Микологическое исследование

Посев материала на среду Сабуро, инкубация при 35-37˚С 1 сутки, затем при 28-30 ˚С - 2-5 суток.

Появление R или S колоний кремового, белого цвета.

Серологическое исследование

Имеют диагностическую ценность положительные реакции с вакциной грибов Candida в разведении исследуемой сыворотки 1:200 и выше

и с полисахаридным антигеном в реакции связывания комплемента (при разведении сыворотки 1:20 и выше).

Кроме классических микробиологических методов лабораторной диагностике сегодня является определение маркеров кандидоза - Дарабинитола и маннозы - методом газовой хроматографии. Даже при трудной локализации очага, недоступного для биопсии и посева, обнаружение высокого уровня маркеров в крови или спинномозговой жидкости позволяет подтвердить диагноз кандидоза, кроме того, в динамике объективно оценить эффект противогрибковой терапии.

Все методы лабораторной диагностики сифилиса можно условно разделить на:

Методы непосредственного выявления возбудителя в материале из очагов поражения (прямые тесты):

–темнопольная микроскопия;

–молекулярно-биологические методы детекции ДНК бледной трепонемы (полимеразная цепная реакция или ДНК-зондирование);

–заражение кроликов инфицированным материалом от больных;

Методы серологической диагностики сифилиса, базирующиеся на выявлении антител к возбудителю сифилиса в сыворотке крови или спинномозговой жидкости;

Гистоморфологические методы.

Взятие материала для микроскопирования.

Эрозию, язву или другой элемент сыпи (например, мокнущую папулу) очищают ватным тампоном, пропитанным изотоническим раствором натрия хлорида. Платиновую петлю или металлическую лопаточку, прокаленные на огне и остуженные, прикладывают к поверхности эрозии или язвы и к ее краям и раздражают до получения прозрачной жидкости. Каплю жидкости наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. В случае невозможности взять материал из отделяемого язвы производят пункцию близлежащих лимфатических узлов с помощью слегка затупленной иглы, надетой на шприц с плотно пригнанным поршнем. Путем оттягивания поршня шприца насасывают несколько капель жидкости, которую и подвергают исследованию.

Темнопольная микроскопия.

Лучшим методом является микроскопия в темном поле зрения. Исследование проводят с помощью специального темно полюсного конденсора при объективе 40 и окуляре 10. Следует избегать примеси крови к препарату, так как это затрудняет обнаружение трепонем. При рассматривании препарата могут быть обнаружены другие виды трепонем, которые необходимо отличать от бледной трепонемы.

Серологическая диагностика сифилиса

Серологические реакции являются чрезвычайно ценным методом не только для подтверждения диагноза сифилиса, но и наблюдения за динамикой его течения под влиянием лечения и определения излеченности болезни.

Трепонемные тесты.

Наиболее часто используются следующие трепонемные тесты.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ -FTA) в различный модификациях Реакция пассивной агглютинации (РПГА - TPHA)

Иммуноферментный анализ (ИФА -EIA) в том числе и рекомбинатный Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Иммуноблотинг Трепонемные тесты являются подтверждающими сифилис тестами, Однако

в небольшом проценте при их проведении могут встречаться ложноположительные результаты.

Трепонемные тесты применяются только для диагностики сифилиса и не используются для проведения контроля излеченности.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

Принцип метода состоит в том, что формализированные тонизированные бараньи эритроциты соединяются с экстрактом из патогенных бледных трепонем и образовавшийся комплекс фиксируется на эритроцитах. Он представляет собой корпускулярный антиген. При взаимодействии его с гомологичными антителами создается иммунный комплекс, который вызывает агглютинацию эритроцитов.

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ).

Она основана на способности вирулентных тканевых трепонем, сенсибилизированных сывороткой больного сифилисом, в присутствии комплемента и эритроцитов прилипать к поверхности последних. При центрифугировании смеси с эритроцитами прилипшие бледные трепонемы выпадают в осадок и исчезают из надосадочной жидкости. РИП применяют при диагностике форм сифилиса, когда на основании данных анемнеза, клиники и др. методов не удается подтвердить диагноз заболевания, при контрольном наблюдении после окончания лечения. По специфичности и чувствительности РИПБТ близка к РИБТ и РИФ.

РИФ

более чувствительная реакция, поэтому она бывает положительной уже в первичном серонегативном периоде сифилиса у 80% больных. По степени специфичности РИФ уступает РИБТ, что не позволяет заменить ею РИБТ, хотя техника ее значительно проще. Принцип реакции заключается в том, что специфический антиген (бледные трепонемы) соединяют с сывороткой крови больного (антитела) и антивидовой флюоресцирующей сывороткой (кроличья сыворотка против глобулинов человека, соединенная с флюоресцеином, - веществом, светящимся при ультрафиолетовом свете). При положительной реакции в люминесцентном микроскопе можно видеть желто-зеленое свечение бледных трепонем, поскольку они оказываются окруженными прилепляющимися к ним флюоресцирующими антителами. Положительная реакция констатируется 4 +, 3 + и 2. +. При степени свечения 1 + и отсутствии свечения реакция считается отрицательной. При вторичном сифилисе РИФ положительна почти в 100% случае. Она всегда положительна при латентном сифилисе (99-100%), а при третичных формах и врожденном сифилисе положительна в 95-100%.