Опыт 5. Обнаружение свободного креатина в безбелковом экстракте из мышечной ткани.

Принцип метода. При нагревании в кислой среде креатин теряет воду и превращается в креатинин. Креатинин с пикриновой кислотой в щелочной среде дает оранжевую окраску.

Порядок выполнения работы.

В пробирку наливают 2-3 мл безбелкового мышечного экстракта, прибавляют 1-2 мл раствора соляной кислоты и кипятят в водной ба­не в течение 8-10 минут, охлаждают. Затем добавляют в пробирку 3-4 капли насыщенного раствора пикриновой кислоты и 6-8 капель 10% раст­вора едкого натра.

Вывод: по изменению окраски раствора в пробирке сделать заключение о присутствии или отсутствии креатина.

Опыт 6. Обнаружение молочной кислоты в безбелковом мышечном экстракте.

Принцип метода. Молочная кислота с реактивом Уффельмана (фенол + хлорное железо) дает желто-зеленое окрашивание, вследствие образования молочно-кислого железа. Схема реакции:

1) 3(C₆H₅O)₃Fe +FeCl₃ (C₆H₅O)₃ Fe + 3HCl

фенол фенолят железа

H H

2)(C₆H₅O)₃Fe + 3СH₃ C COOH (СH₃ C COOH)₃Fe + 3C₆H₅OH

OH OH

молочная кислота лактат железа фенол

Порядок выполнения работы.

В две пробирки наливают по 1 мл 1% раствора фенола и добавляют по каплям 1% раствор хлорного железа до появления фиолетовой окраски. В одну из пробирок добавляют по каплям раствор молочной кислоты до появления желто-зеленой окраски. Это окраска эталонного раствора. В другую пробирку наливают 1 мл без­белкового мышечного экстракта. Если в нем содержится молочная кислота, то окраска содержимого пробирки должна стать такой же, как и в первой пробирке.

Вывод: по изменению окраски раствора во второй пробирке сделать заключение о присутствии или отсутствии молочной кислоты в исследуемых мышцах, записать уравнение реакции. Отметить при окислении, каких энергетических веществ и при выполнении, каких упражнений (аэробной или анаэробной направленности) образуется молочная кислота.

Опыт 7. Определение гликогена в мышцах.

Гликоген при взаимодействии с йодом дает красную или красно-бурую ок­раску, интенсивность которой зависит от содержания гликогена.

Порядок выполнения работы.

Взять две пробирки, в одну из них налить 0,5 мл водного безбелкового экстракта мышечной ткани, в другую – 0,5 мл воды.

Приготовление безбелкового мышечного экстракта.

Мышечную ткань (1 г) тщательно растирают в течение 3-5 минут в ступке с 1мл дистиллированной воды до получения гомогенной кашицы. Затем добавляют 4 мл воды и тщательно растирают еще несколько минут. Содержимое ступки фильтруют через два слоя марли, фильтрат переносят в пробирку и кипятят до появления осадка. Осадок фильтруют, а фильтрат используют для анализа. Фильтрат носит название безбелковый мышечный экстракт, в его составе полностью отсутствуют белки, но сохранились экстрактивные вещества, в частности, креатин и молочная кислота.

Добавить в обе пробирки по 2 капли раствора Люголя, сравнить окраску.

Вывод:

Контрольные вопросы.

1. Особенности приготовление мышечного экстракта.

2. Получение безбелкового фильтрата.

3. С какой целью производится количественное определение глюкозы в

биологических тканях?

4. Особенности обнаружение свободного креатина и молочной кислоты в безбелковом мышечном экстракте.

5. В каких органах и тканях содержание гликогена наиболее велико и почему?

6. Из какого соединения в животных организмах синтезируется гликоген и где это происходит?

Самостоятельная работа.

1. Каков энергетический эффект анаэробного и аэробного расщепления углеводов?

2. Какими путями может протекать распад углеводов в организме?

3. Где в клетке протекает анаэробное расщепление углеводов?

4. В каких структурах происходит аэробное окисление углеводов?

5. Обосновать вклад различных путей ресинтеза АТФ в энергетическое обеспечение соревновательных нагрузок в Вашем виде спорта.