Заняття № 2.

Тема: Виготовлення мікробіологічних препаратів - мазків і фарбування їх простим способом.

Мета заняття:

1. Ознайомити студентів з фарбами, які використовуються для фарбування бактеріальних препаратів-мазків простим способом.

2. Засвоїти техніку виготовлення бактерійних препаратів — мазків і фарбування їх простим способом.

ЛІТЕРАТУРА: II. 42-46; VI. 21-24;VІІ.35-36

Зміст заняття

Викладач проводить опитування студентів з пройденого та наступного матеріалу знайомить з правилами використання фарб, показує техніку виготовлення препаратів — мазків з чистої культури мікроорганізмів, а також з зубного нальоту, демонструє техніку фарбування їх простим способом.

Самостійна робота студентів

Кожен студент самостійно:

• готує препарати з чистої культури бактерій і з зубного нальоту; фарбує їх простим способом; мікроскопує та робить малюнки у зошиті.

Оснащення заняття

Забезпечити кожного студента:

- мікроскопом, предметним склом, бактеріологічною петлею, спиртівкою, імерсійною олією, фільтрованим папером, практикумом та методичними вказівками.

Забезпечити кожних 2-3 студентів:

• культурою мікроорганізмів, склянкою з дезрозчином для використаних препаратів, фарбуючими розчинами (метиленова синь, карболовий фуксин), олівцем по склу, ванночкою з місточком, пастерівськими піпетками, водою для промивання.

Методика виконання завдання

Виготовлення бактеріального препарату — мазка. Бактерійний препарат — мазок готують на чистому знежиреному предметному склі. Знежирення здійснюється такими способами:

а) зануренням скла в розчин спирт — ефір 1:1;

б) над полум'ям спиртівки (проводячи над полум'ям поверхню скла);

в) протиранням скла серветкою обробленою господарським милом.

Для рівномірного розподілу культури мікроорганізмів взятих з щільного поживного середовища, використовують краплину дистильованої води.

Культуру мікробів розподіляють бактеріологічною петлею по склу рівномірним тонким шаром на площі 1-2 см2.

Під час взяття культури мікроорганізмів з рідкого середовища використовують пастерівську піпетку або бактеріологічну петлю.

Відбір всього матеріалу для дослідження проводять над полум'ям спиртівки, бактеріологічну петлю до і після використання пропалюють. Потім препарат висушують на повітрі при кімнатній температурі.

Наступний етап - фіксація препарату-мазка, який виконується фізичним або хімічним методом.

Хімічний метод заснований на здатності деяких речовин віднімати воду (гідрофільні властивості) - спирти, ацетон, ефіри або їх суміші.

Фізичний метод - термічна обробка препарату (60^оС), який використовується шляхом прогрівання зворотної сторони препарату 3-5 разів над полум'ям спиртівки.

Контроль за температурою здійснюється шляхом доторкування предметного скла до тильної сторони долоні.

Фіксація препарату переслідує мету: закріпити мікроби на склі, вбити бактерії для запобігання зараження і забруднення мікрофлорою оточуюче середовище, розруйнувати оболонку клітини для кращого проникнення фарби.

Фарбування.

Розрізняють прості, складні і спеціальні способи фарбування мікроорганізмів.

Просте фарбування дозволяє побачити форму і розмір бактерій, взаємне розміщення, дати родову назву мікроорганізмам.

Простий спосіб фарбування передбачає використання однієї фарби: карболового фуксину (експозиція 1-2 хвилини) або метиленової сині (експозиція 3-4 хвилини).

Після закінчення зазначеного терміну фарбу змивають, препарат висушують фільтрованим папером і проводять мікроскопію. Роблять малюнки у зошиті.