2. Изолирование опиатов из крови (трупный материал)

20 мл крови помещали в колбу и смешивали с 40 мл дистиллированной воды и прибавляли 10 мл концентрированной соляной кислоты. Колбу соединяли с обратным холодильником и помещали, на кипящую водяную баню. Содержимое колбы нагревали в течение 30 мин. Охлаждали до комнатной температуры и центрифугировали. Надосадочную жидкость отфильтровывали в делительную воронку, и экстрагировали диэтиловым эфиром три раза по 15мл. Эфирные извлечения объединяли, пропускали через бумажный фильтр с безводным сульфатом натрия в выпарительную чашку и упаривали в токе теплого воздуха до сухого остатка. Остаток растворяли в 0,5 мл этилового спирта (можно отбрасывать и далее не исследовать). Водное извлечение нейтрализовали раствором аммиака до рН 6-7 по универсальной индикаторной бумаге. Подщелачивали насыщенным раствором карбоната натрия до рН=8-9 и экстрагировали смесью хлороформ – этанол (2:1) три раза по 15 мл. Органические экстракты объединяли, пропускали через фильтр с безводным сульфатом натрия и выпаривали досуха в токе теплого воздуха. Сухой остаток растворяли в 0,5 мл этанола. ТСХ см.п.2.

2. Изолирование морфина из желчи

Схема изолирования морфина из желчи аналогична выделению из мочи. Доступное для анализа количество желчи предварительно разбавляется водой до объёма 25 мл.

2. Изолирование морфина из тканей внутренних органов.

25 г мелко измельчённой ткани печени или почек (размер частиц не более 0,5-1 см) помещают в колбу со шлифом вместимостью 400 мл, добавляют 10 мл воды и 2,5 мл концентрированной соляной кислоты. Колбу герметично закрывают и автоклавируют при давлении 1,1 атм в течение 30-45 мин, затем охлаждают, переносят в делительную воронку и промывают дважды порциями по 100 мл петролейного эфира (t кип. 30-60⁰С) для освобождения от липидов и жиров. Солянокислый экстракт фильтруют через бумажный фильтр, остаток органов промывают дважды 3% раствором соляной кислоты, снова фильтруют. Для фильтрования можно использовать стеклянные фильтры №3 или №2 укреплённые в колбу Бунзена, с использованием водоструйного насоса. Дальнейшее исследование проводят аналогично исследованию мочи.

2.0. Идентификация

2.1. Спектрофотометрическое исследование

В УФ-области спектра на спектрофотометре в диапазоне длин волн 230-330 нм исследуют 3 мл солянокислого реэкстракта 0,1 Н раствора соляной кислоты. Морфин в солянокислом растворе имеет максимум поглощения при длине волны 284-287 нм. К солянокислому раствору в контрольной кювете и кювете с исследуемым образцом добавляют по 4 капли 30% раствора гидроксида натрия, перемешивают и исследуют спектр поглощения. В присутствии морфина максимум поглощения смещается к длине волны 296-298 нм и появляется второй максимум при длине волны около 250 нм. Такое смещение характерно для натриевых солей фенолов. Предел обнаружения морфина по характерному спектру поглощения солянокислого реэкстракта составляет около 40-50 мкг/ мл морфина.

Щелочной раствор из кюветы переносят в колбу с солянокислым реэкстрактом, водный раствор подщелачивают сухим карбонатом натрия до рН 8,7-8,8 и экстрагируют двумя порциями по 10 мл смеси хлороформ - изопропанол (8:2). Органическую фазу фильтруют через безводный сульфат натрия, доводят до объёма 20 мл; 1 мл извлечения соответствует 1 мл мочи, 1 г печени или почки. Хлороформный раствор делят на следующие аликвоты: первая – соответствующая 0,1 мл мочи или 0,1 г органа и четыре аликвоты соответствующие 4 мл мочи (или 4 г органа). Полученные остатки исследуют в тонких слоях сорбентов следующим образом: (см. табл. 1 и 2).