Метод ра.
ностики пуллороза (сальмонеллеза птиц) и бруцеллеза. На обезжиренное предмет- ное стекло наносят каплю цельной крови (взятой у птиц из гребешка или сереж- ки), в нее добавляют каплю соответствующего антигена и смешивают стеклянной палочкой. Для лучшей видимости феномена агглютинации биопромышленность выпускает антиген, подкрашенный гематоксилином. В положительных случаях РА через 30-60 с. в капле смеси появляются глыбки, хлопья склеенного антигена (агг- лютинат).
Кольцевую пробу (реакцию) с молоком используют при обследовании круп- ного рогатого скота на бруцеллез и при контроле сборного молока. В агглютина- ционные пробирки наливают по 2-3 мл свежего цельного молока и добавляют ан- тиген (окрашенный гематоксилином) по 0,2 мл (2 капли). Пробирки встряхивают до равномерного окрашивания молока, выдерживают в водяной бане (или термо-
стате) при 37 °С 45-60 мин. Если в моло- ке имеются антитела, образуется ком- плекс антиген-антитело, который адсор- бируется на капельках жира и при от- стаивании всплывает наверх, образуя си- нее кольцо в нижнем слое сливок; стол- бик молока обесцвечивается. От- рицательная реакция характеризуется си- ней окраской всего молока в пробирке и
слегка желтоватым слоем единиц(рису- нок 71).
Рисунок 71 - Кольцевая реакция с молоком.
Реакция Кумбса. Прямая реакция Кумбса заключается в том, что к эритроци- там больного животного добавляют специфическую антиглобулиновую сыворотку (содержащую антитела против глобулинов сыворотки). Эритроциты агглютини- руют. При непрямой реакции Кумбса сыворотку больного животного соединяют с эритроцитами здорового, а затем добавляют антиглобулиновую сыворотку. Бло- кирующие антитела соединяются с эритроцитами и добавленная антиглобулино- вая сыворотка, вступая в реакцию с неполными антигенами, приводит к агглюти- нации эритроцитов, нагруженных блокирующими антителами.
Контрольные вопросы:
В чем сущность серологических реакций.
Можно ли использовать РА для идентификации бактерий.
Перечислить модификации РА.
Диагностическая оценка реакции агглютинации.
Тема 2.2.Реакция преципитации (рп).
Цель занятия: ознакомить студентов с техникой постановки реакции преци- питации; постановкой трех вариантов реакции преципитации: в плотной среде – диффузная преципитация (РДП), в жидкой среде – кольцепреципитация (РКП), диск-преципитация (Р ДискП).
Содержание:
РП.
РДП.
РдискП.
РП - от лат. praecipilo осаждать. При соединении антигена (преципитиноге- на) со специфическими антителами (преципитинами) образуется осадок (преципи- тат). Используют антигены растворимые, получаемые путем экстракции из разру- шенных бактерий или извлеченные из тканей. Постановку реакции осуществляют в пробирках Уленгута.
Реакция
кольцепреципитации (по Асколи).
В качестве антигена служит фильтрат
живой или уби-
той нагреванием микроб- ной культуры или экстракт из исследуемого материала (выдерживают в течение суток и фильтруют до пол- ной прозрачности). В каче- стве антитела используют специфическую сыворотку фабричного производства.
В узкие пробирки
Уленгута наливают 0,3-0,4
мл сыворотки (антитела).
Рисунок 72 - Реакция преципитации.
Антиген осторожно наслаивают по стенке пробирки в объеме 0,3-0,4 мл. Нельзя допустить перемешивания! При положительном результате на границе двух жид- костей образуется белое кольцо (преципитат - осадок). Реакция представлена на рисунке 72.
Реакция диффузной преципитации (РДП).В слое агарового геля делают не- сколько лунок, в которые наливают антигены и сыворотки так, чтобы они находи- лись соседних лунках. Из лунок антигены и сыворотки начинают диффундировать
в слой геля во все стороны от каждой лунки. Если они окажутся гомологичными, то образуется комплекс ан- тиген + антитело, который к диффузии не способен вследствие более крупных размеров.Он оседает(пре- ципитирует) на месте образования в виде беловатой по- лосы преципитации (рисунок 21), которая хорошо за-
метна на фоне прозрачного геля. Если же диффунди- рующие друг другу навстречу антиген и сыворотка не- гомологичны, полосы преципитации не образуется.
Рисунок 73 - Учет ре- зультатов в РДП.
Предварительный учет результатов РДП производят через 8-10 часов, ос- новной - через 24 и окончательный - через 48 часов (рисунок 73).
Реакция
флокуляции (по Рамону) (от лат.
f1оecus - хлопья) - появление опа- лесценции
или хлопьевидной массы в пробирке при
реакции токсин – антитоксин (рисунок
74). Ее применяют для определения
активности антитоксической сыво- ротки
или анатоксина. В пробирки, содержащие
по 10 мл определенного токсина, добавляют
убывающее количество
специфической токсину антитоксиче- ской сыворотки (1,0; 0,9; 0,9; 0,8 и т.д.). Пробирки встряхивают и остав-
ляют при комнатной температуре. Че- рез определенное время наблюдается
Рисунок 74 - Реакция флокуляции.
опалесценция, помутнение, выпадает осадок. Это инициальная флокуляция, сна- чала она появляется в отдельных пробирках, а затем и в соседних с ними.