Прогнозирование и диагностика заболевания коров эндометритом на основе определения иммунного статуса Масьянов ю.Н., Шахов а.Г.

ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии, Воронеж, Россия, e-mail: vnivipat@mail.ru

Интенсификация животноводства, основываясь на промышленной технологии, вызывает необходимость повышения темпов воспроизводства животных, предусматривает ускорение движения стада, сокращение сроков производственного использования маточного поголовья.

При этом возросла частота послеродовых инфекционных гнойно- воспалительных заболеваний (эндометриты, маститы), которые относятся к типичным факторно-инфекционным патологиям.

Катарально-гнойный эндометрит регистрируется у 20-70% животных и наносит большой экономический ущерб (Турченко А.Н., 2001; Багманов М.А., 2005).

Основными факторами снижения показателей воспроизводства животных являются неудовлетворительные условия содержания, кормления, наличие в основном стаде животных, утративших хозяйственную ценность вследствие перенесённых заболеваний или длительного бесплодия в отсутствие повседневного гинекологического контроля маточного поголовья, несвоевременная и неудовлетворительная организация мероприятий, направленных на предупреждение и лечение гинекологических болезней, вызванных потенциально патогенными возбудителями инфекций.

Успешное развитие отрасли, сочетающее высокую продуктивность с устойчивостью организма к заболеваниям, в значительной степени зависит от уровня неспецифической резистентности и иммунологической реактивности, являющихся соответственно первой и второй линией защиты, отражающих общий гомеостаз организма и зависящих от обменных процессов, возраста, физиологического состояния животных в разные периоды жизни.

Естественные факторы защиты лимитируют степень антигенного воздействия на иммунную систему, оптимальный уровень которого стимулирует иммунный ответ, а избыточный, напротив, может привести к противоположной реакции – развитию иммунодепрессивного состояния, что способствует возникновению заболеваний и отягощает их течение.

В связи с этим, разработка критериев оценки состояния иммунной системы приобретает решающее значение в выявлении нарушений не только её функций, но и других систем организма, в том числе, репродуктивного тракта, учитывая при этом тесную связь между их функционированием и реализацией защитных механизмов. Это позволяет решать задачи прикладного характера, касающиеся диагностики, прогнозирования и повышения эффективности лечения послеродовых патологий, связанных с участием иммунной системы в их патогенезе.

Вторичные иммунодефициты часто определяют как понижение уровня иммунологических показателей в процессе заболевания (Лебедев К.А., Понякина И.Д., 1990). В частности доказано, что иммунодефицитное состояние лежит в основе возникновения хронических эндометритов у коров, при котором особенно угнетается клеточное звено иммунитета (Van Rampen C., Mallard B.A., 1997).

Показано, что у коров за 1-2 недели до и после отёла, и особенно в период родов, резко снижается количество Т-лимфоцитов с хелперной (CD4⁺) и супрессорной активностью (CD8⁺) и В-лимфоцитов (Kimura K.G. et. al., 1999).

К тому же по сравнению с серединой лактации большинство Т-хелперов продуцирует IL-4 и IL-10 – противовоспалительные цитокины, подавляющие формирование специфических Т-киллеров и усиливающие пролиферативные процессы в тканях (Chafer-Weaver K.A. et. al., 1999). При этом у коров, больных хроническим эндометритом, наблюдается угнетение синтеза как провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов (Dosogne H. et. al., 2001).

В настоящее время подход к оценке иммунного статуса неоднозначен. Возникают вопросы к понятию нормы и патологии, так как сравнение значений иммунной реактивности у здоровых индивидуумов и находящихся в состоянии болезни, многим представляется нерациональным, поскольку иммунная система в своей динамике, в общем, и предназначена для устранения патологии за счёт вариаций (Земсков А.М. с соавт., 2007).

Учитывая то, что жизнеобеспечение организма должно обусловливаться функциональным единством важнейших (точнее всех) его систем, была поставлена цель - осуществить на основе определения иммунного статуса прогнозирование и диагностику заболевания коров послеродовым эндометритом.

Материал и методы. В зависимости от проявления послеродовой патологии подопытных животных разделили на две группы – коров, заболевших эндометритом (n=11) и оставшихся клинически здоровыми (n=4), у которых был исключён мастит.

Поскольку до проявления клинических признаков предопределить возникновение заболевания у каждого конкретного животного затруднительно, то для решения поставленной задачи был применён индивидуальный подход в изучении иммунного статуса у одних и тех же животных перед запуском, в период сухостоя и после отёла.

Принимая во внимание интегральную реакцию организма на индукцию патологических процессов, иммунологические исследования были проведены с помощью комплекса стандартных и унифицированных методов.

Гематологические показатели определяли общепринятыми методами, количество Т-лимфоцитов в крови – с помощью Е-РОК, В-лимфоцитов - ЕАС-РОК, концентрацию IgG, IgМ и IgА, а также С1q- и С3-компонентов комплемента - в РИД по Манчини (1965), бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК), лизоцимную (ЛАСК), комплементарную (КАСК), фагоцитарную активность лейкоцитов (ФАЛ), фагоцитарные число и индекс (ФЧ и ФИ) - согласно «Методическим рекомендациям по оценке и коррекции неспецифической резистентности животных» (2005).

Прогнозирование возникновения эндометрита осуществляли путём сравнения уровней параметров у здоровых и заболевших впоследствии животных до появления у них клинических признаков болезни (до родов), а диагностику – по факту её проявления.

Результаты исследований. Результаты проведённых исследований за 2-2,5 месяца до отёла показали наличие у коров, предрасположенных к возникновению послеродового эндометрита по сравнению с оставшимися здоровыми животными, более высоких уровней в крови лейкоцитов - на 40,5% и лимфоцитов – на 80,0% (Р<0,05), показателей поглотительной способности нейтрофилов (ФЧ и ФИ) - на 11,4 и 7,8% соответственно в сочетании с увеличением на 27,2% ЛАСК, что свидетельствует о повышенной функциональной активности фагоцитарного звена, более высокого содержания в сыворотке крови IgA – в 1,74 раза (Р<0,01), опосредованно отражающего напряжённость системы локального иммунитета. Относительные уровни Т-лимфоцитов были практически равными (33,8±2,75 и 34,3±4,34%), но у заболевших впоследствии коров за счёт лимфоцитоза значительно выше на 67,8% (Р<0,02) абсолютное их число, то есть пролиферативная активность Т-клеток, а также абсолютное количество В-клеток – в среднем в 2,47 раза, несмотря на несколько более низкое содержание в крови IgG и IgМ, что может свидетельствовать о дисбалансе функционирования иммунной системы. Общая гемолитическая активность комплемента у этих животных практически не различалась (60,0±3,74 и 61,8±0,73%), что сочеталось с содержанием в крови ключевых компонентов системы комплемента – C1q и С3. У предрасположенных к заболеванию животных отмечали более низкую БАСК (Р<0,02).

За 1-2 недели до отёла у заболевших послеродовым эндометритом коров в отличие от физиологического увеличения уровня лейкоцитов в крови (за счёт нейтрофилов) отмечали снижение их уровня, более выраженную отрицательную динамику количества лимфоцитов при сохранившемся лимфоцитозе, а также поглотительной способности нейтрофилов - ФЧ и ФИ (Р<0,05; Р<0,02) и более низкую ЛАСК, то есть угнетение фагоцитоза. По сравнению со здоровыми животными значительно снизилась - на 32,8% (Р<0,05) комплементарная активность сыворотки крови в сочетании с уровнями С1q и С3 – на 41,3 и 26,8% (Р<0,05) соответственно. Кроме того, отмечали тенденцию снижения в динамике абсолютного числа Т-клеток, у всех животных относительного и абсолютного количества В-лимфоцитов. Уменьшение содержания в крови основных классов иммуноглобулинов, наблюдали преимущественно у заболевших эндометритов коров, что на фоне физиологического снижения концентрации иммуноглобулинов вследствие перераспределения в молочную железу, могло быть связано с повышенной транссудацией их в ткани пораженного органа.

На 3-6 день после отёла у больных коров вследствие мобилизации неспецифических защитных механизмов отмечали увеличение до уровня здоровых животных ФЧ и ФИ, КАСК, содержания в крови С1q- и С3-компонентов комплемента, абсолютного количества лимфоцитов и более высокую (на 24,6%) ЛАСК. По сравнению со здоровыми животными у них заметно снизилась (на 18,6%) концентрация IgМ. При общей положительной динамике, связанной в этот период с физиологическим увеличением под воздействием эстрогенов концентрации IgА в крови, коэффициент достоверности между средними значениями этого показателя у здоровых и больных животных снизился, что могло быть обусловлено как повышенной транссудацией иммуноглобулинов из сыворотки крови, так и нарушением гормонального статуса у последних. Уровни IgG в крови животных в этот период были минимальными и практически равными, при этом менее выраженная его отрицательная динамика у больных коров, свидетельствовала о более ранней индукции у них вторичного гуморального иммунитета. О нарушении адаптации к родовому стрессу могло свидетельствовать заметное снижение (на 14,4%) у больных коров относительного числа Т-лимфоцитов, то есть уровня их дифференцировки, при увеличении (на 16,6%) у здоровых животных, хотя абсолютное количество Т-клеток оставалось стабильно выше.

Эти изменения подтверждаются тем, что в период последней четверти беременности и в ранний послеродовой период происходит активация процессов пероксидации липидов, в крови коров достоверно увеличиваются первичные, вторичные и конечные продукты ПОЛ - коньюгированные диены, кетодиены, малоновый диальдегид, флуоресцирующие основания Шиффа, что отражается, прежде всего, на клеточном звене иммунитета (Рецкий М.И. с соавт., 2001). При акушерских патологиях - задержании последа, субинволюции матки, гнойно-катаральном эндометрите, интенсивность течения этих процессов усиливается, а тенденция к снижению активности системы АОЗ и увеличение накопления продуктов ПОЛ отмечается уже за 2 месяца до родов (Нежданов А.Г. с соавт., 2004).

Через 2 недели после отёла у больных коров отмечали выраженный лейкоцитоз и лимфоцитоз – увеличение их числа по отношению к уровню здоровых животных на 36,2 и 56,3% соответственно, на 44,7% - абсолютного количества Т-клеток при равном относительном их содержании, а также активацию локального иммунитета – более высокого (в 1,76 раза) уровня IgА в крови и системного гуморального иммунного ответа - уровня IgG - на 20,0% (Р<0,05). В сочетании с увеличением концентрации иммуноглобулинов в крови, относительное количество В-лимфоцитов у больных животных превысило таковое у здоровых коров на 45,1%, а абсолютное число – в 3,16 раза. Общая гемолитическая активность комплемента, уровни С1q и С3 в крови повышались, приближаясь к показателям здоровых коров, а наличие более низкого ФЧ и ФИ на фоне повышенной ЛАСК свидетельствовало о возрастании антигенной нагрузки на фагоцитарную систему у больных эндометритом коров.

Заключение. Таким образом, полученные в ходе исследования данные свидетельствуют о сложной динамике иммунологических показателей, связанных как с физиологическими особенностями функционирования иммунной системы организма животных в разные периоды до и после родов, так и развитием патологических процессов. Отмечается положительная и отрицательная связь между параметрами клеточного и гуморального звена неспецифической и иммунной защиты. В связи с этим считается, что чем больше коррелятивных связей между параметрами, тем более система напряжена. Вероятно, отсутствие таковой между определёнными иммунологическими показателями, можно расценивать как дисбаланс функционирования иммунной системы. У коров, предрасположенных к возникновению эндометрита и при клиническом его проявлении, были отмечены нарушения, связанные как с повышением реактивности, так и угнетением защитных механизмов. Наиболее информативными параметрами, которые характеризовались стабильностью не только до родов, но и на протяжении практически всего срока исследований, на основании чего представляется возможным прогнозировать возникновение послеродового эндометрита у коров, являлись – лейкоцитоз, повышенное абсолютное количество лимфоцитов, Т- и В-клеток, содержание IgА в сыворотке крови, более низкий уровень IgМ, за 1-2 недели до отёла - общей гемолитической активности комплемента, С1q- и С3-компонентов комплемента, значений ФЧ и ФИ. Диагностическими показателями являлись – лейкоцитоз, повышенное абсолютное число лимфоцитов, Т- и В-клеток, содержание IgА в сыворотке крови, IgG (через 2 недели после отёла), лизоцима, преимущественно в первую неделю после отёла - более низкий уровень IgМ, общей гемолитической активности комплемента, С1q и С3, через 2 недели после отёла – значений ФЧ и ФИ.

Литература. 1. Багманов М.А.// Вестник Россельхозакадемии, 2005, № 6.- С.69-70. 2. Земсков А.М., Земсков В.М., Козлов В.А. и др.- М., 2007.- 450 с. 3. Лебедев К.А., Понякина И.Д.- М.: Наука, 1990.- 223 с. 4. Нежданов А.Г., Кушнир И.Ю., Рецкий М.И. и др.//Мат. междунар. науч.-практ. конф. Воронеж, 2004.- С.116-122. 5. Рецкий М.И., Бузлама В.С., Жаркой Б.Л. и др.- Воронеж: ВГУ, 2001.- С.29-85. 6. Турченко А.Н.// Ветеринария, 2001, № 7.- С.33-37. 7. Chafer-Weaver K.A., Corl C.M., Sordillo L.M.// J. Dairy Sci., 1999, V. 82.- P.1696-1706. 8. Dosogne H., Hoeben D., Burvenich C.// J. Vet. Pharmacol. Therap., 2001, V. 21, № 6.- P.421-427. 9. Kimura K.G., Yoff J.P., Kehrli M.E.// J. Dairy Sci., 1999, V. 82, №2.- P.315-319. 10. Van Rampen C., Mallard B.A.// Vet. Immunol. Immunopath., 1997, V. 59.- P.79-91.

FORECASTING AND DIAGNOSTICS OF DISEASE OF COWS ENDOMETRITIS ON THE BASIS OF DEFINITION OF THE IMMUNE STATUS

Masjanov Yu.N., Shakhov A.G.

All-Russia Veterinary Pathology, Pharmacology, and Therapy Research Institute, Voronezh, Russia

The immune system status in relative aspect before and after calving in healthy and cows, suffer from endometritis are studied. It is shown that on the basis of the positioned distinctions in the immune status of animals, it is possible to carry out diagnostics and forecasting of their postpartum diseases.

УДК 619:615:618.7