Качественное определение

Качественные реакции проводят или с индивидуальными веществами, или с очищенным извлечением из ЛРС.

Все реакции на сердечные гликозиды можно разделить на 3 группы:

1. Реакции на углеводную часть молекулы.

2. Реакции на стероидное ядро.

3. Реакции на лактонное ненасыщенное кольцо.

1. Реакции на сахарный компонент. В начале проводится кислотный гидролиз. Свободный сахар определяется Феллинговой жидкостью (идет образование красной закиси меди) или реакцией образования "серебряного зеркала".

На дезоксисахара проводят:

 Реакцию Келлер-Килиани - к извлечению (сухому остатку) прибавляют: концентрированную СН₃СООН со следами трехвалентного железа, осторожно наслаивают концентрированную Н₂SO₄ со следами трехвалентного железа. На границе двух слоев образуется коричневое или бурое кольцо, верхний слой окрашивается в сине-зеленый цвет. Реакция положительная в том случае, если дезоксисахар находится в свободном состоянии или занимает крайнее положение в молекуле гликозида.

Если дезоксисахар связан с одной стороны с агликоном, а с другой - с другим сахаром (например, глюкозой), то реакция Келлер-Килиани не дает положительных результатов.

 Для обнаружения дезоксисахаров в таких случаях проводят гидролиз трихлоруксусной кислотой. Свободный дезоксисахар с нитрофенилгидразином и щелочью дает голубую окраску.

 Известна на дезоксисахара и ксантгидрольная реакция.

К извлечению прибавляют ксантгидрол и ледяную уксусную кислоту, при нагревании и добавлении небольшого колическтва серной (или фосфорной) кислоты образуется красное окрашивание.

2. Реакции на стероидное ядро.

Реакция Либермана-Бурхарда: сухой остаток растворяют в ледяной уксусной кислоте, прибавляют смесь уксусного ангидрида с концентрированной серной кислотой (50:1) - развивается окраска от красной до розовой, переходящей в зеленую или сине-зеленую.

Реакция Розенгейма: сухой остаток растворяют в хлороформе, прибавляют 90%-ный водный раствор трихлоруксусной кислоты. Возникает розовая окраска, переходящая в лиловую.

3. Реакции на пятичленное лактонное кольцо. Все реакции проводятся со спиртовым очищенным извлечением из ЛРС в щелочной среде:

 реакция Легаля: с нитропруссидом натрия появляется быстро исчезающее красное окрашивание;

 реакция Раймонда: с м-динитробензолом - красно-фиолетовое окрашивание;

 реакция Кедде: с 3,5-динитробензойной кислотой - фиолетовое окрашивание;

 реакция Балье: с пикриновой кислотой - оранжевое окрашивание.

4. Реакции на шестичленный лактонный цикл:

 к спиртовому извлечению прибавляют насыщенный раствор треххлористой сурьмы в хлороформе - при нагревании возникает лиловая окраска;

 20% раствор треххлористой сурьмы в хлороформе используется для обнаружения буфадиенолидов на хроматограммах.

Кроме того сердечные гликозиды образуют нерастворимые комплексы с растворами ДВ, что используется при отравлениях сердечными гликозидами.

Биологические и химические методы стандартизации лрс

Количественную оценку качества сырья проводят методом биологической стандартизации (для всех видов) или с использованием физико-химических методов анализа (для сырья, из которого получают индивидуальные гликозиды).

Биологические методы позволяют установить силу действия того или иного сырья на определенных животных, но не показывают содержания гликозидов в ЛРС.

Принцип метода биологической стандартизации основан на способности сердечных гликозидов в токсической дозе вызывать остановку сердца животных в систоле. Активность ЛРС и препарартов определяют на лягушках, кошках, голубях и выражают в единицах действия (ЛЕД, КЕД, ГЕД).

За 1 ЛЕД принята наименьшая доза препарата, которая в течение часа вызывает у стандартной лягушки остановку сердца в период систолы. Активность исследуемых препаратов оценивается в сравнении со стандартом. Отсюда и понятие "биологическая стандартизация".

Разработка стандартов осуществляется специализированными научно-исследовательскими институтами.

Затем расчитывают содержание единиц действия в 1 г исследуемого средства (если это ЛРС или сухие концентраты), в одной таблетке (при испытании таблеток), в 1 мл (для жидких лекарственных форм).

В НД на ЛРС указывается валор. Валор сырья - это количество единиц действия в 1 г сырья.

Физико-химические методы основаны на сочетании хроматографического разделения очищенного извлечения, полученного из сырья, элюировании индивидуальных гликозидов и их количественном определении различными методами: