39) Микробиологический контроль лекарственных средств, стерилизуемых в процессе производства.
Лекарственные средства для инъекций, глазные капли, мази, пленки, другие лекарственные средства, в отношении которых имеются соответствующие указания в нормативно-технической документации, должны быть стерильными.
Отбор образцов для анализа – число образцов из каждой серии от 3 до 40, в зависимости от метода стерилизации, для автоклавированных средств – 10. Для исследования лекарственные средства должны быть приготовлены в виде растворов, суспензий и эмульсий.
Определение антимикробного действия лекарственного средства. Из ампулы с лекарственным средством внести по 1 мл в 3 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и в 1 пробирку с 10 мл жидкой среды Сабуро. Для контроля в 3 пробирки с тиогликолевой средой и в пробирку с 10 мл жидкой среды Сабуро вносится по 1 мл стерильной дистиллированной воды.
Затем во все пробирки внести по 0.1 мл микробной взвеси тест-штамма, содержащего 1000 клеток в 1 мл. В пробирки с тиогликолевой средой вносятся штаммы: Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli; в пробирки со средой Сабуро – Candida albicans.
Посевы в тиогликолевой среде инкубируют при 30-35 °С в течение 2 суток, а на среде Сабуро – при 20-25°С в течение 3 суток.
При отсутствии антимикробного действия лекарственного средства в опытных и контрольных пробирках должен наблюдаться рост перечисленных тест-микробов.
При наличии антимикробного действия устраняют его. Для этого используют:
Соответствующие инактиваторы, указанные в частных фармакопейных статьях ( пример: пенициллиназа – для пенициллинов и цефалоспоринов)
При отсутствии соответствующего инактиватора препарат при посеве разводят, увеличивая объем питательной среды до 250 мл.
Если при этом сохраняется антимикробное действие лекарственного средства, для посева используют метод мембранной фильтрации.
40) Микробиологический контроль лекарственных средств, не стерилизуемых в процессе производства.
В отношении лекарственных средств, не стерилизуемых в процессе производства, проводится испытание на микробиологическую чистоту. Это испытание включает в себя количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов, а также выявление определенных видов микроорганизмов, наличие которых не допустимо.
Испытания проводят в асептических условиях. При обнаружении антимикробного действия лекарственного средства устраняют его и после этого производят посев на микробную чистоту. При отсутствии антимикробного действия производят прямой посев .
Количественное определение бактерий и грибов проводят двухслойным агаровым методом в чашках Петри.
Определение общего числа бактерий. Испытуемый расвор вносят по 1 мл в каждую из 2 пробирок с 4 мл расплавленного и охлажденного до 45 – 50°С МПА. Быстро перемешивают содержимое каждой пробирки и переносят в чашку Петри, содержащую 15 – 20 мл застывшего агара. Быстрым, осторожным покачиванием чашки Петри равномерно распределяют верхний слой агара.
После застывания среды чашки Петри переворачивают и инкубируют в течение 5 суток при 30 - 35°С. Через 48 часов и окончательно через 5 суток подсчитывают количество бактериальных колоний на 2 чашках, вычисляют среднее значение и таким образом находят число бактерий в 1 мл образца.
Определение общего числа грибов. Испытание проводят двухслойным агаровым методом,
Используя плотную среду Сабуро. Инкубируют посевы при 20 - 25°С. Через 72 часа и окончательно через 5 суток подсчитывают общее число колоний дрожжевых и плесневых грибов на 2 чашках, находят среднее значение.