23. Методы генной иммунизации

Новый подход, позволяющий индуцировать у организма иммунный ответ без введения анти­гена, основан на включении в клетки животно­го-мишени гена, кодирующего белок-антиген. В первых экспериментах такого рода Е. соli-плазмиду, конъюгировали с микрочастицами золота и бомбардировали ими клетки уха мыши. Впос­ледствии выяснилось, что клонированную кДНК можно вводить в клетки и с помощью внутримышечной инъекции раствора с боль­шим количеством плазмиды, несущей соответ­ствующую ДНК. Этот подход позволяет избежать очистки антигена, что требует много времени и средств, или использования для создания вакцины технологии рекомбинантных ДНК. Кроме того, получаемые с его помощью белки с большей вероятностью подвергаются правильной посттрансляционной модифика­ции, чем белки, синтезируемые организмами-хозяевами. Этот метод, получивший название генной иммунизации, можно использовать для вакцинации домашних животных.

Перспективы генной иммунизации были тщательно изучены. ДНК-иммунизация позволяет не только из­бежать очистки белковых антигенов, но и инду­цировать иммунный ответ, направленный именно на кодируемый плазмидой белок, а не на саму плазмиду. Поэтому один и тот же вектор можно использовать для доставки разных бел­ков или для многократного введения одного и того же гена.

Судьба введенной в клетку ДНК точно неиз­вестна. В принципе она может интегрировать в геном хозяина с весьма серьезными последст­виями, если при этом затрагивается какой-то важный ген или происходит злокачественная трансформация клетки. Такая ДНК какое-то время просуществует в клетке в виде нереплицирую-щегося внехромосомного элемента, а затем разрушится.

Генную иммунизацию пока ис­пользуют для выработки иммунитета к некото­рым патогенным микроорганизмам (вирусу гриппа А, вирусу иммунодефицита человека типа I, вирусу бычьего герпеса, вирусу бешен­ства) у животных, но не у челове­ка.

Для облегчения доставки ДНК в клетки жи­вотных при проведении генной иммунизации был создан модифицированный штамм Shigella flexneri. Эта бактерия проникает в эпителиаль­ные клетки животных путем фагоцитоза, и при­сутствующая в ней плазмидная ДНК попадает в цитоплазму клетки-хозяина, где и происходят транскрипция и трансляция переносимого ею ге­на, находящегося под контролем эукариотического промотора.

Эксперименты, в которых в качестве векто­ра для доставки ДНК в клетки использовалась Shigella, были проведены на морских свинках, и хотя они оказались успешными, судить о без­опасности данной системы можно будет лишь после проведения клинических испытаний. Огромным преимуществом этого подхода яв­ляется возможность перорального введения вакцин.

25. Макро- та мікро солі в живильних середовищах для культивування рослин in vitro.

Питательная среда — основной фактор, обусловливающий успех клональнога¹ микроразмножения. Основой всех питательных сред являются минеральные соли, необходимые растению: макроэле­менты — М- Р, К, Са, М§; микроэлементы — В, Мп, 2п, Си, Со, Мо, Г, РёЖроме того, в состав питательных сред входят амино­кислоты,^; витамины, регуляторы роста. Поскольку питание культи­вируемых тканей гетеротрофно, необходимо присутствие углево­дов: сахарозы, глюкозы или фруктозы.

Наиболее распространена среда Мурасиге — Скуга, которая со­держит хорошо сбалансированный состав питательных веществ, благоприятный для роста изолированных тканей многих растений.

Среда Мурасиге — Скуга,

Макросоли: . Эти соли дают восстановленный азот ,который входит в белок,нуклеотиды. Дает фосфор,калий,магний и т.д.

Микросоли: Даёт I,B,Mo.