Приложение 1 Методы микробиологического исследования при бруцеллезе

1. Материал исследования:

- кровь: берут 5-10 мл из вены в начальном периоде (до лечения антибиотиками),

- моча: 30-20 мл перед посевом центрифугируют 1-2 часа и далее работают с осадком,

- желчь: получают при дуоденальном зондировании (1,5-2 мл), перед посевом центрифугируют 1-2 часа.

Кроме указанных материалов можно исследовать:

- пунктат из костного мозга,

- ткани плода при спонтанном аборте,

- околоплодные воды,

- кусочки некротизированной плаценты,

- молоко родильницы;

В сельской местности еще:

- мясо погибших животных,

- молоко коров, коз,

- воду,

- навоз.

2. Методы исследования:

1. Микроскопический (ориентировочный, вспомогательный)

2. Бактериологический (один из основных)

3. Биологический (один из основных)

4. Иммунологический (наиболее часто используемый):

- серологические (реакции Райта, Хеддельсона, Минкевича, РИФ, РНИФ, ИФА),

- опсонофагоцитарная проба.

5. Аллергический:

- аллергическая проба Бюрне (с бруцеллином),

- РПН в присутствии аллергена.

Приложение 2

С хема бактериологического исследования на бруцеллез

I Этап: Материал исследования: Цель работы:

флаконы: накопление микробов

№ 1 № 2

МПБ + глюкоза + глицерин или необходимо 5-10% углекислого

печеночный бульон + 0,2% цитрат газа (зажечь ватную пробку и

натрия горящей ввести во флакон, затем

пробку залить расплавленным

парафином)

В термостат при + 37^оС 30 дней (контроль каждые 4-5 дней)

I I Этап: Материал исследования: Цель работы:

рост на жидких средах накопления получение изолированных

колоний

по Граму РИФ

печеночный агар +

антифаговая сыворотка +

генцианвиолет

В термостат при + 37^оС, 25-30 дней (контроль каждые 4-5 дней)

I II Этап: Материал исследования: Цель работы:

изолированные колонии выделение и

накопление чистой культуры

В термостат при + 37^оС,

на 20-25 дней

печеночный МПА

по Граму

(РИФ, РНИФ)

IV Этап: Материал исследования: Цель работы:

чистая культура на идентификация

печеночном МПА микробного вида

по Граму

(РИФ, РНИФ)

- дифференциация вида бруцелл по:

• потребности первичных генераций в СО₂;

• бактериостатическому действию на микробов анилиновых

красителей (основного фуксина, тионина);

• образованию H₂S;

• агглютинации монорецепторными сыворотками на стекле, в развернутой классической РА;

• чувствительности к фагу «Тб».

Заключение: на основе комплекса признаков.

Приложение 3

Таблица дифференциальных свойств видов роста бруцелл

ВИД	Потреб ность в CO2	Продук ция H2S	Рост на средах с добавлением		Агглютинация с моноспецифической сывороткой		Фагочувствительность
			Тионина	Основного фуксина	А	М
Br.melitensis	-	-	+	+	-	+	2 -
Br.abortus (bovis)	+	+	-	+	+	-	+
Br.abortussuis	-	++	+	-	+	-	-

Дифференциация видов бруцелл по биохимической активности

ВИД	Гл	Мл	Мн	Сах	Уреазная активность	Молоко	Желатина	Индол
Br.melitensis	К +	-	-	-	Через 2 часа	Не сверты вают	-	-
Br.abortus (bovis)	К +	-	-	-	Через 20-26 час.		-	-
Br.abortussuis	К +	К +	-	-	Через 20 мин.		-	-

Приложение 4