- •Микробиология. Лабораторный практикум Волгоград 2012
- •Тема №2. Микроскопический метод исследования микроорганизмов.
- •Тема №3 «Бактериологические красители. Техника приготовления окрашенных препаратов бактерий. Простые и сложные методы окраски»
- •Тема №4. Специальные методы окраски и определение подвижности бактерий.
- •Тема №5. Питательные среды и приготовление их.
- •Тема №6. Техника посева бактериологических культур на жидкие и плотные питательные среды.
- •Тема №7. Культуральный рост микроорганизмов. Рост аэробов.
- •Тема №8. Биохимические свойства микробов и методы их изучения.
- •Тема №9. Заражение лабораторных животных. Определение патогенности микроорганизмов
- •Тема №10. Бактериофаги (биологические факторы)
- •Тема №11. Антибиотики и антибиотикочувствительность
- •Тема №12. Реакция агглютинации и ее модификации.
- •Тема №13. Реакция преципитации и ее модификации.
- •Тема №14. Реакция связывания комплемента (рск).
- •Тема №15. Метод флуоресцирующих антител (мфа). Реакция нейтрализации (рн).
- •Тема №16. Грамположительные, аэробные и факультативные кокки
- •Тема №17. Бактерии рода Streptococcus
- •Стрептококки группы в
- •S. Pneumoniae (пневмококк)
- •Лабораторная диагностика
- •Негемолитические стрептококки
- •Лабораторная диагностика
- •Тема №18. Бактерий рода Erysipelothrix
- •Питательные среды для культивирования е. Rhusiopathiae
- •Лабораторная диагностика бактерий рода Listeria
- •Лабораторная диагностика
- •Тема №19. Бактерии рода Mycobacterium
- •Лабораторная диагностика
- •Биологическая проба
- •Серологические исследования
- •Кожные пробы с туберкулином
- •Bacillus anthracis - Возбудитель сибирской язвы у человека и животных. Морфология возбудителя
- •Тема №20. Бактерии рода Clostridium
- •Возбудитель столбняка Clostridium tetani
- •Лабораторная диагностика
- •Возбудитель ботулизма Clostridium botulinum
- •Тема № 21. Бактерии рода Pasteurella
- •Лабораторная диагностика. Основана на выделении и индикации возбудителя. В мазках из клинического материала выявляют грамотрицательные мелкие палочки, часто окрашивающиеся биполярно.
- •Питательные среды для культивирования пастерелл
- •Тема № 22. Бактерии рода Brucella
- •Лабораторная диагностика
- •Тема № 23. Бактерии рода Pseudomonas
- •Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка)
- •Морфология и тинкториальные свойства возбудителя
- •Биохимические свойства
- •Морфология и тинкториальные свойства
- •Культуральные свойства. Растет на простых средах, дополненных 4-5% глицерина; растет в интервале 20-45°с (оптимум 37°с); оптимум рН 6,5-7,2. Строгий аэроб.
- •Тема № 25. Бактерии рода Salmonella
- •Тема № 26.Возбудитель аспергиллеза.
Питательные среды для культивирования е. Rhusiopathiae
Для выделения культур лучше использовать питательные среды с 5—10% сывороткой крови и 0,2—0,5% глюкозы. При исследовании материала, контаминированного посторонней микрофлорой, целесообразно пользоваться селективными средами.
Селективная среда ESB. В 1000 мл стерильного питательного бульона вносят 50 мл сыворотки крови лошади, 400 мг канамицина, 50 мг неомицина, 25 мг ванкомицина. Среда пригодна для использования в течение 12—14 дней, хранение при 4°С.
Селективная среда МВА. В 1000 мл питательного агара добавляют 0,4 г азида натрия. Стерилизуют при 121°С 15 минут и асептически вносят 50 мл сыворотки крови и 20 мл крови лошади.
Лабораторная диагностика бактерий рода Listeria
Листериоз – зооантропонозная болезнь животных и человека, характеризующаяся поражением нервной системы, септическими явлениями, абортами и маститами.
Listeria monocytogenes
Этот вид является типовым для бактерий данного рода. Для микроорганизмов этого вида характерными являются следующая группа признаков. Это неспорообразующие, короткие палочки правильной формы диаметром 0,4-0,5 мкм и длиной 0,5-2 мкм, с закругленным концами. Иногда встречаются клетки с слегка изогнутыми концами. Расположение в мазках либо поодиночке, либо в коротких цепочках, возможно в виде частокола или же римской буквы V.
В мазках можно увидеть и групповое расположение, параллельное вдоль длинной оси. В мазках из инфицированного пат. материала или из жидкой среды встречаются листерии кокковой формы диаметром 0,4-0,5 мкм и длиной 0,4-0,6 мкм. Они могут быть ошибочно приняты за стрептококки. В более зрелых или необработанных культурах могут встречаться формы в виде волокон длиной до 6-20 мкм.
Окраска по Граму положительная. Но в старых культурах теряют способность к сохранению окраски по Граму. Некислотоустойчивы.
Листериозная палочка во время культивирования при комнатной температуре всегда подвижна. При температуре +37°С жгутики как правило, не образуются и листерии оказываются неподвижными.
Листериозная культура данного вида является аэробной и факультативно анаэробной. Температурный диапазон роста от +1 до +4°С. Однако, культура остается жизнеспособной и при более высоких температурах (до 70-71°С). Температурный оптимум 25-37°С. Листерии способны расти и размножаться в диапазон рН от 6 до 9, но сохраняют свою жизнеспособность при величине рН 5-11. Оптимальные условия роста при рН 7,0-7,4. В анаэробных условиях, на кровяном агаре при температуре 35-37°С и рН 7,2-7,4 суточный рост листерий проявляется в виде росинчатых колоний. В аэробных условиях, на питательном агаре, оптимальном температурном диапазоне, 24-48-часовые листериозные колонии имеют диаметр 0,5-1,5 мм, круглые, полупрозрачные в виде капли, выпуклые с ясно очерченной поверхностью и сплошной гранью. При обычном освещении колонии обладают серо-голубоватым цветом. Размер 3-7-дневных колоний достигает диаметра 3-5,5 мм, колонии с непрозрачным центром и неправильной формы. В полужидкой среде 0,25%-ного агара суточный рост идет вдоль укола. В МПБ рост идет медленно, но через 28-48 часов появляется нежное, опалесцирующее помутнение. Через 7 дней на дне пробирки образуется осадок, который при встряхивании образует поднимающуюся вверх косичку. Бактерии обладают гемолитической активностью. Слабая, едва уловимая гемолитическая активность может быть усилена использованием САМР-теста. Листериозная культура в большинстве случаев является каталазоположительной и оксидазоотрицательной, но необходимо учитывать, что если питательные среды содержат низкие концентрации мясного и дрожжевого экстракта, то возможна отрицательная каталазная реакция. Активность каталазы подавляется на средах, содержащих высокую (более 10%) концентрацию глюкозы.
Реакция с метилротом и Фогес-Проскауэра положительна.
Листерии не разжижают желатин, не гидролизуют казеин и молоко. Индол не продуцируют, на обычных питательных средах не образуют сероводород. Расщепление сахаров сопровождается образованием кислоты, но не газа.
Листерии могут расти в сложных средах, содержащих до 10% NaCl. В течение года остаются жизнеспособны при 16% содержании поваренной соли (рН-6,0), некоторые штаммы выживают даже 20% содержании NaCl.
Необходимо отметить, что хотя вышеперечисленные свойства листерий достаточно типичны, но возможны их изменения, связанные с определенными питательными средами или выделением новых штаммов.
Штаммы данного вида различаются по антигенному составу и включают следующие серовары: 1/2а, 1/2в, 1/2с, 3а, 3в, 3с, 4а, 4ав, 4с, 4d, 4е и серовар 7. Вызывает менингоэнцефалит, септицемию, эндокардит, аборты, абсцессы и гнойные ранения местного характера.