1. Якісна реакція на білок.

Сеча здорової людини практично не містить білка. Сліди його, що містяться в сечі, звичайними реакціями, якими користуються в клініці, не виявляються. При ряді захворювань з сечею може виділятись значна кількість білка, що носить назву протеїнурії або альбумінурії.

Розрізняють справжню альбумінурію і несправжню. При справжній або нирковій протеїнурії білки сироватки крові попадають в сечу через нирки. Несправжня протеїнурія спостерігається при попаданні в сечу слизу, крові, гною не з нирок, а з сечовивідних шляхів. Для виявлення білка в сечі використовують реакції осадження з допомогою азотної і сульфосаліцилової кислот. Остання – дуже чутлива.

Принцип методу і хід роботи див.заняття 2, робота 2.

Клініко-діагностичне значення

Білок з’являється в сечі при нефриті (тобто при запаленні судинних клубочків нирок, коли збільшується їх проникливість), у випадках серцевої декомпенсації, при деяких формах підвищеного тиску та, іноді, при вагітності.

2. Кількісне визначення білка за методом Робертса-Стольникова.

Принцип методу. Метод грунтується на емпірично встановленому факті, що при нашаруванні сечі на азотну кислоту спостерігається стійке помутніння у вигляді кільця на межі обох рідин між 2-ю і 3-ю хвилинами при вмісті в сечі 0,033 г/л білка. Користуючись різними розведеннями сечі, знаходять таке розведення, яке дає утворення білого кільця через 2-3 хвилини.

Хід роботи. Попередньо за допомогою якісних реакцій визначають наявність білка в сечі. Для цього використовують дуже чутливу реакцію з сульфосаліциловою кислотою - в пробірку вміщують 1 мл сечі і додають 3 краплі 20% розчину сульфосаліцилової кислоти. При наявності білка в сечі утворюється білий осад. Для визначення кількості білка треба зробити розведення сечі - в 5 пробірок наливають по 2 мл дистильованої води. В першу додають 2 мл досліджуваної сечі. Вміст цієї пробірки перемішують і 2 мл суміші переносять в другу пробірку, з другої - в третю і так далі, із останньої пробірки 2 мл суміші виливають. Отримують розведення сечі в 2, 4, 8, 16, 32 рази. Кожну порцію розведеної сечі обережно нашаровують на азотну кислоту, 1 мл якої вміщують в пробірку. Відзначають при якому розведенні з’являється біле кільце між 2-ю і 3-ю хвилинами.

Для розрахунку вмісту білка в сечі 0,033 г/л перемножують на ступінь розведення сечі в пробірці, де утворилося біле кільце між 2-ю і 3-ю хвилинами. Наприклад, кільце утворилося в пробірці, де було розведення сечі в 8 разів. Тоді, 0,033 х 8 = вміст білка в сечі в г/л.

3.Якісне і кількісне визначення глюкози Принцип методу і хід роботи див. заняття №14.

4.Якісне визначення ацетону (проба Легаля) Принцип методу і хід роботи див. заняття №17.

5.Якісне визначення кров’яних пігментів (бензидинова проба) Принцип методу і хід роботи див. заняття №3.

Лiтература.

1. Конспект лекцiй.

2. Биологическая химия /Воронина Л.Н. и др.- Х.:Основа, 1999. – 640 с.

3. Губський Ю.I. Бiологiчна хiмiя. – Київ-Тернопiль: Укрмедкнига, 2000 – 507 с.

4. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.:Медицина, 1999. – 528 с.

5. Я.І.Гонський, Т.П.Максимчук. – Біохімія людини, 2001

Обговорено і затверджено на засіданні кафедри

Зав. кафедрою проф. Ерстенюк А.М.