Методика экспертного исследования по определению каннабиноидов в смывах слизистой полости рта, лица, рук, в крови, в моче, в тканях внутренних органов.

использованы: материалы издания Всемирной организации здравоохранения «Basic analytical toxicology» Женева 1997 год., CLARKE’S ISOLATION AND IDENTIFICATION OF DRUGS London THE PHARMACEUTICAL PRESS 1986, Крамаренко В. Ф. Химико-токсикологический анализ.— К: Вища шк. Головное изд-во, 1982 г.

Методика экспертного исследования определение каннабиноидов.

1.Выявление в смывах лица и рук.

1.1.Отбор проб осуществляется протиранием рук и лица подозреваемого в курении гашиша ватным ил марлевым тампоном, смоченным 70% этиловым спиртом. Спирт из образцов испаряют при комнатной температуре, а затем тампоны упаковывают, в полиэтиленовые пакеты опечатывают и направляют на исследование в лабораторию.

1.2.Ход анализа.

1.2.1.Экстракция. Экстрагируют каннабиноиды из тампонов два раза диэтиловым эфиром (этилацетатом или этиловым спиртом), порциями по 10 мл в течение 1 минуты. Экстракцию этиловым спиртом проводят при нагревании. Экстракт упаривают до конечного объёма 0,1 мл и используют как для предварительного определения каннабиноидов характерными цветовыми реакциями, так и для качественного определения их ТСХ методом.

1.2.2.Предварительное исследование: Отбирается 5 мкл от аликвоты упаренного до малого объёма экстракта, наносится проба на фильтровальную бумагу, высушивается и затем опрыскивается 0,5% раствором прочного синего Б в 10% водном растворе карбоната натрия ( или гидроксида натрия).

1.2.3.Оценка результата. Отсутствие красного окрашивания пятна служит основанием для заключения, что в пробе отсутствуют каннабиноиды.

1.2.4.Обнаружение методом тонкослойной хроматографии.

При появлении красного окрашивания вторая аликвота экстракта наносится на пластинку «Силуфол».

Подвижная фаза: I - петролейный эфир (40-70°) – диэтиловый эфир 4:1 двукратно.

II – бензол (толуол) без насыщения

Реактив для визуализации: 0,5% раствор прочного синего Б в 10% водном растворе карбоната натрия ( или гидроксида натрия).

1.2.4.1.Оценка результата. Появление пятна оранжевого цвета Rf 0,76 каннабинола и пятна малинового цвета с Rf 0,84 тетрагидроканнабинола являются доказательств наличия в пробе каннабиноидов. Обнаружение тетрагидроканнабинола только в смывах с кожи рук и лица не является основанием для заключения, что данное лицо курило гашиш, поскольку возможно случайное соприкосновение с гашишем, о котором освидетельствуемый и не подозревал.

2.Выявление каннабиноидов в слюне.

2.1.Отбор проб. У лиц, подозреваемых в курении гашиша, в склянку с притертой пробкой вместимостью 100 мл отбирается примерно 10 мл слюны, после чего промывается полость рта 50 мл 70% раствора этилового спирта, который насыщен хлористым натрием (для предупреждения глотания спирта). Слюну и смыв объединяют, склянку закрывают, опечатывают и направляют на исследование в лабораторию.

2.2.Ход анализа.

2.2.1.Экстракция. Экстрагируют каннабиноиды 10 мл этилацетата, время экстракции 5 минут, число экстракций 3. Экстракт высушивают добавляют 1,5 г безводного сульфата натрия (или сульфата магния), сушат 30 минут. Затем фильтруют экстракт через бумажный фильтр и упаривают до нескольких капель. Весь полученный экстракт наносят на пластинку «Силуфол».

Подвижная фаза: петролейный эфир (40-70°) – диэтиловый эфир 4:1 двукратно.

Реактив для визуализации: 0,5% раствор прочного синего Б в 10% водном растворе карбоната натрия ( или гидроксида натрия).

2.2.1.1.Оценка результата. Появление пятен оранжевого цвета Rf 0,76 каннабинола и Rf 0,84 тетрагидроканнабинола являются доказательств наличия в пробе каннабиноидов. При этом следует учитывать, что отрицательный результат еще не является основанием для вывода, что данное лицо не употребляло гашиш, так как следы гашиша (после курения) сохраняются в полости рта до 1 часа, а на коже до 24 часов (если поверхность кожи не протиралась спирт содержащими растворами).

3.Выявление каннабиноидов в плазме крови.

3.1.Экстракция. 5мл крови экстрагируют четырехкратно по 5 мл смеси петролейного эфира ( Т кип. 40-60°), содержащего 1,5% пентанола по объёму. Объединенный органический экстракт упаривают до объёма нескольких капель и переносят на пластинку «силуфол». Хроматографирование в тех же условиях, что и экстракт из слюны. 3.1.2-3.1.4.

3.2.Оценка результата. При обнаружении на пластинке в зоне исследуемого экстракта характерных пятен (см. п. 1.2.4.1.) с Rf 0,84 тетрагидроканнабинола, даётся заключении об обнаружении в образце тетрагидроканнабинола действующего вещества наркотического вещества гашиш.

Методика 7.1. Слюну смешивали с 50 мл насыщенного раствора натрия хлорида, экстрагировали в делительной воронке этилацетатом трижды, порциями по 10 мл. Гексановые фракции объединяли, высушивали безводным натрия сульфатом, гексан испаряли в токе воздуха до объема около 100 мкл и количественно переносили на стартовую линию хроматографической пластинки "Армсорб". Параллельно, на расстоянии 20 мм в качестве образца сравнения наносили спиртовой экстракт конопли. Хроматографировали восходящим способом в насыщенной камере. В качестве подвижной фазы использовали смесь петролейного эфира и диэтилового эфира, приготовленную в соотношении 4:1. Пробег фронта подвижной фазы – 100 мм. Хроматографирование проводили двухкратно. Проявляли 0,5% раствором прочного синего Б в 1М растворе натрия гидроксида.

Методика 7.2. К 10 мл мочи прибавляли 2 мл концентрированной кислоты хлористоводородной, герметично укупоривали и выдерживали 20 минут на водяной бане при температуре 60⁰С. Содержимое флакона охлаждали до комнатной температуры и экстрагировали дважды смесью гексана и этилацетата в соотношении 7:1, порциями по 10 мл. Органические фракции объединяли, высушивали безводным натрия сульфатом, экстракт упаривали в токе воздуха до объема около 100 мкл. Упаренный экстракт количественно переносили на стартовую линию хроматографической пластинки "Армсорб". Параллельно, на расстоянии 20 мм в качестве образца сравнения наносили спиртовой экстракт конопли. Хроматографировали восходящим способом как изложено в п. 7.1.

Методика 7.3. К 10 мл мочи прибавляли 0,5 мл 50% гидроксида натрия и выдерживали на водяной бане при температуре 60⁰С 20 минут. Добавляли концентрированную соляную кислоту до pH=2 по УИБ и экстрагировали дважды смесью гексана и этилацетата в соотношении 7:1, порциями по 10 мл. Органические фракции объединяли, высушивали безводным натрия сульфатом, экстракт упаривали в токе воздуха до объема около 100 мкл. Упаренный экстракт количественно переносили на стартовую линию хроматографической пластинки "Силуфол". Параллельно, на расстоянии 20 мм в качестве образца сравнения наносили спиртовой экстракт конопли. Хроматографировали восходящим способом как изложено в п.7.1.

Методика 7.4. 6 мл мочи помещали в тестовую пробирку, прибавляли 400 мкл 11,8 М раствора гидроксида калия, тщательно перемешивали и оставляли на 10 мин. Затем в тестовую пробирку прибавляли 1500 мкл ледяной уксусной кислоты и перемешивали. Содержимое тестовой пробирки помещали в резервуар сорбционного патрона, в катридже которого находился чистый Toxi-Disc, и подключали к вакуумному насосу. Предвпрительно сорбционный патрон активировали путем аспирации 1 мл метанола. Пробу исследуемой мочи пропусали через картридж с сорбционным диском со скоростью 2 мл/мин при разрежении, создаваемом вакуумным насосом. Аналогично проводили сорбционное концентрирование образцов сравнения, содержащих ⁸- тетрагидроканнабиноловую кислоту в концентрации 50 и 75 нг/мл. После аспирации исследуемой пробы и контрольных образцов из резервуаров удаляли фильтры, добавляли по 1 мл 20% раствора уксусной кислоты и аспирировали через картриджи с сорбционными дисками, аналогично вышеизложенным. После промывки сорбционных картриджей, через них, при помощи вакуумного насоса, в течение 2 минут аспирировали воздух. Вакуум отключали, в резервуары добавляли 0,5 мл смеси гептана и дихлорметана (80:20), вновь подключали вакуум и аспирировали смесь, как изложено выше. После промывки сорбционных картриджей, через них, припомощи вакуумного насоса, в течение 10 минут аспирировали воздух. Картриджи разбирали, сорбционные диски дополнительно высушивали на мармите при температуре 60⁰ в течении 5 минут. В отверстие хроматографической пластинки Toxi-grams помещали: в зону №1- Toxi-disc, полученный из контрольного образца с концентрацией ⁸- тетрагидроканнабиноловой кислоты, равной 50 нг/мл, в зону №2- Toxi-disc, полученный из контрольного образца с концентрацией ⁸- тетрагидроканнабиноловой кислоты, равной 50 нг/мл, в зону №3- Toxi-disc, полученный из исследуемого образца мочи. Хроматографическую пластинку высушивали на мармите в течение 1 минуты и хроматографировали восходящим способом в ненасыщеной камере. Подвижная фаза – гептан: ацетон: ледяная уксусная кислота (50:50:1). Пробег фронта контролировали по цветному маркеру. Пробег фронта- 45 мм. Пластинку высушивали на мармите до исчезновения запаха уксусной кислоты, после чего однократно окунали в раствор прочного синего ББ. Пластинку вынимали и высушивали на воздухе в течение 60 секунд, после чего помещали в камеру, насыщенную парами диэтиламина на 10 секунд. Пластинку вынимали. Пластинку помещали в камеру, насыщенную парами кислоты хлористоводородной. Цвет пятен в контрольных и исследуемых зонах изменился на пурпурный.

Примечание. При проведении медицинского освидетельствования для установления факта употребления наркотических средств необходимо учитывать, что наличие следов гашиша на поверхности человеческого тела или на слизистой оболочки ротовой полости может быть обусловлено различными причинами и не всегда может являться доказательством употребления гашиша. Окончательное заключение об употреблении гашиша должно выноситься на основании данных комплексного обследования.