1. Методы механического разделения микробов

Метод Дригальского. Берут 3-4 чашки Петри со стерильным агаром, на по- верхность первой наносят каплю смеси бактерий, которую стерильным шпателем растирают по поверхности агара, закрывают крышкой. Этим же шпателем расти- рают по поверхности второй чашки, затем третьей и четвертой. Чашки помещают в термостат, перевернув вверх, чтобы конденсат не смыл колонии. Колонии изу- чают по внешнему виду, готовят бактериологический препарат, окрашивают и микроскопируют (рисунок 54).

Рисунок 54 - Метод Дригальского.

Метод Пастера основан на последовательном разведении в 10 пробирках с жидкой средой капли смеси бактерий, с расчетом получить в последней пробирке чистую культуру. Кох, применил метод Пастера на плотных расплавленных сре- дах и содержимое пробирки выливал в отдельную чашку Петри. Выдерживают в термостате. Пересевают отдельную колонию в среду с пробирками и получают чистую культуру.

2. Методы использования биологических особенностей микроорганизмов

Использование химических веществ, антибиотиков, добавленных к пита- тельным средам для подавления роста некоторых микробов.

При выделении спорообразующих микроорганизмов исследуемый материал прогревают при 80С – 20 мин, при этом вегетативные формы погибают, а споры прорастают. Затем выделяют культуру по Дригальскому.

Химический метод основан на устойчивости микобактерий к действию рас- творов щелочей и кислот 6-18 % раствор серной кислоты в течение 30 мин, затем отмывают стерильным физраствором путем центрифугирования. Осадок высева-

ют на специальную среду, содержащую бактериостатическую краску, которая за- держивает рост посторонней микрофлоры и не препятствует росту микобактерий.

Метод биологической пробы – вводят лабораторному животному исследуе- мый материал,через несколько дней оно погибает и бактериологической петлей с внутренних органов делают посев на питательные среды. Проводят при очень за- грязненном посторонней микрофлорой патматериале.

Для выделения подвижных культур каплю исследуемого материала поме- щают на дно пробирки со скошенным агаром в конденсационную жидкость. При наличии в материале подвижных бактерий через 8-12 часов на поверхности агара отмечается рост бактерий. Пересев делают с самой верхней части агара.

Для выделения анаэробов посевы осуществляют в пробирках и чашках Петри, помещенных в эксикатор или анаэростат.

Контрольные вопросы:

1. Как делают посев, пересев, отвивку микробов на различные питательные среды

2. Что такое чистая культура

3. Как можно выделить чистую культуру

4. По каким характеристикам изучают колонии микробов

5. Что такое микробная колония, как ее можно получить

6. Как можно выделить чистую культуру анаэробов

Тема 1.8.Изучение культуральных и биохимических (ферментативных)

свойств микроорганизмов.

Цель занятия: изучить методы определения сахаролитических, протеолити- ческих, редуцирующих и гемолитических свойств; изучить методы определения окислительно-восстановительных ферментов микроорганизмов.

Содержание:

1. Методы определения протеолитических ферментов.

2. Методы определения сахаролитических свойств микробов.

3. Определение окислительно-восстановительных ферментов.

4. Определение редуцирующих свойств.

5. Определение гемолитических свойств.

В результате питания, дыхания, размножения каждый вид микробов продуци- рует постоянный для него набор ферментов,одни из которых расщепляют белки, другие углеводы, третьи вызывают окисление и восстановление различных суб- стратов. Для каждого вида микроорганизмов характерен свой набор ферментов, поэтому их наряду с другими признаками можно использовать для идентифика- ции.