В) Препараты, действующие на молекулярном уровне («блокаторы кода»)

С целью блокирования экспрессии гена были предприняты попытки применения в различных эукариотических системах антисенсорных олиго-дезоксинуклеотидов (oligos). В экспериментальных исследованиях на жи­вотных было показано, что наиболее эффективный антисенсорный олигонуклеотид, направленный против 5'-региона pre-S-гена, ведет к полному торможению репликации вируса и экспрессии гена как в условиях in vitro, так и in vivo. На модели хронической инфекции ВГВ схематичес­ки показан стратегический принцип такого лечения. Недавно были иден­тифицированы два высокоспецифичных участка ВГС-РНК, являющихся структурами для целенаправленного действия антисенсорных олигонуклеотидов. Предполагают, что эти структуры имеют особо важное значение для цикла размножения ВГС. Таким образом, можно считать, что при хро­нической инфекции как ВГВ, так и ВГС открываются принципиально но­вые перспективы лечения на молекулярном уровне.

открываются принципиально но­вые перспективы лечения на молекулярном уровне.

В настоящее время эти «блокаторы кода» еще не применяются в клинической практике для лечения хронического гепатита. Однако высокоспецифичный механизм действия указанных молекулярно-биологических методов позволяет рассматривать их с позиций стратегических направлений терапии, имеющих широкие перспективы в будущем.

г) ИФН

ИФН представляют собой группу аутогенных гликопротеинов, защи­щающих клетки от вирусной инфекции. Впервые это было продемонстри­ровано более 40 лет назад на примере репликации вируса гриппа.

ИФН можно подразделить на 2 типа.

ИФН типа 1 охватывают 22 различных подтипа ИФН-а, а также один подтип ИФН-В.

ИФН-у относится к ИФН типа 2.

ИФН типа 1 действуют в первую очередь как ингибиторы репликации вируса, тогда как ИФН типа 2 проявляют иммуномодуляторную актив­ность.

ИФН, встречающиеся в естественных условиях, к которым относятся ИФН-а (раньше — лейкоцитарный ИФН, синтезируемый моноцитами и В-лимфоцитами и обозначавшийся как лимфобластоидный ИФН), ИФН-Р (раньше — фибробластный ИФН, получаемый из культуры фибробластов человека), а также ИФН-у (раньше — иммунный ИФН из Т-лимфоцитов, рассматривавшийся в рамках реакции на неспецифические митогены) ока­зываются столь же эффективными, что и существующие в настоящее время рекомбинантные ИФН, применяющиеся в гепатологии в виде ИФН-а-2а.

Биологический механизм действия ИФН связан с активацией (дерепрессией) клеточных генов, в результате чего синтезируется множество раз­личных белков, часть из которых обладают противовирусными свойствами.

На рис. 35 показано, что в клетке, пораженной вирусом, синтезируется и выделяется ИФН. ИФН-а и ИФН-Р делят общий рецептор на поверхно­сти клетки. Вскоре после связывания с рецептором происходит индукция транскрипции специфичных генов, вслед за которой синтезируются про­тивовирусные протеины. Комплекс ИФН-рецептор захватывается клеткой посредством эндоцитоза, ИФН расщепляется в лизосомах, в результате чего вновь освобождается циркулирующий рецептор для ИФН.

ИФН индуцирует два фермента, обладающих противовирусной актив­ностью: 2'-5'аденилатсинтетазу и протеинкиназу. Инактивация вируса с помощью образования рибонуклеазы (как следствия активации аденилатсинтетазы) поддерживается торможением вирус-индуцированного синтеза протеина в рибосомах благодаря активации протеинкиназы.

Первый фермент проявляет в нестимулированных клетках лишь очень умеренную активность. Его специфичная активация достигается с помо­щью двунитчатой РНК (dsPHK), которая отсутствует в нормальных клет­ках и появляется там только при репликации определенных вирусов. После первоначальной активации этот фермент катализирует ряд олигонуклеотидов, которые в свою очередь активируют рибонуклеазу.

У некоторых больных хроническим гепатитом В активность аденилатсинтетазы существенно снижается, что может служить основанием для те­рапевтического применения ИФН.

В дополнение к активации синтеза специфичных противовирусных про­теинов ИФН типов 1 и 2 способны оказывать иммуномодуляторное действие,

Чтобы антигены вирусов могли быть распознаны цитотоксичными Т-клетками, должна произойти их деградация с участием комплекса ферментов. При этом фрагменты пептидов после ассоциации с протеинами HLA-класса I е конечном итоге экспримируются на поверхности клетки как комплекс анти­ген— HLA. ИФН оказываются способными стимулировать синтез HLA-npo-теинов. Возрастает способность иммунной системы распознавать с помо­щью цитотоксичных Т-лимфоцитов инфицированные гепатоциты и элиминировать их. Представленная картина свидетельствует, что активация противовирус­ного механизма (протеинкиназы и аденилатсинтетазы) вызывается самими вирусами, которые таким образом сами готовят почву для собственного разрушения. В такой ситуации не вызывает удивления то, что у определен­ных вирусов сформировалась способность противостоять образованию этой защитной цепочки.

Определенные вирусы могут с помощью прямого взаимодействия инактивировать ферменты, активированные двунитчатой РНК. Дельта-антиген мо­жет секвестрировать РНК вируса и таким образом блокировать активации противовирусных ферментов. ВГВ (и некоторые аденовирусы) способен очень рано блокировать путь передачи сигнала от мембраны цитоплазмы к ядру) клетки, ингибируя при этом трансактивирующий фактор.

При хроническом гепатите В некоторые авторы обнаружили (хотя и небезоговорочно) сниженную активность противовирусного фермента 2'-5'аде-нилатсинтетазы, что можно рассматривать как косвенный показатель сни­женной активности ИФН при хронической инфекции ВГВ. Однако еще ж ясно, какую роль играют эти ингибиторы ИФН в патогенезе хронической: гепатита В у человека. Недавно все же было показано, что у больных хро­ническим гепатитом В с выраженной способностью вырабатывать специ­фичный ингибитор ИФН терапия ИФН малоэффективна.

Вместе с тем у больных хроническим гепатитом, у которых применение ИФН-а дает хороший эффект, по сравнению с пациентами, плохо отвеча­ющими на терапию ИФН, отчетливо повышается активность аденилатсинтетазы, что сохраняется приблизительно в течение полугода.

По-прежнему обсуждается вопрос о возможной индукции анти-ИФН (нейтрализующих антител) как факторе, способном изменять ответ на ле­чение. В некоторых работах в 6-30% случаев действительно обнаружива­лись нейтрализующие антитела. Однако клиническое значение этих анти­тел остается неясным, особенно с учетом того, что образование данных антител не оказывает (по крайней мере, у части больных) большого влия­ния на клиническое течение заболевания.