Лабораторная диагностика. Основана на выделении и индикации возбудителя. В мазках из клинического материала выявляют грамотрицательные мелкие палочки, часто окрашивающи­еся биполярно.

Хорошо растут на кровяном агаре; колонии 1-2 мм в диаметре; большинство видов не проявляет гемолитической активности, но может вызвать окрашивание среды в зеленый или коричневый цвет. Колонии отличаются затхлым запахом плесени.

Питательные среды для культивирования пастерелл

Пригодны общепринятые плотные и жидкие питательные среды, однако при выделении из патологического материала следует применять среды, обогащенные кровью, сывороткой крови, дрожжевым экстрактом.

Идентификация Р. multocida сероварианта А с использованием гиалуронидазы стафилококка.

Метод основан на способности гиалуронидазы, выделяемой стафилококком, деполимеризовать капсулу Р. multocida сероварианта А, состоящую из гиалуроновой кислоты.

На поверхность агара Хоттингера в чашке Петри штрихом высева­ют суточную бульонную культуру Р. multocida. После этого перпенди­кулярно линиям посева по всему диаметру чашки петлей высевают суточную бульонную культуру Staphylococcus aureus. Чашки с посевами инкубируют при 37°С с периодическим просмотром в течение 24 ч. Деполимеризующее действие гиалуронидазы проявляется уменьшением размера колоний пастерелл и примыкающих к линии роста стафилококков. При просмотре чашек в косопроходящем свете колонии Р. multocida сероварианта А, находящиеся в непосредственной близости от линии роста стафилококка, тусклые, серого или голубого цвета, в то время как остальные колонии — яркие, флюоресцирующие. У колоний, об­разуемых другими серовариантами (В, D, Е), изменений в размерах и окраске не наблюдается.

Идентификация Р. multocida сероварианта D с использованием акрифлавина.

Испытуемую культуру высевают на агар Хоттингера с 10% крови быка или барана и инкубируют при 37°С 24 ч, затем пересевают в пробирки, содержащие 3 мл бульона Хоттингера. Инкубируют при 37°С 18-24 ч. Бульонные культуры переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют в режиме, обеспечивающем осаж­дение бактериальных клеток. После центрифугирования 2,5 мл надосадочной жидкости сливают, а в оставшейся ресуспендируют осевшие клетки и добавляют 0,5 мл свежеприготовленного водного раствора (1:1000 - 1:500) нейтрального акрифлавина (синий трипафлавин, флавакридин, флавин). Перемешивают и оставляют при комнатной температуре.

Если испытуемая культура относится к сероварианту D, то в те­чение 10-20 минут образуется крупнохлопчатый осадок. Штаммы дру­гих серовариантов (А, В, Е) в осадок не выпадают и сохраняют ста­бильность суспензии в течение длительного времени (от нескольких часов до суток и более).

Тема № 22. Бактерии рода Brucella

Цель занятия: изучить бактерии рода Brucella, морфологию, структуру.

Материалы и оборудование: культуры микроорганизмов рода Brucella, чашки Петри, штативы с пробирками

Brucella — бактерии, представляют собой мелкие (0,5-0,70,6-1,5 мкм) неподвижные палочки или коккобациллы. В мазках обычно расположены одиночно, реже парами, короткими цепочками, небольшими группами. Легко окрашиваются анилиновыми красителями, грамотрицательны. Полноценного биполярного окрашивания обычно не обнаруживают. Настоящих капсул не имеют, спор не образуют. Неподвижны, жгутиков не образуют.

Хемоорганотрофы, метаболизм дыхательный; для роста необходи­мы тиамин, ниацин и биотин; рост часто стимулирует внесение пантотената кальция. Восстанавливают нитраты (исключая Brucella ovis); каталазоположительны и обычно оксидазоположительны, цитрат не утилизируют; индол не образуют; реакции с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра отрицательные. Строгие аэробы (некоторые нуждаются в увеличении концентрации СО₂ до 5-10%); растут в пределах 20-40°С (оптимальная температура 37°С); оптимум рН 6,6-7,4. Факультативные внутриклеточные паразиты; человек заболевает при непосредственном контакте с больным животным (доярки, скотники), а также при употреблении в пищу зараженных продуктов.

Патогенные для человека Brucella abortus (палочка Банга), В. melitensis, В.suis, В. canis и их биотипы вызывают бруцеллез (также известен как ундулирующая, средиземноморская, мальтийская лихорадка или болезнь Банга).