41. Бактериофагия.

фазы взаимод-вия вирулентного бактериофага с чувствит к нему бактериал кл. Нуклеин к-ты и белки синтезируются кл-хозяином раздельно в разных частях кл. После этого они объединяются друг с др. Такой способ называется разобщенная или дизъюнктивная репродукция. Метод титрования бактериофага по Аппельману (на жид пит среде). Готовят 10кратные разведения исслед бактериофага в пит бульоне. Для этого в ряд пробирок разливают по 4,5 мл бульона. В 1-ю пробирку добавляют 0,5 мл исслед фага. Тщательно перемешивают и переносят в послед пробирки (из пробирки в пробирку) по 0,5 мл соответст разведения фага с уменьш его концентрации в 10 раз. Получают разведения от 10-1 до 10-9 степени. Затем в пробирки вносят по 1 капле сут культуры соответ бак. После инкубации в теч сут опред титр фага. За титр бактериофага принимают то его максимал разведение, при кот наблюдается полный лизис культуры (просветление среды). Метод титрования бактериофага по Грациа (на плот пит среде). Пит агар разливают в чашки Петри и подсушивают в термостате. Готовят полужид питат агар по 3-4 мл в пробирке и растапливают его на вод бане. Делают 10кратные разведения исслед бактериофага в изотонич р-ре хлорида натрия. Затем 0,5 мл каждого разведения бактериофага смешивают с таким же объёмом сут бульон культуры чувствит к бактериофагу бак и выливают эту смесь в пробирку с полужид агаром т 45°C. Приготовленную смесь быстро выливают на поверхность 1го слоя агара в чашке Петри, где она застывает в виде тонкого слоя. После застывания 2го слоя агара чашки инкубируют при 37°C в теч сут. Смеси бактериофага, культуры и полужид агара делают из разведений фага 10(2) -10(10) в зависимости от предполагаемого титра фага. Не заражённые бактериофагом бак, размножаясь, образуют сплошной газон роста на поверхн пит агара. Каждая инфицированная бактериофагом бак лизируется и освобождает потомство бактериофага, кот внедряется в интактные кл бак, и весь цикл повторяется. В результате лизиса кл на сплошном бактериальном газоне появл «стерильные» пятна или негативные колонии бактериофага. Число этих пятен соответствует кол-ву фаговых частиц в засеянной смеси. Кол-во пятнообразующих единиц в 1 мл исходной суспензии бактериофага называется его титром. Титр бактериофага - это кол-во активных фаговых частиц в единице объема исслед материала. Для опред титра бактериофага наиб широко в практике работы с бактериофагами применяется метод агар слоев, предложенный А. Грациа (A. Gratia) в 1936 г. суспензию бактериофага смешивают с культурой чувствит бак, вносят в агар низкой концентрации («мягкий агар») и наслаивают на поверхн ранее подготовленного 1,5% пит агара в чашке Петри. Умеренные бактериофаги – гр вирусов бак, выделенная по характеру взаимод-вия фага с микробной кл. Умеренные фаги в жиз цикле могут развиваться по 2м вариантам: вовлекаться в литич цикл или превращаться в профаг, с дальнейшим развитием по лизогенному пути.

Применяемые на практике препараты бактериофагов предст собой фильтрат бульон культуры соответст микробов, лизированных фагом, содерж живые частицы фага, а также антигены бак, освободившиеся из бактериал кл при их лизисе. Полученный препарат – жидкий бактериофаг – должен иметь вид совершенно прозрачной жидкости жёлтого цвета большей или меньшей интенсивности. Препарат проходит контроль на стерильность (методом посева), безвредность и литическую активность (титр). Диагностич бактериофаги выпускаются как в жидкой, так и в сухой форме, в ампулах. Перед началом работы сухой бактериофаг разводится. Для лечебно-проф целей бактериофаги выпускаются в форме табл с кислотоустойчивой оболочкой, в жидком виде или в суппозиториях. Таблетирован сухой бактериофаг более стабилен при хранении и удобен при применении. 1 табл сухого бактериофага соответствует 20-25 мл жидкого препарата. Срок годности сухого и жидкого препарата составляет 1 год. Жид бактериофаг следует хранить при т +2 – +10 0С, сухой – не выше +10С, но его можно хранить в холодильнике и при отрицат т. Принятый внутрь бактериофаг сохр в орг в теч 5-7 д. приём бактериофага не сопровождается какими-либо р-циями или осложнениями. Наиб широко примен стафилококк, стрептококк, холерн бактериофаги, эффективные в тер как острых, так и хронич форм заб, а также бактерионосительства. Кроме того, существуют фаги для лечения брюш тифа, дизентерии, сальмонеллезов. Метод фаготипирования имеет большое значение при эпидемиологич исслед, т к позволяет выявить ист и пути распростран возбуд заб. Опред фаговара выделенной чистой культуры проводят с помощью набора типовых диагностич бактериофагов. Фаговар культуры опред по тому типовому фагу, кот вызвал её лизис. Для проведения фаготипирования исслед сут культуру бак засевают «газоном» на поверхн пит агара в чашки Петри, подсушивают в термостате, делят со стороны дна чашки на квадраты и наносят пипеткой по 1ой капле соответст бактериофага в тестразведении, указанном на ампуле. В 1 квадрат бактериофаг не вносят, для контроля роста культуры. Чашку термостатируют при 37оС 18-20 ч, после чего оценивают результат р-ции. Полож результат р-ции фаголизиса – лизис культуры в месте нанесения бактериофага («негативные» колонии) при наличии роста в контроле свидетельствует о соответствии культуры бактериофагу и принадлежности с учётом её фаголизабельности к соответствующему виду.