Качественное определение кумаринов в лрс
Для обнаружения кумаринов в растительном сырье используют их лактонные свойства, способность флуоресцировать в УФ свете и сублимироваться, давать окрашенные растворы с диазосоединениями, а также хроматографический анализ.
Для проведения качественного анализа готовят спиртовое извлечение из ЛРС.
Лактонная проба
1. К спиртовому извлечению из ЛРС прибавляют 10% спиртовый раствор КОН, нагревают - раствор желтеет (происходит разрыв лактонного кольца, образуются кумаринаты, имеющие желтое окрашивание).
2. Затем прибавляют дистиллированную воду, перемешивают, раствор становится прозрачным (кумаринаты растворимы в воде).
3. Затем подкисляют 10% HCI до кислой реакции, при этом наблюдается помутнение или выпадение осадка, это указывает на присутствие кумаринов в сырье (образовавшиеся кумарины не растворимы в воде).
Диазореакция
К спиртовому извлечению прибавляют 10% спиртовый
раствор КОН, нагревают - раствор желтеет, прибавляют свежеприготовленный диазореактив (смесь равных объемов пара-нитроанилина и раствора нитрита натрия в концентрированной HCl) при наличии кумаринов раствор приобретает окраску от коричневой до вишневой.
Хроматографическое определение
Для определения кумаринов применяют ТСХ, БХ.
Для ТСХ используют системы:
Н-ГЕКСАН-БЕНЗОЛ-МЕТАНОЛ (5:4:1),
ПЕТРОЛЕЙНЫЙ ЭФИР-БЕНЗОЛ-МЕТАНОЛ (5:4:1),
БЕНЗОЛ-ЭТИЛАЦЕТАТ
БЕНЗОЛ-ХЛОРОФОРМ в различных соотношениях.
Для БХ - 15%, 60% растворы уксусной кислоты.
Для обработки хроматограмм используют:
10% спиртовый раствор КОН,
диазотированный сульфаниламид - кумарины окрашиваются в оранжевый, красно-оранжевый или фиолетовый цвет,
пары йода - кумарины окрашиваются в коричневый цвет.
Кумарины на хроматограммах определяют по флуоресценции в УФ свете до и после проявления спиртовым раствором КОН.
Количественное определение
В основу количественного определения кумаринов положены их специфические физико-химические свойства.
1. Гравиметрический метод, в основе которого лежит способность лактонного кольца к обратимому размыканию и замыканию в зависимости от рН среды.
2. Колориметрический метод основан на способности кумаринов вступать во взаимодействие с солями диазония. В качестве реагентов применяют диазотированный п-нитроанилин, сульфаниловую кислоту, сульфаниламид.
3. Спектрофотометрический метод.
4. Хромато-спекрофотометрический метод.
5. Полярографический метод и др.
Сроки заготовки, сушка и хранение сырья
Цветки и травы заготавливают в фазу бутонизации и цветения, плоды - в фазу молочной и восковой зрелости. При ручном сборе сырья необходимо соблюдать осторожность во избежание ожогов кожи и пользоваться перчатками. Подземные органы заготавливают осенью или ранней весной.
Травы сушат в тени, т.к. на солнце может идти образование димеров, на чердаках или под навесами при хорошей вентиляции, а также в сушилках при температуре не выше 40°С. Плоды сушат при температуре 30-35°С.
Плоды и корни можно сушить на солнце.
Хранят сырье без доступа солнечных лучей в сухих прохладных помещениях.