Анализ веществ, имеющих в ультрафиолетовой области один максимум поглощения

Один максимум поглощения имеют следующие лекарственные вещества третьей группы – это антипирин, бутадион, кислота аскорбиновая, парацетомол, кислота никотиновая, кофеин, метилурацил, норсульфазол, пиридоксина гидрохлорид, теобромин, теофиллин, фенацетин, фенилсалицилат, фенолфталеин, фталазол и этазол.

Условно все перечисленные выше препараты можно разделить на 3 подгруппы по диапазону длин волн, в котором наблюдается максимум поглощения:

I подгруппу составляют вещества, УФ-спектры которых имеют максимум поглощения в диапазоне длин волн λ = 220 – 250 нм,

II подгруппу – в диапазоне длин волн λ = 251 – 270 нм,

III подгруппу – в диапазоне длин волн λ = 271 – 290 нм.

Идентификация веществ всех подгрупп может быть произведена по параметрам спектров (максимуму поглощения и его интенсивности), а также по результатам следующих химических реакций.

Химические реакции для установления подлинности веществ I подруппы

1. Реакция с раствором железа (III) хлорида

При добавлении к водному (антипирин) или спиртовому (фенилсалицилат, парацетамол) раствору указанного реактива неблюдается:

• Красное окрашивание (антипирин λ = 228,2 нм);

• Сине-фиолетовое окрашивание (паарцетамол, λ = 243,3 нм) или фиолетовое окрашивание (фенилсалицилат, λ = 239, 4 нм).

2. Реакция с раствором щелочи

При растворении препарата в разведенных растворах едких и углекислых щелочей образуется раствор фуксиново-красного цвета, обесцвечивающийся при прибавлении избытка кислоты (фенолфталеин, λ = 228,2 нм).

3. С раствором серебра нитрата.

При добавлении к водному раствору препарата 0,5 мл раствора серебра нитрата наблюдается образование темного осадка (кислота аскорбиновая, λ = 242,3 нм).

4. С раствором меди сульфата

50 мг вещества, нерастворимого в воде, взбалтывают с 1,5 мл 0,1 моль/л раствора едкого натра в течение 2 минут и смесь фильтруют. При добавлении к фильтрату 0,5 мл раствора меди сульфата наблюдается образование осадка сероватого цвета, переходящего в бледно-голубой (бутадион, λ = 238,2 нм).

5. Реакция образования индофенола

50 мг препарата кипятят с 2 мл кислоты хлористоводородной разведенной в течение 1 минуты. Затем к смеси добавляют 10 мл воды, охлаждают и фильтруют. При добавлении к фильтрату 1 капли раствора калия бихромата наблюдается фиолетовое окрашивание, переходящее в вишнево-красное (фенацетин, λ = 244,6 нм).

Химические реакции для установления подлинности веществ II подгруппы

Эту подгруппу составляют три вещества – кислота никотиновая (λ = 260,5 нм), метилурацил (λ = 260,5 нм) и этазол (λ = 267,5 нм).

Этазол может быть обнаружен по реакциям образования азокрасителя и по окраске медной соли.

Дифференциация кислоты никотиновой и метилурацила проводится по реакциям взаимодействия с раствором меди сульфата и с бромной водой.

1. Реакция с раствором меди сульфата

При добавлении к 3 мл теплого раствора препарата (1:100) 1 мл раствора меди сульфата выпадает осадок синего цвета (кислота никотиновая).

2. Реакция с бромной водой

При добавлении к раствору препарата 2 – 3 капель бромной воды наблюдается обесцвечивание раствора (метилурацил).

Химические реакции для установления подлинности веществ III подгруппы

В эту подгруппу включены пиридоксина гидрохлорид, а также вещества, относящиеся к группе пуриновых алкалоидов (кофеин, теобромин, теофиллин) и сульфаниламидных препаратов (норсульфазол и фталазол).

1. Реакции идентификации сульфаниламидных препаратов

Идентификация сульфаниламидных препаратов проводится по окраске медных солей. Осадок медной соли норсульфазола (λ = 279,5 нм) имеет грязно-фиолетовую, а фталазола (λ = 283,2 нм) – серую окраску.

2. Реакция с железа (III) хлоридом

При добавлении к раствору препарата (1:100) двух капель раствора железа (III) хлорида наблюдается красное окрашивание (пиридоксина гидрохлорид).

3. Мурексидная проба

Для кофеиона (λ = 271,5 нм), теобромина (λ = 271,7 нм) и теофиллина (λ = 271,5 нм) характерна групповая реакция образования мурексида. Для отличия теобромина от теофиллина применяется реакция образования кобальтовых солей.

Более надежными методами следует считать тонкослойную и высокоэффективную жидкостную хроматографию.

Тонкослойная хроматография алкалоидов группы пурина

10 мг препарата растворяют в 1 мл хлороформа. 10 мкл полученного раствора наносят на пластинку «Сорбфил» размерами 10 х 15 см. Параллельно на стартовую линию наносят по 10 мкл хлороформных растворов (1 мг/мл) кофеина, теобромина и теофиллина. Хроматографирование проводят восходящим методом в системе н-бутанол-хлороформ – 25 % раствор аммония гидроксида (5:1:1). После подъема растворителей на 8 – 10 см пластинку вынимают их хроматографической камеры, сушат, а затем опрыскивают реактивом Драгендорфа. Детекция пуриновых алкалоидов осуществляется по окраске и значению Rf анализируемого вещества и веществ-свидетелей.

Высокоэффективная жидкостная хроматография пуриновых алкалоидов

К 1 – 2 мг препарата добавляют 100 мкл 40 % раствора ацетонитрила в фосфатном буфере (рН=6,1) и 2 – 3 мкл полученного раствора исследуют методом ВЭЖХ при условиях представленных при анализе барбитуратов. Время удержания теобромина составляет 1,9 минут, теофиллина – 2,1 минуты, кофеина – 2,5 минуты.