Молекулярно-генетический мониторинг безопасности спермы быков производителей и репродуктивных нарушений у коров Ефанова л.И., Свиридов м.М., Пасько н.В., Манжурина о.А., Рогулина и.Н.

ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии, Воронеж, Россия, e-mail: vnivipat@mail.ru

ПЦР-диагностика основана на обнаружении в исследуемом биологическом материале небольшого фрагмента ДНК или РНК возбудителя инфекции. При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. Сама полимеразная цепная реакция используется для амплификации найденного фрагмента, чтобы однозначно его детектировать. Метод ПЦР-диагностики обладает рядом преимуществ, таких как: прямое определение наличия возбудителей заболеваний, высокая специфичность и чувствительность анализа, универсальность процедуры выявления различных возбудителей, высокая скорость получения результата анализа и возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций (Донник И.М., 2007; Гусева Е.В., 1995; Иноземцев В.П., 2000)

Таким образом, молекулярно-генетический анализ остается наиболее доступным и информативным на сегодняшний день приемом диагностики инфекционных заболеваний.

Материал и методы. Молекулярно-генетическому исследованию на хламидиоз, вирусную диарею (ВД-БС), инфекционный ринотрахеит (ИРТ), лептоспироз, микоплазмоз, парагрипп-3 (ПГ-3), кампилобактериоз подвергнуто 138 проб спермы быков-производителей из 11 хозяйств, 98 проб влагалищных смывов коров с нарушениями репродуктивной функции из 23 хозяйств, 58 проб патматериала от абортированных, мертворожденных плодов из 17 хозяйств Центрально-черноземного региона РФ. Абортплоды, кроме того, исследовали на сальмонеллез, листериоз. Указанные материалы для исследования поступили в лабораторию в 2007-2012 годах из хозяйств, где регистрировались нарушения воспроизводительной функции у коров и отмечалась респираторная, желудочно-кишечная патология у телят профилакторного периода.

Исследование проводили с использованием тест-систем «Хла-Ком» на хламидиоз, «Мик-Ком» на микоплазмоз, «Кам-Бак» на кампилобактериоз, «Сал-Ком» на сальмонеллез, «Аденовир» на аденовироз, «Листер» на листериоз, «ЛПС» на лептоспироз производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва и тест-систем для обнаружения вируса диареи КРС, инфекционного ринотрахеита КРС, парагриппа-3 производства ЗАО «НПО Нарвак», г. Москва.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени осуществлялась на амплификаторе «Rotor-Gene 6000» (Corbett Research, Австралия) и на амплификаторе «Терцик» (ДНК-технология, г. Москва) с детекцией продуктов ПЦР-амплификации методом электрофореза в агарозном геле.

Результаты исследования. Проведенными исследованиями 138 проб спермы быков, поступивших в лабораторию в 2010-2012 гг., установлена ее контаминированность в 26,9% случаев вирусом диареи крупного рогатого скота и в 21,6% - патогенными микоплазмами. Контаминированность спермы быков указанными патогенами диагностирована в 7 хозяйствах из 11 (63,6%). В сперме быков 4-х хозяйств из 11 (36,4%) выделен геном вируса диареи, 6-ти (54,5%) – геном патогенных микоплазм, при этом в 3 хозяйствах (27,3%) сперма быков в разное время была контаминирована двумя указанными патогенами, в 3-х (27,3%) – патогенными микоплазмами и в 1-ом (9,1%) – вирусом диареи.

Ни в одной из исследованных проб спермы быков не было обнаружено хламидий, вируса ИРТ, ПГ-3, патогенных лептоспир, кампилобактерий (табл.).

Установлено увеличение контаминированности спермы быков в 2012 году в сравнении с 2010г, как вирусом диареи (с 22,2% до 36%), так и патогенными микоплазмами (с 0% до 30%).

Как правило, уровень инфицированности спермы быков-производителей был невысоким, при этом у отдельных животных результат ПЦР на ВД-БС при исследовании эйякулятов, полученных в разное время, не совпадал, что косвенно свидетельствует о персистенции этого патогенна в организме. Не исключено, что активная эксплуатация инфицированных вирусом диареи быков приводит к увеличению контаминированности их спермы и наоборот.

Доказательством опасности такой спермы для коров было обнаружение генома ВД-БС в абортплодах осемененных коров, в патматериале от павших и вынужденно убитых в первые недели после отела животных, у которых развился бактериальный послеродовой сепсис.

Выявлен и разный уровень инфицированности спермы быков патогенными микоплазмами при положительном результате ПЦР на микоплазмоз.

Из 58 абортплодов и мертворожденных телят, поступивших для исследования в 2007-2012 гг., в том числе 48 в 2010-2012гг., из 17 хозяйств региона в 25 случаях (43,1%) в 12 хозяйствах (70,6%) выявлены геномы инфекционных патогенов, в т.ч. в 1-ом хозяйстве 3-х видов, 5-ти – 2-х, в 6-ти – 1 вида.

Таблица

Сводные данные по контаминированности спермы быков, абортплодов, влагалищных смывов коров

Возбудитель	Контаминированность, %
	спермы		абортплодов		влагалищных смывов
	исслед. проб	% полож.	исслед. проб	% полож.	исслед. проб	% полож.
Хламидии	75	0,0	46	0,0	76	1,3
Вирус диареи	130	26,9	58	12,1	90	23,3
Вирус ИРТ	95	0,0	51	2,0	93	0,0
Вирус ПГ-3	14	0,0	31	3,2	11	0,0
Лептоспиры	61	0,0	49	2,0	20	10,0
Микоплазмы	102	21,6	38	31,6	56	75,0
Кампилобактерии	45	0,0	23	8,7	26	7,7
Аденовирус	н/и	н/и	13	0,0	8	0,0
Сальмонеллы	н/и	н/и	18	5,5	н/и	н/и
Листерии	н/и	н/и	10	0,0	3	0,0

Проведенными исследованиями, в целом, установлена инфицированность абортплодов 7 видами патогенов (таблица 1), среди которых доминировали патогенные микоплазмы (31,6%), ВД-БС (12,1%), кампилобактерии (8,7%); в 5,5% установлена инфицированность сальмонеллами, в 3,2% – вирусом ПГ-3, в 2% – вирусом ИРТ, в 2% – патогенными лептоспирами. Геномы вирусов ИРТ и ПГ-3 были выделены из абортплодов, доставленных для исследования в 2007 году. В последующие годы эти патогены в абортплодах коров не обнаруживались, что связано с проведением активной профилактики этих инфекций у коров в специализированных молочных хозяйствах, формированием у животных поствакцинального гуморального иммунитета к этим патогенам.

Геномы 5 видов патогенов (патогенные микоплазмы, ВД-БС, кампилобактерии, лептоспиры, хламидии) обнаружены в слизи с наружных половых путей коров с признаками хронического эндометрита, телок случного возраста с признаками вагинита (таблица).

Из 98 проб влагалищной слизи животных 23 хозяйств у коров 15 хозяйств (65,2%) обнаружены инфекционные патогены, способные вызвать нарушения репродуктивной функции, при этом доминировали патогенные микоплазмы (75% от числа исследованных проб), ВД-БС (23,3%); 10% проб из числа исследованных были инфицированы патогенными лептоспирами, 7,7% – кампилобактериями, 1,3% – хламидиями.

Проведенными исследованиями установлена циркуляция среди крупного рогатого скота инфекционных патогенов, способных вызвать как репродуктивные нарушения у коров, телок случного возраста, быков-производителей, так и желудочно-кишечную, респираторную патологию у телят. В 70,6% хозяйств, из которых исследовали патматериал, выявлено участие инфекционных патогенов в прерывании беременности, мертворождаемости; в 65,2% - в развитии различных форм эндометритов у коров, вагинитов у телок случного возраста; в 63,6% хозяйств, из которых доставлена сперма быков, инфицированность ее вирусом диареи, патогенными микоплазмами.

Исследованная сперма быков-производителей оказалась контаминирована вирусом диареи в 26,9% и патогенными микоплазмами в 21,6% случаев, что свидетельствует о ее роли как одного из факторов передачи этих возбудителей восприимчивым коровам. Однако, помимо спермы, в передаче патогенных микоплазм среди коров имеют значение и другие факторы, на что указывает 75% инфицированность исследованных влагалищных смывов больных эндометритом коров и телок случного возраста, при этом в последние 2 года отмечается рост уровня инфицированности патогенными микоплазмами как спермы, так и слизистых половых путей коров, что оказывает влияние на уровень контаминации этими патогенами телят профилакторного и послепрофилакторного периода, уровень их заболеваемости.

Наибольшее число патогенов обнаружено в абортированных плодах коров – 7 патогенов, против 2 – в сперме быков и 5 – во влагалищных смывах коров и телок случного возраста. Только из абортплодов выделены геномы сальмонелл, вируса ПГ-3 и ИРТ (5,5%, 2,0% и 2,0% соответственно); только из влагалищных смывов – геном патогенных хламидий (1,3%). В целом в исследованных материалах выявлено 8 видов патогенов, способных вызвать репродуктивные нарушения у животных, что свидетельствует об их циркуляции в молочных хозяйствах и требует проведения комплекса профилактических противоэпизоотических мероприятий с учетом конкретной ситуации в хозяйстве, жесткого контроля безопасности спермы быков, а также быков-прибников.

Литература 1. Донник И.М., Пелевина Н.А., Бодрова О.Г. ПЦР-диагнос-тика вирусных и бактериальных инфекций домашних животных // Ветеринарная клиника», 2007, №7.- С.5-7. 2. Гусева Е.В. Применение ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний у животных / Гусева Е.В., Сатина Т.А. // Владимир, 1995. - 44 с. 3. Иноземцев В.П., Самсонов О.В., Таллер Б.Т. Ветеринарный контроль за воспроизводством стада крупного рогатого скота // Ветеринария, 2000, № 12 - С.5-8.

Molecular-genetical monitoring of bull's semen safety and reproductive disorders in heifers

Efanova L.I., Sviridov M.M., Pasko N.V., Manzhurina O.A., Rogulina I.N.

All-Russian Veterinary Pathology, Pharmacology and Therapy Research Institute, Voronezh, Russia

The article presents data on contamination of semen, pathological material of abortus fetuses and vaginal lavages from the cattle farms of the Central Black Earth Region of Russia, analysed in our laboratory during 2007-2012. 8 pathogen species (virus diarrhea, infectious bovine rhinotracheitis, parainfluenza-3, chlamydia, leptospira, mycoplasma, campylobacter, salmonellae) circulating at the dairy farms and capable to provoke reproductive disorders in animals are identified.

УДК 619:618.145:636.2.034