- •Микробиология. Лабораторный практикум Волгоград 2012
- •Тема №2. Микроскопический метод исследования микроорганизмов.
- •Тема №3 «Бактериологические красители. Техника приготовления окрашенных препаратов бактерий. Простые и сложные методы окраски»
- •Тема №4. Специальные методы окраски и определение подвижности бактерий.
- •Тема №5. Питательные среды и приготовление их.
- •Тема №6. Техника посева бактериологических культур на жидкие и плотные питательные среды.
- •Тема №7. Культуральный рост микроорганизмов. Рост аэробов.
- •Тема №8. Биохимические свойства микробов и методы их изучения.
- •Тема №9. Заражение лабораторных животных. Определение патогенности микроорганизмов
- •Тема №10. Бактериофаги (биологические факторы)
- •Тема №11. Антибиотики и антибиотикочувствительность
- •Тема №12. Реакция агглютинации и ее модификации.
- •Тема №13. Реакция преципитации и ее модификации.
- •Тема №14. Реакция связывания комплемента (рск).
- •Тема №15. Метод флуоресцирующих антител (мфа). Реакция нейтрализации (рн).
- •Тема №16. Грамположительные, аэробные и факультативные кокки
- •Тема №17. Бактерии рода Streptococcus
- •Стрептококки группы в
- •S. Pneumoniae (пневмококк)
- •Лабораторная диагностика
- •Негемолитические стрептококки
- •Лабораторная диагностика
- •Тема №18. Бактерий рода Erysipelothrix
- •Питательные среды для культивирования е. Rhusiopathiae
- •Лабораторная диагностика бактерий рода Listeria
- •Лабораторная диагностика
- •Тема №19. Бактерии рода Mycobacterium
- •Лабораторная диагностика
- •Биологическая проба
- •Серологические исследования
- •Кожные пробы с туберкулином
- •Bacillus anthracis - Возбудитель сибирской язвы у человека и животных. Морфология возбудителя
- •Тема №20. Бактерии рода Clostridium
- •Возбудитель столбняка Clostridium tetani
- •Лабораторная диагностика
- •Возбудитель ботулизма Clostridium botulinum
- •Тема № 21. Бактерии рода Pasteurella
- •Лабораторная диагностика. Основана на выделении и индикации возбудителя. В мазках из клинического материала выявляют грамотрицательные мелкие палочки, часто окрашивающиеся биполярно.
- •Питательные среды для культивирования пастерелл
- •Тема № 22. Бактерии рода Brucella
- •Лабораторная диагностика
- •Тема № 23. Бактерии рода Pseudomonas
- •Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка)
- •Морфология и тинкториальные свойства возбудителя
- •Биохимические свойства
- •Морфология и тинкториальные свойства
- •Культуральные свойства. Растет на простых средах, дополненных 4-5% глицерина; растет в интервале 20-45°с (оптимум 37°с); оптимум рН 6,5-7,2. Строгий аэроб.
- •Тема № 25. Бактерии рода Salmonella
- •Тема № 26.Возбудитель аспергиллеза.
Лабораторная диагностика
Лабораторная диагностика включает методы, входящие в обязательный диагностический минимум, и дополнительные методы исследования. Первые включают, помимо физикального и рентгенологического исследования, следующие манипуляции.
В случае заболевания микроскопия патологического материала (мокрота, отделяемое свищей, моча, промывные воды из бронхов) в мазках, окрашенных по Цилю-Нильсену, может выявить красные кислотоустойчивые палочки, в последние годы в практику внедрен метод Мурахаси-Йошиды (1957), позволяющий дифференцировать мертвые и живые бактерии. Однако бактериоскопический метод наименее чувствителен, т.к. позволяет выявить возбудитель при содержании 100000-500000 микобактерий в 1 мл материала.
При незначительном содержании возбудителя можно использовать метод накопления по Уленгуту — материал смешивают с равным или двойным объемом смеси NaCI и NaOH, энергично встряхивают и инкубируют 30 минут при температуре 21°С Затем клеточный детрит и посторонние бактерии (в виде супернатанта), разрушившиеся под действием щелочи, удаляют центрифугированием; осадок нейтрализуют 30% раствором уксусной кислоты и готовят мазки, окрашиваемые по Цилю-Нильсену или Киньону.
Более эффективен метод флотации — в материал вносят раствор NaOH, дистиллят и ксилол (бензол) и энергично длительно встряхивают, образующаяся пена всплывает и захватывает микобактерий; ее отсасывают и готовят мазки.
Определенную ценность в оценке тяжести процесса, эффективности лечения и прогноза заболевания имеет количественная оценка популяции микобактерий методом Гаффки-Стинкена (подсчет бактерий на калиброванных стеклах в определенных полях зрения). Наиболее результативный бактериоскопический метод — люминесцентная микроскопия, т. к. окраска флюорохромом (например, аурамин-родамином) позволяет выявлять даже незначительное количество микобактерий (окрашиваются в бело-желтый цвет), а также формы с измененными культуральными и тинкториальными свойствами.
Выделение возбудителя. Перед посевом исследуемый материал можно обработать по Уленгуту или Сумиоши (15-20% раствором НСl или H2SO4), исследуемые образцы центрифугируют, отмывают физиологическим раствором и засевают, тщательно втирая, на твердые питательные среды (обычно Левенштайна-Йенсена). Для простоты можно обработать образцы различными антибиотиками, подавляющими рост контаминирующей флоры. Недостаток метода — длительность получения результата от 2 до 12 недель; достоинство — возможность получения чистой культуры, что позволяет ее идентифицировать, оценить вирулентные свойства и определить чувствительность к лекарственным препаратам.
Разработаны ускоренные методы выделения возбудителя (например, Прайса): материал помещают на предметное стекло, обрабатывают H2SO4, отмывают физиологическим раствором и вносят в питательную среду, дополненную цитратной кровью. Стекло вынимают через 3-4 суток и окрашивают по Цилю-Нильсену.
Биологическая проба
«Золотой стандарт» в диагностике туберкулеза — биологическая проба на морских свинках, зараженных подкожно или внутрибрюшинно 1 мл материала, полученного от больного.
У животных развивается генерализованная инфекция, приводящая к смерти через 1-2 месяца; однако заболевание можно распознать раньше постановкой проб с туберкулином — через 3-4 недели после заражения, а лимфадениты обнаруживают уже на 5-10 сутки. Пунктаты последних содержат значительное количество микобактерий.
Появление в последние годы резистентных (особенно изониазид-устойчивых) или измененных микобактерий снизило чувствительность биологической пробы. Для ее повышения применяют интратестикулярное заражение либо подавляют иммунитет организма животных введением глюкокортикоидов.