
- •Раздел 3. Частная вирусология
- •Тема 3.1. Микробиологическая диагностика стафило- и стрептокок-
- •Тема 3.2. Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза. 149
- •Введение
- •Требования к уровню освоения дициплины
- •Раздел 1. Общая микробиология
- •Устройство бактериологической лаборатории
- •Устройство микроскопа
- •Правила работы с микроскопом
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.2. Основные формы бактерий. Бактериологические краски. Приго-
- •Формы бактерий
- •Бактериологические краски
- •Техника приготовлениябактериологических препаратов (мазков)
- •Методы фиксации мазков:
- •Простые методы окраски бактерий
- •Сложные методы окраски
- •Окраска по Граму
- •Окраска по Циль-Нильсену
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.3. Окраска спор, капсул бактерий, методы определения подвижно- сти бактерий.
- •Метод Пешкова:
- •Метод Виртца:
- •Ные капсулы.
- •Метод Михина:
- •Метод Ольта:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.4. Изучение морфологии грибов и актиномицетов.
- •Классификация
- •Тофтора).
- •Культивирование грибов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.5. Лабораторная аппаратура. Методы стерилизации.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.6.Приготовление питательных сред.
- •Классификация питательных сред
- •По назначению:
- •Специальные питательные среды
- •Методы создания анаэробных условий
- •Дифференциально-диагностические среды
- •Висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера).
- •Среды накопления (обогащения)
- •Синтетические среды
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.7.Посев и культивирование микроорганизмов. Методы выделения чистых культур микробов.
- •Техника посева на поверхность плотной питательной среды в чашках Петри
- •Техника посева на скошенный агар
- •Техника посева на жидкую
- •Техника пересевов культур микробов
- •Ной среды на другую.
- •Методы механического разделения микробов
- •Методы использования биологических особенностей микроорганизмов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.8.Изучение культуральных и биохимических (ферментативных)
- •Определение протеолитических ферментов
- •Определение сахаролитических свойств микробов
- •Определение окислительно-восстановительных ферментов
- •Определение редуцирующих свойств
- •Определение гемолитических свойств
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.9.Изучение действия антибиотиков,антисептиков и бактерио-
- •Метод диффузии антибиотиков в агар с применением дисков
- •Метод серийных разведений антибиотика
- •Контрольные вопросы:
- •Способы заражения лабораторных животных
- •Вскрытие трупов лабораторных животных
- •Определение токсигенности микробов
- •Определение токсичности микробов
- •Методы лабораторных исследований
- •Отбор патматериала
- •Принципы организации и оборудование бактериологических лабораторий
- •Правила взятия, консервирования и транспортировки патологического материала
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.11.Санитарно-бактериологическое исследование воды.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.12.Санитарно-бактериологическое исследование воздуха и почвы.
- •Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 1.13.Изучение микрофлоры кормов. Коллоквиум №1 «Общая микро-
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 2. Инфекция и иммунитет Тема 2.1.Серологические реакции. Реакция агглютинации (ра).
- •Метод ра.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.2.Реакция преципитации (рп).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.3.Реакция связывания комплемента (рск).
- •Компоненты реакции:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.4.Реакция нейтрализации (рн), метод флуоресцирующих антител
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2.5.Биопрепараты. Коллоквиум № 2 «Серологические реакции в мик- робиологии».
- •Лиофилизация микроорганизмов
- •Правила использования и хранения биопрепаратов, их транспортировка
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 3. Частнаямикробиология Тема 3.1.Микробиологическая диагностика стафило- и стрептококкозов
- •Стафилококки.
- •Специфическая терапия и профилактика.
- •Стрептококкоза молодняка.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.2.Микробиологическая диагностика рожи свиней и листериоза Цель занятия: ознакомить студентов с возбудителями рожи свиней и листе-
- •Содержание:
- •Слева: гладкие s-формы (колонии возбудителя на пита- тельной среде и мазок под микроскопом); Справа: шероховатые r-формы (колонии возбудителя на питательной среде и мазок под микроскопом).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.3.Микробиологическая диагностика сибирской язвы.
- •Ная» дорожка.
- •Специфическая профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.4.Микробиологическая диагностика клостридиозов.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.5. Микробиологическая диагностика некробактериоза и копытной гнили овец.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.6. Коллоквиум № 3 «Грамположительные микроорганизмы». Цель занятия: выявить у студентов остаточные знания по пройденному ма-
- •Содержание:
- •Тема 3.7. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.8. Микробиологическая диагностика паратуберкулеза.
- •Тема 3.9. Микробиологическая диагностика эшерихиозов и сальмонелле-
- •Мпа; 2. Среда Эндо; 3. Среда Левина; 4. Среда Плоскирева.
- •Специфическая профилактика.
- •Специфическая профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.10. Микробиологическая диагностика бруцеллеза и туляремии.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.11.Микробиологическая диагностика пастереллеза и гемофилезов свиней.
- •Специфическая терапия.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.12. Микробиологическая диагностика сапа лошадей и мелиоидоза.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.13. Коллоквиум № 4 «Грамотрицательные микроорганизмы». Цель занятия: выявить у студентов остаточные знания по пройденному ма-
- •Содержание:
- •Тема 3.14. Микробиологическая диагностика лептоспироза и кампило-
- •Вакцины импортные для собак:
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.15. Патогенные микоплазмы.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.16. Хламидии, риккетсии.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.17. Лабораторная диагностика микозов.
- •Лабораторная диагностика, специфическая терапия и профилактика.
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3.18. Лабораторная диагностика микотоксикозов.
- •Контрольные вопросы:
- •Форма промежуточного контроля знаний студентов
- •Список рекомендованной литературы
- •Дополнительная литература
- •Периодические издания
- •Перечень ресурсов информационно-телекоммуникационной сети «Интернет»
Устройство бактериологической лаборатории
Бактериологическая лаборатория (отдел) входит в состав ветеринарной лабо- ратории. В ней проводят бактериологическую диагностику болезней сельскохо- зяйственных животных (включая птиц), пушных зверей, рыб и пчел, проведение экспертизы мяса, молока и других пищевых продуктов кормов.
Материалом для исследований служат кровь, мокрота, фекалии, моча, молоко от больных, кусочки паренхиматозных органов от павших и вынужденно убитых животных, а также пробы объектов внешней среды: воды, воздуха, кормов, почвы и др.; пробы пищевых продуктов.
Лабораторию размещают в отдельном здании, вдали от дорог. В лаборатории предусматривают приемное отделение, патологоанатомический, бактериологиче- ский, серологический, биохимический, вирусологический отделы; термостатные, автоклавные, моечная, бактериологическая кухня (средоварочная). На бак.кухне готовят питательные среды для культивирования микроорганизмов, хранят сте- рильную посуду,хорошо упакованные химические вещества, реактивы.
Для работы в стерильных помещениях оборудуют боксы и предбоксники. От англ. box – коробка, ящик, изолированные застенные камеры, предназначенные для микробиологических исследований в асептических условиях. Бокс состоит из
предбоксника и собственно бокса. В предбокснике хранят комплекс спецодежды, запас инструментов, лабораторной посуды, питательных сред, реактивов.
Стены, пол, потолок, рабочая поверхность стола в боксе должны быть покры- ты материалом,который можно легко дезинфицировать.Перед началом работы полы протирают дезраствором, воздух обеззараживают бактерицидными лампами. У входа в бокс и предбоксник кладут дезковрики.
Лабораторных животных содержат в виварии, там же находятся здоровые ба- раны-доноры, их кровь используют для приготовления эритроцитов для РСК, РНГА, для приготовления кровяных питательных сред.
Устройство микроскопа
Микроскоп - это оптический прибор, позволяющий рассмотреть мелкие дета- ли строения исследуемого объекта, размеры которых лежат за пределами разре- шающей способности глаза (разрешающая способность глаза составляет 80 мкм).
Наиболее распространены световые биологические микроскопы: БИОЛАМ, МИКМЕД, МБР (микроскоп биологический рабочий), МБИ (микроскоп биологи- ческий исследовательский) и МБС (микроскоп биологический стереоскопиче- ский). Они дают увеличение в пределах от 56 до 1350 раз. Стереомикроскоп (МБС) обеспечивает подлинно объемное восприятие микрообъекта и увеличивает от 3,5 до 88 раз.
В микроскопе выделяют две системы: оптическую и механическую (рисунок 1). К оптической системе относят объективы, окуляры и осветительное устройст- во (конденсор с диафрагмой и светофильтром, зеркало или электроосветитель).
Объектив - одна из важнейших частей микроскопа, состоит из металлическо- го цилиндра с вмонтированными в него линзами. Увеличение объектива обозна- чено на нем цифрами. В учебных целях используют обычно объективы х8 и х40.
Качество объектива определяет его разрешающая способность.
1 - окуляр, 2 - тубус, 3 - тубусодержатель, 4 - винт грубой наводки, 5 - микрометренный винт,
6 - подставка, 7 - зеркало, 8 - конденсор, ирисовая диафрагма и светофильтр,
9 -предметный столик, 10 -револьверное устройство, 11 -объектив,
12 - корпус коллекторной линзы, 13 - патрон с лампой, 14 - источник электропитания
Рисунок 1 - Устройство световых микроскопов: А - МИКМЕД-1; Б - БИОЛАМ.
Окуляр устроен намного проще объектива. Он состоит из 2-3 линз, вмонтиро- ванных в металлический цилиндр. Между линзами расположена постоянная диа- фрагма, определяющая границы поля зрения. Нижняя линза фокусирует изобра- жение объекта, построенное объективом в плоскости диафрагмы, а верхняя слу- жит непосредственно для наблюдения. Увеличение окуляров обозначено на них цифрами: х7, х10, х15. Окуляр, подобно лупе, дает прямое, мнимое, увеличенное изображение наблюдаемого объекта, построенное объективом.
Для определения общего увеличения микроскопа следует умножить увеличе- ние объектива на увеличение окуляра.
Осветительное устройство состоит из зеркала или электроосветителя, кон- денсора с ирисовой диафрагмой и светофильтром, расположенных под предмет-
ным столиком. Они предназначены для освещения объекта пучком света. Зеркало- служит для направления света через конденсор и отверстие предметного столика на объект. Оно имеет две поверхности: плоскую и вогнутую. В лабораториях с рассеянным светом используют вогнутое зеркало.Электроосветительустанавли- вается под конденсором в гнездо подставки. Конденсор состоит из 2-3 линз, встав- ленных в металлический цилиндр. При подъеме или опускании его с помощью специального винта соответственно конденсируется или рассеивается свет, па- дающий от зеркала на объект. Ирисовая диафрагма расположена между зеркалом и конденсором. Она служит для изменения диаметра светового потока, направ- ляемого зеркалом через конденсор на объект, в соответствии с диаметром фрон- тальной линзы объектива и состоит из тонких металлических пластинок. С помо- щью рычажка их можно то соединить, полностью закрывая нижнюю линзу кон- денсора, то развести, увеличивая поток света. Кольцо с матовым стеклом или све- тофильтром уменьшает освещенность объекта. Оно расположено под диафрагмой и передвигается в горизонтальной плоскости.
Механическая система микроскопа состоит из подставки, коробки с микро- метренным механизмом и микрометренным винтом, тубуса, тубусодержателя, винта грубой наводки, кронштейна конденсора, винта перемещения конденсора, револьвера, предметного столика.
Подставка - это основание микроскопа.
Микрометренный винт служит для незначительного перемещения тубусо- держателя, а, следовательно, и объектива на расстояния, измеряемые микрометра- ми. Полный оборот микрометренного винта передвигает тубусодержатель на 100 мкм, а поворот на одно деление опускает или поднимает тубусодержатель на 2 мкм. Во избежание порчи микрометренного механизма разрешается крутить мик- рометренный винт в одну сторону не более чем на половину оборота.
Винт грубой наводки используют для значительного перемещения тубусо- держателя, а, следовательно, и объектива с целью фокусировки объекта при малом увеличении.
Тубус - цилиндр, в который сверху вставляют окуляры, он подвижно соединен с головкой тубусодержателя.
Револьвер предназначен для быстрой смены объективов, которые ввинчива- ются в его гнезда.Центрированное положение объектива обеспечивает защелка, расположенная внутри револьвера.
Тубусодержатель несет тубус и револьвер.
Предметный столик предназначен для расположения на нем препарата. В се- редине столика имеется круглое отверстие, в которое входит фронтальная линза конденсора. На столике имеются две пружинистые клеммы - зажимы, закрепляю- щие препарат.
Объективы различают сухие и погруженные (водные и масляные), т.е. им- мерсионные. При пользовании сухими объективами между фронтальной линзой объектива и препаратом имеется прослойка воздуха. Световые лучи, проходящие через стекло препарата, попадая в воздушную прослойку, преломляются, откло- няются и только часть их проникает в объектив. Для них необходимо большое ко- личество света. При использовании иммерсионного объектива на микроскопируе- мые препарат наносят каплю масла, т.к. коэффициент преломления его равен ко- эффициенту преломления стекла. В эту каплю жидкости помещают линзу объек- тива, образуется оптически однородная среда, в которой лучи не рассеиваются, а проходят через фронтальную линзу, хорошо освещая поля зрения (рисунок 2).
Рисунок 2 – Принцип работы сухого и погруженного объективов.