Методы посмертной диагностики

Посмертная диагностика заключается в гельминтологических вскрытиях животного или его отдельных органов и обнаружении гельминтов в различных стадиях развития. Разработаны полное гельминтологическое (ПГВ) и неполное гельминтологическое вскрытия (НПГВ) по К. И. Скрябину.

ПГВ в основном применяют при научно-исследовательских раз­работках, когда после снятия кожи начинают тщательный осмотр трупа с подкожной клетчатки, затем вскрывают грудную и брюшную полости, изучают их, далее отдельно извлекают каждый орган. Внутренние органы вскрывают в просторной посуде с водой, визуально или под лупой осматривают содержимое, слизистые и глубьлежащие слои (иногда просматривают под микроскопом). Собранных гельминтов фиксируют и этикетируют с указанием вида животного, его возраста, органа, места локализации и т. д. Кожу фиксируют в формалине, а кровь собирают в отдельную посуду для последующего изучения. ПГВ отдельных органов применяют для точного установления месторасположения гельминтов, определения интенсивности поражения органа, его различных слоев. Например, при дикроцелиозе вскрывают желчные ходы печени, желчный пузырь, при фасциолезе — строму печени, желчные ходы и пузырь, при диктиокаулезе — бронхи всех размеров, трахею, при мониезиозе — тонкий кишечник. Чаще всего на практике НПГВ при­меняют для постановки диагноза, сбора гельминтофауны для учеб­ных целей и пополнения музейных экспонатов. Из органов и тка­ней извлекают только отдельных гельминтов.

Глава 7. Изучение гельминтологической ситуации на животноводческих объектах

Отдельные зоны нашей страны резко отличаются друг от друга по агроклиматическим условиям и ведению животноводства. Поэтому необходимо иметь подробные сведения о распространениигельминтов и вызываемых ими заболеваний в конкретных условиях. С этой целью проводят гельминтологическую оценку пастбищ и определяют гельминтологическую ситуацию в животноводческих хозяйствах и на фермах.

Практическим ветеринарным работникам необходимо иметь единую форму (журнал учета и регистрации заболеваний) описания исследуемого объекта, в которой коротко можно было бы отразить характер инвазии: гео- или биогельминт, экто- или эндопаразит, ЭИ и ИИ, предполагаемые сроки заражения животных, влияние эколо­гических факторов на возникновение заболевания в каждом кон­кретном случае и т. д. Кроме того, ветеринарной службе хозяйств, района, области желательно вести паразитологическую карту, где систематически следует отражать динамику особо важных инвазий. Методы выявления инвазий у животных общеизвестны. Для этого проводят частичное или полное гельминтологическое вскры­тие трупов и органов, применяют специальные и гельминтокопрологические исследования.

К факторам, способствующим развитию, накоплению и распро­странению инвазионного начала (гео- и биогельминтов) в окружа­ющей среде, относятся следующие:

агроклиматические условия местности (наличие лесов, водных ресурсов, засоренность пастбищ и сенокосов кустарниками, кочка­ми, рельеф территории, температурные показатели и т. д.);

характер административно-хозяйственной деятельности (видо­вой и возрастной состав животных, их плотность на 100 га земли, наличие искусственных и окультуренных пастбищ, условия содер­жания и пастьбы животных и т. д.);

наличие промежуточных хозяев для развития биогельминтов и наличие резервуаров.

Помимо непосредственных исследований самих животных (им­мунологические, гельминтокопрологические, вскрытие и т. д) сле­дует обратить особое внимание на загрязненность внешней среды яйцами и личинками гельминтов (трава, сено, вода, почва, различ­ные предметы ухода за животными и т. д.). Яйца и личинки геогель­минтов рассеяны на пастбищах повсюду и невидимы невооружен­ным глазом. Тем не менее, для их обнаружения есть ряд методов исследования объектов внешней среды.

Обследованию подвергают как территорию животноводческих помещений, так и пастбищно-сенокосные участки, а в отдельных случаях и лесные массивы, где выпасают главным образом крупный рогатый скот. Для исследования и сравнения загрязненности участ­ков инвазионными элементами гельминтов берут стандартные навески в определенный период суток и число яиц, личинок гель­минтов пересчитывают на 1 кг почвы или 1 л воды. Объектами исследований являются растительность, вода и почва.

При исследовании растительности для улавливания личинок гельминтов используют общеизвестный метод Бермана. В большую воронку диаметром 50 см (по верхнему краю) с металлической сеткой помещают пробу сена или травы не менее 500 г и заливают ее теплой водой на сутки. Через сутки осадок исследуют под микроскопом. Таким способом обнаруживают и личинок свободноживущих нематод. Нередко в пробах могут ока­заться и яйца гельминтов. В отдельных случаях можно пользоваться методом промывания травы, но он менее эффективен.

При исследовании воды используют несколько мето­дов и их модификации. Наиболее простой и приемлемый в практи­ческих условиях — метод отстаивания пробы воды в течение нескольких часов и изучения осадка под микроскопом.

Для получения осадка применяют планктонную сеть, изготов­ленную из шелкового сита № 70 или авиационной ткани перкаль. Сеть опускают в водоем и протаскивают на некоторое расстояние. Взвешенные в воде частицы, осевшие на сети, переносят в стаканы, добавляют воду, отстаивают и исследуют под микроскопом.

Наиболее точные результаты получены при фильтровании воды через ультрафильтры, применяемые для бактериологического исследования воды.

Для обнаружения яиц гельминтов используют аппарат Гольдмана, в котором воду фильтруют через мембранные фильтры (№ 6 или предварительные). После фильтрования воды мембранные филь­тры просветляют 50%-ным раствором глицерина и просматривают под микроскопом.

Для исследования воды на яйца гельминтов 3. Г. Василькова рекомендует более простой, но достаточно эффективный метод. Мембранные фильтры заменяют фильтровальной бумагой (лучше в два слоя) в аппарате Зейца или в обычной стеклянной воронке. После фильтрования исследуемой воды фильтры высушивают на открытом воздухе и разрезают на кусочки (по величине покровного стекла). На кусочки фильтра наносят кедровое масло, накрывают покровным стеклом и исследуют через 12—20 ч.

Для сильно загрязненной воды рекомендуют использовать ком­бинирование метода отстаивания с методом фильтрования.

При исследовании почвы пробы (100 г) берут сов­ком и этикетируют (дата, характер местности). На наличие яиц гельминтов пробы исследуют по Васильковой и Гефтер. Почву (12,5 г) помещают в металлические центрифужные пробирки объемом около 100 мл, добавляют 10—12 стеклянных бусинок и камешков, 20 мл 5%-ного раствора едкой щелочи (NaOH или КОН) и тща­тельно перемешивают. Через 1 ч пробирки помещают на 20 мин в аппарат для встряхивания (если нет, то встряхивать вручную), затем смесь центрифугируют в течение 3—5 мин, раствор щелочи слива­ют, а осадок перемешивают с 60—100 мл насыщенного раствора нитрата натрия и центрифугируют 2 мин. Далее проволочной петлей снимают поверхностную пленку и исследуют под микроскопом. Используют и метод Н. А. Романенко, удобный и достаточж эффективный. Для этого из общей пробы берут 50 г супесчаной юн 25 г суглинистой (можно и черноземной) почвы, помещают в цент рифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл водь (при необходимости количество ингредиентов можно уменьшить) Смесь перемешивают палочкой в течение 5—8 мин, всплывшие частицы удаляют. Затем центрифугируют в течение 3 мин при частоте вращения центрифуги 600—1000 об/мин, воду сливают, а в пробирки добавляют 150 млн насыщенного раствора нитрата нат­рия. После перемешивания палочкой вновь центрифугируют 3 мин. Микроскопируют, как и в первом случае. Для обнаружения яиц гельминтов можно использовать метод последовательных смывов. Для выявления яиц тениид Р. И. Бабаев и А. Н. Брудастов пред­ложили пробу почвы замачивать на 20 ч в 1—2%-ном растворе сти­рального порошка, а затем обрабатывать в растворе следующего состава с относительной плотностью 1,4—1,42: натриевой селитры 600 г, гипосульфита 500, поваренной соли 200 г, горячей воды 1 л. Флотационный раствор еще более высокой относительной плотно­сти (1,46—1,47) можно получить, растворив в 1 л горячей воды 900 г натриевой селитры и 400 г калиевой селитры. Всплывшие частицы снимают проволочной петлей и микроскопируют.

Для обнаружения личинок в почве используют метод Бермана, дополнительно вложив в сетку мельничный газ или молочные фильтры, которые удерживают частицы почвы.

Гельминтологическую ситуацию при биогельминтозах оцени­вают путем исследования промежуточных хозяев паразитов (малый и ушковидный прудовик — при фасциолезе, орибатидные клещи — при мониезиозах, сухопутные моллюски и муравьи — при дикроцелиозе, мухи — при телязиозе и т. д.), определяют условия их распро­странения, интенсивность и экстенсивность заражения, стадии раз­вития личинок по сезонам года и т. п.

Моллюсков, орибатидных клещей и мух собирают по общепри­нятым методикам. Муравьев, зараженных личинками дикроцелиума, следует собирать главным образом весной и осенью, когда чаще встречаются оцепеневшие особи (можно и летом). Насекомые оцепеневают, как правило, вблизи муравейника (до 4 м) утром и вече­ром, а в пасмурный день их можно обнаружить круглосуточно с нижней стороны листа и на цветках растений.

Для вскрытия моллюсков их кладут между двумя предметными стеклами и слегка сдавливают, пока не разрушится раковина. Затем пинцетом и препаровальной иглой моллюска очищают от ракови­ны. Для обнаружения личинок фасциол и дикроцелиума микроско­пируют печень, почки и белковую железу, а при протостронгилидо-зах жвачных — ножку моллюска путем сдавливания между двумя предметными стеклами в 2—3 каплях воды или физраствора.

Зараженность орибатидных клещей личинками мониезий опре­деляют двумя путями. Живых клещей (светло-коричневого цвета) помещают на предметное стекло в естественном положении в 2—3 каплях воды, накрывают покровным стеклом. Затем микроскопи­руют под малым увеличением при сильном искусственном освеще­нии снизу. У зараженных клещей контуры цистицеркоида хорошо просматриваются благодаря плотно расположенным в нем известко­вым тельцам. Если же осматривают клещей черного и темно-корич­невого цвета или же личинок цестод, находящихся на ранних стадиях развития, то необходимо разрушить панцирь клеща под покровным стеклом в физрастворе. Затем иглами панцирь удаляют, а тело клеща расщепляют под бинокулярной лупой. При необходимости тело расщепленного клеща изучают под микроскопом.

Для определения зараженности муравьев личинками дикроцелий (хотя достаточно обнаружить оцепеневших муравьев) вначале пин­цетом и препаровальной иглой отделяют головогрудь от брюшка. Брюшко в последующем вскрывают двумя иглами в капле воды на предметном стекле и просматривают под микроскопом (малое уве­личение) или бинокулярной лупой. Светло-серые метацеркарии достаточно хорошо видны на темном фоне и невооруженным глазом.

Сбор, консервацию и пересылку гельмин­тов осуществляют как в научных исследованиях, так и в практи­ческой работе.

Для консервирования трематод, цестод и акантоцефал приме­няют 70%-ный спирт, нематод — жидкость Барбагалло. Прежде чем гельминтов фиксировать, их нужно хорошо промыть и держать в воде, пока не погибнут. Цестод и трематод по целевому назначе­нию желательно спрессовать между стеклами соответственно в 10%-ном (15—18 ч) и 70%-ном (30 мин) спирте и по истечении вре­мени перенести в место постоянного хранения. Биологические про­бирки с гельминтами должны быть герметически закрыты.

Каждый сбор этикетируют с указанием адреса, времени обнару­жения, локализации паразита, органа, количества гельминтов, вида животного, фамилии сборщика. Запись делают простым каранда­шом на белой бумаге и опускают ее так, чтобы был виден текст.

Личинок цестод консервируют в жидкости Барбагалло. При кон­сервировании скребней, предварительно склеивая их между двумя стеклами, выдавливают хоботок. Нематод после гибели в воде фик­сируют в жидкости Барбагалло и этикетируют так же, как и других гельминтов.

Весь законсервированный материал должен быть плотно упако­ван при помощи ваты и ветоши. Пробирки вкладывают в банки и хранят в плотно закупоренном виде. Гельминтологический мате­риал можно пересылать в герметически закрытых пробирках, ста­канчиках, банках, которые укладывают в прочный деревянный

ящик, закрепив при помощи пенопласта, поролона, ваты или вето­ши.

Патологический материал фиксируют 10%-ным нейтральным формалином, этикетируют и отправляют так же, как и гельминтов. Фиксированный материал можно отправлять и без жидкости. Его заворачивают во влажную вату или марлю (с фиксатором), кладут в целлофановые мешочки и затем упаковывают в плотный ящик. Фекалии больных животных для длительного хранения фиксируют 25%-ным раствором формалина.