Анализ лекарственных веществ, уф-спектры которых не имеют максимумов поглощения

Из анализируемых соединений второй группы только 7 лекарственных веществ не имеют максимумов поглощения в ультрафиолетовой области:

• Барбамил;

• Барбитал натрий;

• Кальция глюконат;

• Кальция лактат;

• Натрия цитрат;

• Свинца ацетат;

• Этаминал-натрий.

Установление подлинности лекарственных веществ, не имеющих максимума поглощения, проводится химическим методом по реакции взаимодействия с солями тяжелых металлов (кобальта, меди и железа), а также с применением хроматографических методов и дифференциальной спектрофотометрии.

1. На фильтровальную бумагу помещают 10 – 20 мг анализируемого вещества, которые растворяются в 1 капле спиртового раствора кобальта нитрата. После удаления растворителя фильтровальная бумажка обрабатывается парами 25 % раствора аммония гидроксида.

Если исследуемый образец представляет собой производное барбитуровой кислоты, наблюдается красно-фиолетовое пятно.

Для дифференциации барбамила, барбитала-натрия и этаминала-натрия проовдият их исследование в тонком слое сорбента или методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Тонкослойная хроматография производных барбитуровой кислоты

К 10 мг препарата добавляют 0,1 г безводного натрия сульфата, 1 каплю 0,1 моль/л раствора кислоты хлористоводородной и 0,5 мл хлороформа. После перемешивания смеси 10 мкл хлороформного раствора наносятся капилляром или микрошприцем на пластинку с закрепленным слоем силикагеля, «Сорбфил» или «Силуфол» размерами 10 х 10 см или 10 х 15 см. параллельно на стартовую линию пластинки наносят по 10 мкл хлороформных растворов веществ свидетелей. После удаления растворителей пластинку помещают в хроматографическую камеру. Хроматографирование проводят восходящим методом в системе растворителей хлороформ-н-бутанол-25 % раствор аммония гидроксида (70:40:5). Длина пробега растворителей 8 – 10 см. после подъема растворителей пластинку вынимают из камеры, сушат и опрыскивают последовательно 0,02 % раствором дифенилкарбазона в хлороформе, а затем 2,5 % раствором ртути (II) сульфата.

Идентификацию барбитуратов проводят по красно-фиолетовой окраске и значению Rf анализируемого вещества и веществ-свидетелей.

Значение Rf барбитуратов представлены в таблице 4.

Таблица 4

Значение Rf производных барбитуровой кислоты

Барбитураты	Значение Rf х 100
	«Сорбфил»	«Силуфол»	Силикагель
Барбитал	51,5	59	70-75
Барбамил	70,0	74	85-92
Бензонал	32,0	42	40-45
Фенобарбитал	29,0	44	49-55
Этаминал-натрий	71,0	85	94-96

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)

К 2 -3 кристалликам анализируемого вещества добавляют 100 мкл 40 % раствора ацетонитрила в фосфатном буфере (рН=6,1) и 2 – 3 мкл полученного раствора исследуют методом ВЭЖХ при следующих условиях:

• Жидкостной хроматограф;

• Колонка 80 х 2 мм, заполненноц Сепароном С18 (7мкм);

• Элюент 40 % раствор ацетонитрила в фосфатном буфере (рН = 6,1);

• Скорость элюента 100 мкл/мин;

• Детектор ультрафиолетовый; аналитическая длина волны 220 нм.

Идентификация барбитуратов проводится по абсолютным временам удерживания в сравнении с веществами-свидетелями, время удерживания которых определяется при указанных выше условиях. В таблице 5 представлены абсолютные времена удерживания барбитуратов.

Таблица 5