Санитарно-микробиологическое исследование воды

Среди объектов, подлежащих микробиологическому контролю в аптеках, важное место отводится исследованию воды. В соответствии с действующи­ми нормативными документами контролю подлежит:

- вода централизованного водоснабжения (вода питьевая),

- вода очищенная (для изготовления нестерильных лекарственных форм),

- вода для инъекционных растворов и глазных капель.

Отбор проб: для отбора проб питьевой воды используют стерильные флаконы емкостью 500 мл с притертой резиновой, корковой или каучуковой пробкой. Предварительно проводят обжигание кранов пламенем горящего тампона, смоченного спир­том, и спуск воды в течение 10-15 минут при полностью открытом кране. Бумажный колпачок с пробкой снимают с флакона непосредственно перед ее заполнением, не касаясь руками горлышка флакона и пробки. Пробы воды очищенной, используемой для приготовления нестерильных лекарствен­ных форм отбирают в ко­личестве 500 мл в стерильные бутылки, закрытые ватными пробками и бу­мажными колпачками. Пробы отбирают из бюретки, у которой предваритель­но обжигают кончик с помощью ватного тампона смоченного спиртом.

Пробы воды для приготовления инъекционных растворов и глазных капель, отбирают в стерильные флаконы в количестве 20 мл не­посредственно из баллона сразу же после перегонки или из сосудов, в которых вода стерилизуется.

Методика исследования: 1. Определение общего микробного числа (ОМЧ) – количества мезо­фильных аэробных и факультативно анаэробных бактерий в 1 см³ (1мл) – проводят для всех видов воды. Исследуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и остуженным питательным агаром (метод глубинного посева). Инкубируют в термостате при 37С 24 часа, после чего при комнатной температуре еще 24 часа. Подсчитывают на 2-х чашках число выросших колоний (на поверхности и в глубине питательного агара) и рассчитывают среднее арифметическое значение.

2. Для выявления плесневых и дрожжевых грибов исследуемую воду засе­вают по 0,5 мл на среду Сабуро и инкубируют при комнатной температуре в течение 3-4 суток. Подсчитывают число выросших колоний и также рассчитывают среднее арифметическое.

Таблица «Требования к микробиологической чистоте воды»

Наименование объекта контроля	Требования к микробиологичес­кой чистоте	Нормативный документ
Вода питьевая	общие колиформные бактерии, термотолерантные колиформные бактерии, колифаги должны отсутствовать в 100 мл воды; микробное число – не более 50 микроорганизмов в 1 мл; споры сульфитредуцирующих клостри­дий должны отсутствовать в 20 мл воды.	СанПиН 2.1.4.1074-01
Вода очищенная	Допускается не более 100 микроорганизмов в 1 мл воды при отсутствии Enterobacteriaceae, P.aeruginosa, S.aureus.	Фармакопейная статья (ФС) ФС 42-2619 - 97
Вода для инъекцион­ных растворов	Апирогенность (не более 15 микроорганизмов/мл).	ФС 42-2620 - 97

Результат (ОМЧ) вычисляют путем суммирования среднего арифмети­ческого числа бактерий, дрожжевых и плесневых грибов.

3. Присутствие колиформных бактерий определяют также в воде всех видов воды. Колиформные бактерии – это грамотрицательные аспорогенные палочки, не обладающие оксидазной активностью и ферментирующие лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 37С в течение 24-48 часов (или ферментирующие глюкозу с образованием кислоты и газа при температуре 37С в течение 24 часов).

Для определения колиформных бактерий в питьевой воде и воде очи­щенной используют метод мембранных фильтров. Исследуемую воду по 100 мл пропускают через 3 бактериальных фильтра из нитроцеллюлозы, которые затем помещают на среду MacConkey и инкубируют при температуре 37С 24 часа; подс­читывают количество выросших лактозоположительных колоний (красных с металлическим блеском).

Для определения колиформных бактерий в дистиллированной воде, ис­пользуемой для приготовления инъекционных растворов и глазных капель, по 1 мл исследуемого образца засевают в 9 мл глюкозо-пептонной среды, среды Кесслера или Кода. Посевы инкубируют при 37С 18-24 часов с даль­нейшими высевами на среду MacConkey (секторами) и инкубацией при 37С 24 часа. Из выросших лактозоположительных колоний делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении Гр– палочек колонии отсевают на глюкозо-пептонную среду с поплавком, инкубируют при 37С 24 часа. При наличии колиформных бактерий изменяется цвет среды и в поплавке скапливается газ.

По эпидемическим показаниям в очищенной воде и дистиллированной воде определяют присутствие Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aure­us.

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха

Методы исследования: 1. Аспирационный метод отбора проб – принудительное осаждение микробных частиц из воздуха. Для этого используют, например, пробоотборник аэро­золя бактериологического (ПАБ-1, аппарата Кротова). Принцип его действия основан на электри­зации частиц исследуемого воздуха и последующем их осаждении на электроде противоположного знака, роль которого играет металлический поддон с питательной средой (расчетная скорость протягивания воздуха 125-150 литров/мин). Принцип действия другого прибора – аппарата Кротова – основан на пропускании воздуха через клиновидную щель в крышке, расположенной над вращающейся поверхностью питательной среды в чашке Петри. При этом происходит инерционное осаждение бакте­рий из воздуха на поверхность питательной среды (расчетная скорость протягивания воздуха – 25 литров/мин, а чувствительность метода ниже, чем при использовании аппарата ПАБ-1). После инкубирования питательной среды подсчитывают количество выросших колоний и выражают обсемененность воздуха в КОЕ (колониеобразующих единицах) на определенный объем исследованного воздуха.

2. Седиментационный метод – осаждение микробов на поверхность плотной питательной среды под действием силы тяжести (гравитации). Открытую чашку Петри с питательной средой ставят на горизонтальную поверхность на высоте рабочего стола и оставляют на определенное время. Затем чаш­ку закрывают и инкубируют в термостате. С помощью этого метода можно ориентировочно определить микробную обсемененность водуха, используя специальную формулу: на 100 см² поверхности агара за 5 минут оседают бактерии из 10 л воздуха (10 дм³). Результат является относительным, по сравнению с данными, получаемыми при использова­нии различных приборов, так как на поверхность среды оседают пылевые частицы с большой молекулярной массой, мелкодисперсный аэрозоль остается во взвешенном состоянии и на поверхность питательной среды не оседает.

Тема лабораторной работы № 2:

МИКРОФЛОРА РАСТЕНИЙ. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МИКРОБНОЙ КОНТАМИНАЦИИ РАСТИТЕЛЬНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СЫРЬЯ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ, ИЗГОТОВЛЕННЫХ НА ЕГО ОСНОВЕ.

ЦЕЛИ: знать состав эпифитной микрофлоры и микоризы, ее роль для растения, механизмы резистентности лекарственных растений к фитопатогенным микробам, основных представителей фитопатогенных микроорганизмов, их биологические свойства и основные группы инфекционных заболеваний лекарственных растений, методы изучения микробной контаминации растительного лекарственного сырья и лекарственных форм, изготовленных на основе растительного лекарственного сырья, критерии их микробиологической безопасности; уметь обосновывать выбор методов санитарно-микробиологического исследования растительного лекарственного сырья и лекарственных форм, изготовленных на его основе, производить отбор проб для них; выбирать и обосновать метод выделения санитарно-показательных микробов при исследовании лекарственного растительного сырья и лекарственных форм; оценивать и интерпретировать результаты санитарно-микробиологических исследований.