвергают питательные среды, стеклянную посуду (пробирки, пи- петки, колбы), инструменты, халаты. В основе действия стерилизации лежит спо- собность нарушения жизненных процессов микробной клетки: денатурация бел- ков, угнетение функции ферментных систем.
Применяют полную и частичную стерилизацию. При полной стерилизации уничтожаются вегетативные и споровые формы бактерий. При частичной – только вегетативные.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ СУХИМ ЖАРОМ
Прокаливание(фламбирование)
на огне,
пламени горелки бактериологиче- ских
петель, игл, пинцетов, скальпелей,
предметных стекол.
Стерилизация сухим нагретым возду- хом – сушильный шкаф, печь Пастера (ри- сунок 36). Снаружи шкаф облицован тепло- непроницаемым материалом, в верхней час- ти - термометр. Внутри шкафа полочки для размещения стерилизуемого материала.
Стерилизуют в течение 2 ч при 160°С. Вос-
пламеняющиеся вещества, жидкости, пита- тельные среды, резиновые предметы стери- лизовать сухим жаром нельзя.
Рисунок 36 - Печь Пастера.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ ВЛАЖНЫМ ЖАРОМ
Кипячение – в металлические стерилизаторы (иглы, шприцы, пинцеты, нож- ницы)раскладывают инструменты обернутые в 2-3 слоя марли.Наливают воду, чтобы полностью покрывала инструменты. В дистиллированную воду добавляют 2 % соду. Кипятят 20-25 мин.Водопроводную воду нельзя, она дает накипь. По окончании кипячения воду сливают, инструменты берут стерильным пинцетом.
Стерилизация текучим паром. Текучим называется насыщенный водяной пар (без примеси воздуха), имеющий давление 760 мм рт. ст. и температуру 100
°С. Стерилизацию текучим паром осуществляют в паровом стерилизаторе или ав- токлаве при открытом спусковом кране в течение 15 - 60 мин в зависимости от объема раствора. Аппарат Коха представляет собой сосуд цилиндрической формы, сверху закрытый крышкой с отверстиями для термометра и для выхода пара. На дно сосуда помещена подставка с отверстиями, до уровня которой наливают воду. Предназначенные для стерилизации питательные среды ставят на подставку. Для уничтожения спор стерилизацию проводят дробно, а в промежутках среды хранят в термостате для прорастания спор.
Тиндализация -жидкость стерилизуется дробно при 60-65 °С пять дней под- ряд по 30 мин. Это используют для стерилизации сред, содержащих яичный белок, сыворотку крови, витамины. В первый день среды стерилизуют 2 часа, в после- дующие дни – по одному часу. В промежутках между прогреваниями среды хра- нят в термостате, чтобы споры проросли,а затем вегетативные клетки были уничтожены при следующем прогревании.
Пастеризация– это метод частичной стерилизации, предложенный Пастером для обработки пищевых продуктов, нестойких к действию высокой температуры (вино, пиво, молоко, соки). Продукт нагревают до 65-80 °С в течение 10-60 мин, затем резко охлаждают. При этом погибают вегетативные формы бактерий, а споры сохраняются. Последующее хранение при низкой температуре (4-5 °С) препятствует прорастанию спор и размножению оставшихся в продукте микробов.
Стерилизация
паром под давлением, или автоклавирование.
Автоклав представляет собой двустенный
металлический котел с герметически
закрываю- щейся крышкой (рисунок 37). В
пространство между стенками автоклава
налива- ют воду,уровень которой в котле
определяют по уровню ее водомерной
трубки. Снаружи котел одет металлическим
кожухом, в ко-
тором есть два манометра, показывающие давление пара внутри котла и между стенками.
Стерилизуемый объект помещают внутрь паро- вой камеры. Во время нагревания автоклава после закрывания крана необходимо следить за давлени- ем, параллельно с возрастанием которого увеличи- вается температура пара. Зависимость между тем- пературой и давлением пара выражается следую- щим образом: 1 атм. - 100 °С; 1,5 атм. - 112,7 °С; 2
атм. - 119,6 °С; 3 атм. - 132,9 °С; 5 атм. - 151,1 °С.
Обычно стерилизация в автоклаве производится при
120 °С в течение 5-30 мин в зависимости от объема
Рисунок 37 - Автоклав.
раствора. Этим гарантируется достаточно полная стерилизация независимо от ви- да микроорганизма. Таким способом стерилизуют посуду,фильтры, инструменты, водные растворы устойчивых к воздействию высокой температуры лекарственных веществ, перевязочный материал, а также трупный материал.
Фильтрация. Растворы, содержащие термолабильные вещества, удобнее все- го стерилизовать фильтрованием. Неглазурованные фарфоровые цилиндры (свечи Шамберлена) применялись уже в лаборатории Пастера. Фильтрация проводится через мембранные бактериальные фильтры – диски из нитроклетчатки, вставлен- ные в аппарат Зейтца и глубинные – свечи Шамберлена, Беркефельда. Некоторые из них выпускаются с различной величиной пор, что позволяет разделять орга- низмы разной величины и формы.
Облучение. Для полной или частичной стерилизации применяют ультрафио- летовые, рентгеновские и гамма-лучи. В лабораторных условиях наибольшее зна-
чение имеют ультрафиолетовые лучи. В спектре УФ-ламп преобладает излучение в области 260 нм,поглощаемое нуклеиновыми кислотами и при достаточно дли- тельном воздействии вызывающее гибель всех бактерий. УФ-облучение использу- ется для частичной стерилизации помещений;при этом бактерии погибают очень быстро, а споры грибов, гораздо менее чувствительные к ультрафиолету, значи- тельно медленнее. Бокс облучают 2-3 часа, лампы выключают не позднее, чем за 30 мин до начала работы.
Ионизирующее излучение, стерилизацию ультразвуком применяют для сте- рилизации питательных сред, пищевых продуктов и других компактных материа- лов.