Задача 3. Определение границ осмотической резистентности эритроцитов

Наибольшее значение имеет определение границ осмотической резистентности. Эритроциты в гипертонических солевых растворах сморщиваются вследствие диффузии воды из эритроцита в направлении большего содержания солей, а в гипотонических – набухают в связи с поступлением воды в эритроцит вследствие осмоса (осмос – движение растворителя через полупроницаемую мембрану в направлении большей концентрации солей). При значительном набухании наступает гемолиз. Показателем прочности эритроцита может быть их осмотическая резистентность в гипотонических растворах с известной концентрацией хлорида натрия (концентрация изотонического раствора NaCl 0,9%).

О с н а щ е н и е: 8 пробирок, штатив, растворы NaC разной концентрации, кровь.

С о д е р ж а н и е р а б о т ы: В восемь пробирок с раствором хлорида натрия разной концентрации (0,9%, 0,8%,0,7%,0,6%,0,5%,0,45%,0,4%,0,3%) вносят один и тот же объем крови (0,3 мл). Через час определяют начало гемолиза по легкому порозовению раствора, а полный гемолиз – по интенсивной красной окраске раствора. Полностью гемолинизированная кровь прозрачна («лаковая кровь»). В норме минимальная резистентность колеблется между 0,48%–0,46%, максимальная – между 0,34%–0,32%.

О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а. 1. Занесите данные исследования в тетрадь. Зарегистрируйте пробирки, отметьте гемолиз.

2. Постройте график кривой осмотической резистентности эритроцитов по полученным данным.

Концентрация NaCl, %

3. Сделайте вывод о причинах и виде гемолиза эритроцитов.

Вывод

Задача 4. Химический гемолиз

О с н а щ е н и е: пробирки, физиологический раствор, нашатырный спирт, эфир, соляная кислота, кровь.

С о д е р ж а н и е р а б о т ы: Три пробирки, заполненные 5 мл физиологического раствора ставят в штатив. В каждую пробирку добавляют по 3 капли крови. Затем в первую пробирку добавляют 0,5 мл нашатырного спирта, во вторую – 0,5 мл эфира и в третью – 0,5 мл раствора, соляной кислоты. Через час отмечают изменение цвета и прозрачности в пробирках.

О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а. 1. Занесите результаты исследования в тетрадь.

Задача 5. Определение группы крови с помощью стандартных сывороток

Изучение условий агглютинации (склеивания) эритроцитов привело к открытию групп крови и сделало возможным ее переливание. В эритроцитах могут содержаться агглютиногены А и В, а в сыворотке – агглютинины α и β. Агглютиногены возникают у человека еще в эмбриональном периоде развития. Агглютинины появляются позже, и титр их в сыворотке крови у детей первых недель после рождения очень низок. В зависимости от наличия или отсутствия в эритроцитах агглютиногенов А и В различают четыре группы крови: группу I или 0 (α , β); группу II, или А(β); группу III, или В (α), группу IV, или АВ (в скобках указаны агглютинины). В сыворотке IV группы агглютининов α и β нет. Кровь человека, дающего кровь (донор) считается совместимой с кровью человека, которому переливают кровь (реципиент), если эритроциты донора не агглютинируются сывороткой реципиента.

О с н а щ е н и е: тарелка с нанесенными на ней обозначениями агглютининов сывороток, стандартные сыворотки I, II, III, групп, стеклянные палочки.

С о д е р ж а н и е р а б о т ы. С целью определения группы крови эритроциты исследуемой крови (вместе с плазмой, если ее немного) смешивают со стандартными сыворотками, содержащими агглютинины и α и , β (III и II группа). Наносят на тарелку (или на предметное стекло) по крупной капле сывороток III и II группы, а также с целью обязательного контроля – I группы. Для взятия сывороток из ампул применяют отдельные стеклянные палочки. Нельзя допускать смешивания сывороток!

Получают кровь из пальца путем скарификации стерильным одноразовым скарификатором или пользуются образцами крови, полученной со станции переливания. Захватывают концом чистой стеклянной палочки (или углом предметного стекла) небольшое количество крови, вносят в одну из капель сыворотки и перемешивают. Вносят кровь и в две остальные капли сыворотки, используя другие стеклянные палочки или углы предметного стекла. Слегка покачивая тарелку в течении 5 мин, наблюдают за каплями. Агглютинация видна в форме мелких красных крупинок, постепенно увеличивающихся в размере на фоне светлеющей смеси. На основании наличия или отсутствия агглютинации делают вывод о группе крови.

О ф о р м л е н и е п р о т о к о л а. 1. Проведите исследование, опешите его результат в тетради.

2. Заполните общую схему четырех групп крови, обозначив штриховкой реакцию агглютинации в соответствующих кружках.

3. Зарисуйте наблюдаемую вами картину с образцом исследованной крови.

Заключение о групповой принадлежности исследованной крови.