Общая схема лабораторного исследования при микозах
Материал исследования
Методы
исследования
микроскопический
микологический
серологический
аллергологический
биологический
Микроскопический метод исследования волос, корочек, кожных чешуек.
На материал, помещенный на предметное стекло, наносят 1 -2 капли 10 -20% раствора КОН или NaOH. Подогревают на слабом огне до появления пара (не кипятить! – волосы при кипячении растворяются и положение в них спор нельзя установить).
Подогретый препарат накрыть покровным стеклом. Избыток щелочи удалить полоской фильтровальной бумаги. Препараты должны быть изучены в течение 2 часов с момента их приготовления.
Микроскопический метод исследования толстых ногтевых срезов.
Материал залить 20% раствором КОН и прогреть 20-60 мнут в кипящей водяной бане (до растворения). Затем взвесь материала центрифугируют 10 – 15 минут при 500 – 1000 об/мин, или отстаивают сутки при комнатной температуре, из осадка готовят мазки.
Мазки изучают в обычном световом микроскопе. Неокрашенные препараты рассматривают при слегка опущенном конденсоре (или слегка зауженном отверстии диафрагмы), сначала с малым (х8), а затем – с большим (х40) увеличением.
С помощью микроскопии можно установить грибковую природу заболевания, но определить вид и род дерматофитов в кожных чешуйках и ногтях невозможно.
Микологический метод исследования (культуральный метод) принципиально не отличается от бактериологического, но имеет некоторые особенности:
Накопление грибов ведут на жидкой углеводной среде (среда Сабуро и др.) с добавлением антибактериальных препаратов (пенициллин – ед/мл, стрептомицин – ед/мл и др.);
Учитывая устойчивость грибов, в среды или при транспортировке добавляют крепкие растворы, например, 20% сахарозу, NaCl (1:2). Это мешает развитию бактерий.
Выращивание ведут при температуре 25 – 270С.
Культивирование ведут длительно, до 1 – 1,5 месяцев, реже 2 – 3 недели (кромедрожжей и актиномицетов, которые растут быстрее, 1 – 3 дня).
Характер роста дрожжей и актиномицетов мало отличается от бактерий, часто дает S- и SR-формы, нередко пигментированные.
Нитчатые грибы дают преимущественно R-формы колоний, часто пигментированные, позднее покрываются пушистым налетом с плодовыми телами.
Иммунологический метод диагностики микозов применяют в основном для анализа хронических форм заболеваний. При этом изучаются либо наличие антител, либо антигенов. Они отличаются высокой специфичностью. Из серореакций используют:
Реакцию агглютинации (РА)
Реакцию связывания комплемента (РСК)
Реакцию преципитации (РП)
Реакцию иммунофлюоресценции (прямую и непрямую) (РИФ, РНИФ)
Аллергодиагностика со специфическими аллергенами (трихофитии, микроспории, фавуса, дермофитии и др.).
Аллергические пробы ставят либо накожно по принципу пробы Пирке с туберкулином или внутрикожно по типу пробы Манту.
Особенностью аллергологических проб при микозах является их частый групповой характер, свидетельствующий лишь о наличии микоза. Для уточнения его этиологии применяются развернутые иммунологические реакции с несколькими антигенами и по их титру ставят окончательный диагноз.
Биологический метод применяется только в специализированных ветеринарных и медицинских учреждениях. Причина: дороговизна, нуждаемость в животных и их содержании, опасность распространения микозов.
Приложение 3