Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
МЕТОДИЧКА ФФМ.doc
Скачиваний:
136
Добавлен:
13.03.2016
Размер:
991.74 Кб
Скачать

Тема3. Функциональная и клеточная биохимия органов и тканей.

Биохимия печени

Клетки печени – гепатоциты - занимают центральное место в реакциях промежуточного метаболизма. Важнейшими функциями печени являются метаболическая, депонирующая, барьерная, экскреторная и гомеостатическая.

В печени протекают процессы обмена белков и аминокислот, липидов, углеводов, биологически активных веществ (гормонов, биогенных аминов и витаминов), микроэлементов, регуляция водного обмена. В печени синтезируются многие вещества, необходимые для функционирования других органов.

В печени осуществляется обезвреживание (биохимическая трансформация) чужеродных и токсичных соединений, поступивших с пищей или образовавшихся в кишечнике, а также токсических веществ экзогенного происхождения. Из печени различные вещества эндо- и экзогенного происхождения либо поступают в желчные протоки и выводятся с желчью, либо попадают в кровь, откуда выводятся почками.

Печень выполняет важные функции по поддержанию постоянного состава крови (гомеостаза), обеспечивая синтез, накопление и выделение в кровь различных метаболитов, а также поглощение, трансформацию и экскрецию многих компонентов плазмы крови.

Печень принимает участие в метаболизме почти всех классов веществ.

Метаболизм углеводов. Глюкоза и другие моносахариды поступают в печень из плазмы крови. Здесь они превращаются в глюкозо-6-фосфат и другие продукты гликолиза. Затем глюкоза депонируется в виде резервного полисахарида гликогена или превращается в жирные кислоты. При снижении уровня глюкозы печень начинает поставлять глюкозу за счет мобилизации гликогена. Если запас гликогена оказывается исчерпанным, глюкоза может синтезироваться в процессе глюконеогенеза из таких предшественников, как лактат, пируват, глицерин или углеродный скелет аминокислот.

Метаболизм липидов. Жирные кислоты синтезируются в печени из ацетатных блоков. Затем они включаются в состав жиров и фосфолипидов, которые поступают в кровь в форме липопротеинов. В то же время жирные кислоты поступают в печень из крови. Для энергообеспечения организма большое значение имеет свойство печени конвертировать жирные кислоты в кетоновые тела, которые затем вновь поступают в кровь.

В печени идет синтез холестерина из ацетил-KoA. Затем холестерин в составе липопротеинов транспортируется в другие органы. Избыток холестерина превращается в желчные кислоты или выводится из организма с желчью.

Метаболизм аминокислот и белков. Уровень аминокислот в плазме крови регулируется печенью. Избыточные аминокислоты расщепляются, аммиак связывается в цикле мочевины, мочевина переносится в почки. Углеродный скелет аминокислот включается в промежуточный метаболизм как источник для синтеза глюкозы (глюконеогенез) или как источник энергии. Кроме того, в печени осуществляется синтез и расщепление многих белков плазмы крови.

Стероидные гормоны и билирубин, а также лекарственные вещества, этанол и другие ксенобиотики поступают в печень, где они инактивируются.

Печень служит местом депонирования энергетических резервов организма (содержание гликогена может достигать 20% массы печени) и веществ-предшественников; здесь также депонируются многие минеральные вещества, ряд витаминов (A, D, K, B12 и фолиевая кислота), железо (около 15% всего железа, содержащегося в организме).

Лабораторная работа 7. Определение концентрации общего и прямого билирубина в сыворотке крови

Срок жизни эритроцитов составляет порядка 110-120 дней. Затем они фагоцитируются, главным образом в селезёнке, а также в костном мозге и печени. Гем после высвобождения повторно не используется, его порфириновый цикл превращается в жёлчные пигменты, которые выводятся из организма. В результате распада гема в печени, селезёнке и костном мозге образуется красно-коричневый пигмент билирубин. Дальнейшие превращения билирубина происходят в печени. Так как в воде билирубин малорастворим, он транспортируется кровью в комплексе с альбумином. В печени альбумин отделяется, а билирубин путём взаимодействия с УДФ-глюкуроновой кислотой образует хорошо растворимый билирубин-диглюкуронид. С жёлчью билирубин-диглюкуронид переходит в кишечник, где бактериальные ферменты отщепляют глюкуроновую кислоту. Затем жёлчные пигменты выводятся с мочой и калом. При избыточном образовании или нарушения выведения жёлчных пигментов развивается состояние, которое называется желтухой. В организме здорового человека 75% приходится на неконьюгированный билирубин, связанный с альбумином. Его называют непрямым, так как окрашенные продукты с диазореактивом он образует только при добавлении спирта, который освобождает билирубин из комплекса с альбумином. Билирубин-диглюкуронид сразу образует окрашенные продукты с диазореактивом, поэтому называется прямым.

Принцип метода: в присутствии кофеинового реактива диазотированная сульфаниловая кислота образует с прямым и связанным (непрямым) билирубином азобилирубин розово-фиолетового цвета. Интенсивность окраски исследуемого раствора прямо пропорциональна концентрации общего билирубина в пробе. При отсутствии кофеинового реактива в реакцию вступает лишь прямой билирубин. По разнице между общим и прямым билирубином

определяют концентрацию непрямого (связанного) билирубина.

Материалы и реактивы:

1. Раствор сульфаниловой кислоты:

-сульфаниловая кислота – (251,2) мМ

- соляная кислота – (0,50,025) М

2. Кофеиновый реактив (концентрат):

- бензоат натрия – (),5±0,25) М

- ацетат натрия – (1,50,075) М

- кофеин – (501,5) г/л

3. Раствор нитрата натрия 350 ммоль/л

Ход работы:

Анализ проводят в соответствии со схемой, приведенной в таблице:

Отмерять в пробирку, мм

Общий билирубин

Прямой билирубин

Холостая проба

Сыворотка

0,5

0,5

0,5

Кофеиновый реактив

1,75

-

1,75

Физ. раствор

-

1,75

0,25

Диазосмесь

0,25

0,25

-

Для определения прямого билирубина фотометрирование следует проводить через (5-10) мин после добавления диазосмеси, так как при длительном действии в реакцию вступает связанный (непрямой) билирубин.

Для определения общего билирубина пробу для развития окраски. Выдержать 20 мин, после чего фотометрировать. При дальнейшей экспозиции окраска не изменяется. Оптическую плотность калибровочной (Екал.) и опытной пробы (Еопыт.) измерить против холостой пробы при 540 нм в кювете с длиной оптического пути 10 или 5 мм.

Расчет концентрации билирубина провести по калибровочному графику. Для его построения использовать набор ”Билирубин-калибратор”.

Показания

ФЕКа

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

Содержание билирубина,

мг/л

3,8

7,6

11,4

15,2

19,0

22,8

22,6

30,2

34,0

37,6

Для определения концентрации непрямого билирубина из величины показателя общего билирубина вычитают величину показателя прямого билирубина.

Нормальная концентрация общего билирубина составляет 10-12 мг/л (1,7-20,5 мМ); из него 75 % приходиться на долю непрямого, а 25 % составляет прямой билирубин.

Клинико-диагностическое значение. Токсическое действие высоких концентраций билирубина в крови проявляется поражением ЦНС, появлением некротических участков в паренхиматозных органах, угнетением клеточного иммунитета, развитием анемии вследствие гемолиза эритроцитов. Важную роль в токсическом действии билирубина играет его фотосенсибилизирующее действие. Билирубин, как метаболит протопорфирина, способен переводить молекулярный кислород в активную, синглетную форму. Синглетный кислород разрушает любые клеточные структуры, окисляет липиды мембран, нуклеиновые кислоты, аминокислоты белков. Вследствие активации им перекисного окисления липидов и отщепления гликопротеидов, а также высокомолекулярных пептидов мембран, возникает гемолиз эритроцитов. Накопление в крови билирубина (выше чем 27, 36 – 34,20 мкМ) приводит к откладыванию его в тканях и появлению желтухи. В зависимости от причины возникновения выделяют несколько видов желтух.

При гемолитической желтухе печень не успевает связывать большое количество свободного билирубина, который образуется при усиленном гемолизе эритроцитов. В результате концентрация билирубина в плазме крови увеличивается до 90 – 100 мкМ за счёт свободного билирубина.

При паренхиматозной желтухе вследствие повреждения гепатоцитов снижается коньюгационная способность печени, синтез желчи, коньюгированный билирубин частично попадает в кровь. При этом в крови увеличивается содержание как связанного, так и прямого билирубина. Паренхиматозная желтуха возникает при жировом гепатозе, гепатите, циррозе печени.

При обтурационной желтухе происходит закупорка жёлчных протоков. Жёлчь переполняет их и попадает в кровь. Повышение концентрации билирубина в крови до 170 – 700 мкМ происходит за счёт связанного билирубина.

У новорожденных вследствие стерильности кишечника билирубин не превращается в производные, но активно всасывается в кровь, обуславливая гипербилирубинемию. Кроме того, у новорожденных часто наблюдают временную низкую активность билирубинглюкуронилтрансферазы, которая является причиной желтухи новорожденных, характеризующейся высоким содержанием в крови неконьюгированного билирубина.

Биохимия почек

Почки являются одним из основных органов, выделяющих окончательные продукты обмена веществ из организма. Функциональной единицей почек является нефрон, в котором происходят процессы фильтрации, реабсорбции и секреции.

Для исследования функционального состояния почек используют физиологические (проба Зимницкого, проба Фольгарда и др.) и биохимические (исследование крови на количество остаточного азота и его отдельных компонентов, геморенальные пробы – соотношение содержания отдельных веществ в крови и моче) методы.

Из 1200 мл крови, проходящей через клубочки почек за 1 мин, фильтруется около 120 мл плазмы. Для измерения скорости и объёма клубочковой фильтрации используют вещества, легко проникающие сквозь почечный фильтр, не подверженные метаболизму, не связывающиеся белками, не реабсорбирующиеся, легко и точно определяемые. С этой целью используют инулин (полисахарид фруктозы), клиренс которого в среднем составляет 120 мл/мин. Если клиренс любого вещества ниже этой величины, то часть его реабсорбируется в канальцах почек, например, для мочевины он составляет 70 мл/мин, а для глюкозы почти 0 (пороговое вещество; порог для глюкозы отвечает граничной концентрации 8,88-10 ммоль/л); если же он выше, то клиренс этого вещества осуществляется не только путем клубочковой фильтрации, но и путем канальцевой секреции.

Близким к инулиновому является клиренс эндогенного креатинина. С учетом относительной стабильности концентрации эндогенного креатинина в крови и его секреции из мочи, по нему определяют клубочковую фильтрацию креатинина (геморенальная проба). Клиренс креатинина составляет у мужчин 97-137 мл/мин, у женщин – 88-128 мл/мин.

Моча – это водный раствор, в котором содержаться различные вещества органического и неорганического происхождения. Всего за сутки с мочой выделяется около 60 г веществ: 35-45 г органических и 15-25 г минеральных. В моче выявлено около 150 химических ингредиентов.

Лабораторная работа 8. Биохимия мочи. Выявление нормальных и патологических компонентов мочи

Во время химического исследования выявляют как нормальные, так и патологические компоненты мочи. Биохимический анализ мочи позволяет сделать вывод о функциональном состоянии почек, обмене веществ в различных органах и организме в целом; позволяет установить причины, характер и прогноз патологического процесса, позволяет оценить эффективность лечения. Кроме того, исследование мочи на содержание лекарственных веществ или их метаболитов позволяет также оценить фармакологическое воздействие лекарств и прогнозировать терапевтический эффект.

В клинической практике сейчас достаточно широко используются для анализа мочи автоматические биохимические анализаторы, позволяющие за относительно короткий промежуток времени и в небольшом объеме биологического материала определить несколько десятков биохимических параметров.

Для экспресс-диагностики заболевания различные фирмы используют индикаторные тест-полоски, содержащие сухие реактивы (ферменты или другие вещества), приводящие к образованию или изменению окраски в результате их взаимодействия с некоторыми метаболитами исследуемых биологических жидкостей, например, мочи.

Анализ мочи проводят, начиная с оценки физико-химических свойств: количество, цвет, запах, прозрачность, реакция (рН) и плотность мочи.

Работа 1. Определение рН мочи с помощью индикаторной бумаги

На средину индикаторной бумаги "Рифан" нанести 1-2 капли свежей мочи и по изменению окраски одной из окрашенных полос, совпадающей с цветом контрольной полосы, определить рН мочи. Более точно определяют рН мочи потенциометрическим методом.

Клинико-диагностическое значение. Реакция мочи (рН) у здорового человека колеблется в норме от 4,5 до 8. На реакцию может влиять состав пищи или патологии. Например, щелочная реакция мочи наблюдается при рвоте, фосфатурии, воспалении мочевого пузыря (цистит) и почечных лоханок (пиелит), во время беременности, потреблении щелочных минеральных вод. Более кислая реакция мочи бывает при сахарном диабете и в период голодания (из-за накопления в моче кетоновых тел), при тяжелой почечной недостаточности из-за нарушения функции почек и снижения содержания аммиака, нейтрализующего мочу. Очень кислая реакция наблюдается при подагре и горячке.

Значительное влияние на реакцию мочи оказывает характер питания. В случае усиленного белкового питания моча становится более кислой, если преобладает растительная пища – более щелочной.

Работа 2. Выявление белка в моче

Принцип метода. Для выявления белка в моче чаще всего примеряют реакцию осаждения с помощью сульфосалициловой кислоты.

Материалы и реактивы: моча, содержащая белок (патологическая) и нормальная моча, 20% раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход работы. В первую пробирку наливают 2 мл нормальной мочи, во вторую – 2 мл патологической. В обе пробирки добавляют по 5 капель 20% раствора сульфосалициловой кислоты. При наличии белка в моче образуется белый осадок или муть.

Различают настоящую и ложную протеинурию. При настоящей, или почечной, протеинурии белки сыворотки крови проникают в мочу через почки при нарушении фильтрационной мембраны. Ложную протеинурию наблюдают во время попадания в мочу слизи, крови, гноя не из почек, и из мочевых путей.

Белок появляется в моче также при сердечной декомпенсации, иногда во время беременности, при гипертонии и инфекционных заболеваниях и др.

Работа. Количественное определение содержания глюкозы в моче (экспресс-метод с помощью глюкотеста)

Принцип метода. В основе этого ферментативного метода лежит специфическое окисление глюкозы ферментом глюкозооксидазой до глюконовой кислоты в присутствии молекулярного кислорода. В результате реакции образуется пероксид водорода, распадающийся под воздействием пероксидазы, выделение кислорода при этом окисляет краситель ортотолидин, который окрашивает тест-бумагу:

Ход работы. В мочу погрузить полоску глюкотеста так, чтобы желтая часть полоски была полностью смочена. Быстро достать бумагу из мочи, положить смоченным концом на пластмассовую пластинку и выдержать ее в течение 2 минут. Если в моче присутствует глюкоза, то желтая полоска изменяет окраску на различные оттенки зеленого цвета в зависимости от концентрации глюкозы; при отсутствии глюкозы цвет полоски не изменяется. Точно через 2 минуты сравнить окрашивание полоски с окраской цветовой шкалы: 0,1%, 0,5%, 2% раствор глюкозы и выше.

Благодаря высокой специфичности и чувствительности этого метода, простоте и скорости выполнения его широко используют как предварительный биохимический тест во время массового обследования больных, а также для самоконтроля в процессе лечения.

Клинико-диагностическое значение. Глюкозурия развивается тогда, когда уровень сахара в крови повышается выше "сахарного порога" (при сахарном диабете, алиментарной гипергликемии, возбуждении ЦНС, поражении почек, гипертиреозе, акромегалии, синдроме Иценка-Кушинга и др).

У беременных и кормящих женщин в моче может появится лактоза (лактозурия).

Работа 3. Выявление желчных кислот в моче (проба Петтенкофера)

Принцип метода. Метод базируется на способности желчных кислот давать ярко-красную окраску с оксиметилфурфуролом, который образуется вследствие действия концентрированной серной кислоты на сахарозу.

Материалы и реактивы: концентрированная серная кислота, 10% раствор сахарозы.

Ход работы. В пробирку налить 2-3 мл мочи, добавить 1-2 капли 10% раствора сахарозы, смесь встряхнуть. По стенке пробирки осторожно наслоить 1-2 мл серной кислоты. При наличии желчных кислот появляется ярко-красное окрашивание на границе двух жидкостей.

Клинико-диагностическое значение. При механической желтухе вследствие закупорки общего желчного протока камнем или опухолью желчные капилляры переполняются желчью. Вследствие этого желчь проникает в кровь и происходит усиленное выделение желчных пигментов (билирубин, биливердин) и желчных кислот с мочой.

Работа 4. Выявление кетоновых тел в моче (проба Герхарда)

Принцип метода основан на способности ацетоацетата создавать с хлоридом железа (ІІІ) соединения, окрашенные в красный цвет.

Материалы и реактивы: моча, 10% раствор хлорида железа (ІІІ).

Ход работы. К 5 мл мочи добавить по капле 10 % раствор хлорида железа (ІІІ); выпадает в осадок фосфат железа. При наличии ацетоацетата после добавления лишней капли хлорида железа (ІІІ) появляется красная окраска (реакция на энолы), которая постепенно исчезает в результате спонтанного декарбоксилирования ацетоацетата.

Примечание: о выявлении кетоновых тел (проба Ланге) см. тему "Метаболизм липидов и его регуляция".

Клинико-диагностическое значение. В норме за сутки выделяется 20-40 мг кетоновых тел. Увеличение количества кетоновых тел в крови (кетонемия) и моче (кетонурия) наблюдается при сахарном диабете, дефиците углеводов в питании (углеводное голодание), тиреотоксикозе, поражении печени, тяжелых интоксикациях.

Работа 5. Качественная реакция на фенилпировиноградную кислоту (проба Фелинга)

Принцип метода. Фенилпировиноградная кислота (фенилпируват) образует с ионами железа (III) комплексное соединение, окрашенное в сине-зелёный цвет.

Материалы и реактивы:моча, 10 % раствор хлорида меди (III).

Ход работы. К 2 мл свежеотфильтрованной мочи добавить 8 – 10 капель 10 % раствора хлорида меди (III). При наличии в моче фенилпирувата через 30 – 60 сек появляется сине-зелёное окрашивание, которое постепенно бледнеет и через 5 – 30 мин (в зависимости от концентрации фенилпирувата в моче) выцветает. Эту пробу можно проводить на фильтровальной бумаге или детской пелёнке.

Клинико-диагностическое значение. Повышенное содержание в крови и присутствие в моче фенилпирувата служит диагностическим критерием фенилкетонурии.

Работа 6. Выявление уробилина в моче (реакция Богомолова)

Принцип метода. Уробилин способен образовывать с сульфатом меди розовато-красные или медно-красные продукты реакции, хорошо растворимые в хлороформе.

Материалы и реактивы: моча, насыщенный водный раствор сульфата меди, концентрированная соляная кислота, хлороформ.

Ход работы. В пробирку налить 2–3 мл мочи, добавить 0,5 мл насыщенного сульфата меди. Если смесь мутнеет вследствие образования гидроксида меди, то добавить одну каплю концентрированной соляной кислоты для осветления раствора. Через 5 мин добавить 0,5 мл хлороформа и осторожно встряхнуть пробирку несколько раз. При наличии уробилина хлороформ приобретает розовато-красный или медно-красный цвет (в зависимости от концентрации уробилина в моче).

Клинико-диагностическое значение. Уробилинурию наблюдают при паренхиматозных заболеваниях печени (гепатит, цироз, отравления), гемолитических состояниях (гемолитическая желтуха, гемоглобинурия, обширные инфаркты миокарда и т.д.), кишечных заболеваниях, связанных с усиленной реабсорбцией стеркобилиногена кишечником (энтероколит, запор), лихорадках, которые сопровождаются токсическим поражением печени.

Полное отсутствие уробилина в моче указывает на обтурационную желтуху.

Биохимия мышц

Важнейшей функцией мышечного волокна является сократительная. Процесс сокращения и расслабления связан с потреблением АТФ, гидролиз которого катализирует миозин-АТФ-аза. Однако небольшой запас АТФ, имеющийся в мышцах, расходуется за 1 секунду.

Потребности работающей мышцы в АТФ удовлетворяются за счет некоторых ферментативных реакций.

Быстрая регенерация АТФ может быть достигнута за счет переноса фосфатной группы креатинфосфата на АДФ в реакции, катализируемой креатинкиназой. Однако и этот мышечный резерв «высокоэргического фосфата» расходуется в течение нескольких секунд. В спокойном состоянии креатинфосфат вновь синтезируется из креатина. При этом фосфатная группа присоединяется по гуанидиновой группе креатина (N-гуанидино-N-метилглицина). Креатин, который синтезируется в печени, поджелудочной железе и почках, в основном накапливается в мышцах. Здесь креатин медленно циклизуется за счет неферментативной реакци с образованием креатинина, который поступает в почки и удаляется из организма.

Наиболее важным долгосрочным энергетическим резервом в мышечной ткани является гликоген. В покоящейся ткани содержание гликогена составляет до 2% от мышечной массы. При деградации под действием фосфорилазы гликоген легко расщепляется с образованием глюкозо-6-фосфата, который при последующем гликолизе превращается в пируват. При большой потребности в АТФ и недостаточном поступлении кислорода пируват за счет анаэробного гликолиза восстанавливается до лактата, который диффундирует в кровь и поступает в печень, где конвертируется в глюкозу (цикл Кори).

Из всех способов синтеза АТФ наиболее продуктивным является окислительное фосфорилирование. За счет этого процесса обеспечиваются потребности в АТФ постоянно работающей сердечной мышцы (миокарда). Вот почему для успешной работы сердечной мышцы обязательным условием является достаточное снабжение кислородом (инфаркт миокарда — это следствие перебоев в поступлении кислорода).

Скелетные мышцы активно участвуют в метаболизме аминокислот. В них происходит деградация разветвленных аминокислот. Ряд других аминокислот также деградируют преимущественно в мышцах. Одновременно идет ресинтез и высвобождение в кровь аланина и глутамина. Эти аминокислоты служат переносчиками азота, образующегося при расщеплении белков, в печень.

При голодании мышечные белки служат энергетическим резервом организма. Они гидролизуются до аминокислот, которые поступают в печень. Здесь углеродный скелет аминокислот превращается в промежуточные продукты цитратного цикла, в том числе в ацетоацетил-КоА и ацетил-КоА. Эти амфиболические соединения окисляются в цикле трикарбоновых кислот или включаются в процесс глюконеогенеза.

Лабораторная работа 9. Количественное определение креатинина в сыворотке крови и моче

Креатинин – один из конечных продуктов азотистого обмена позвоночных животных и человека, выделяемый с мочой. Креатинин образуется из креатинфосфата путём неферментативного дефосфорилирования.

В печени и поджелудочной железе из аргинина, глицина и метионина синтезируется креатин. В скелетных мышцах, миокарде и нервной ткани в реультате обратимой реакции переноса фосфорной группы с АТФ на креатин образуется креатинфосфат – макроэргическое соединение, которое выполняет роль донора энергии для сокращения мускулатуры и активного транспорта ионов в нервной ткани.

При нарушении обмена креатина (например, при мышечных дистрофиях) большая его часть выводится вом виде креатинина.

Креатинин не абсорбируется в почечных канальцах, потому его содержание в моче может служить также показателем состояния почек.

Принцип метода: пикриновая кислота в щелочной среде образует с креатинином продукт оранжевого цвета (производное 2,4,6-три- нитроциклогексадиена) Интенсивность окраски опытного раствора прямо пропорциональна концентрации креатинина в пробе. В сыворотке крови креатинин исследуется после депротеинирования раствором ТХУ, в моче – после разведения.

Материалы и реактивы:

1. Раствор пикриновой кислоты (0,040,002) М

2. Раствор трехлоруксусной кислоты (1,220,061) М

3. Гидроокись натрия: раствор 2,3 Н или сухой NaOH

4. Лиофилизированный креатинин для приготовления 8 мл калибровочного раствора (442,522) мкМ или 8 мл готового раствора креатинина (422,522) мкМ

Ход работы:

Анализ биологических жидкостей проводится в соответствии с таблицей.

Отмеряемый

раствор, мл

Опытная

проба

Калибровочная проба

Холостая

проба

Сыворотка или моча, разведенная в 100 раз

1,0

- -

- -

Дистиллированная вода

2,0

2,0

3,0

Калибровочный раствор

-

1,0

- -

Перемешать, центрифугировать 5 мин. при 3000 об./мин.

Надосадочная жидкость

2,0

2,0

2,0

Раствор гидроокиси натрия

1,0

1,0

1,0

Раствор пикриновой кислоты

1,0

1,0

1,0

Перемешать, выдержать 20 минут при комнатной температуре, фотометрировать против холостой пробы. Окраска стабильна в течение (202) мин. Оптическую плотность растворов измеряют при длине волны 490-520 нм в кювете с длиной оптического пути 10 или 5 мм.

Нормальные значения концентрации креатинина в сыворотке:

Подростки: – (44-88) мкМ;

18-60 лет: М – (80-115) мкМ;

Ж – (53-97) мкМ;

60-90 лет: М – (71-115) мкМ;

Ж – (53-106) мкМ.

Расчет концентрации креатинина в пробе проводят по формуле:

,

где С – концентрация креатинина в пробе, г/л (мкМ);

0,05 (442) – калибровочная концентрация креатинина, г/л (мкМ);

Е опыт. – оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. плотности;

Екал. – оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотности.

Количество креатинина в суточной моче определяют по формуле

,

где КК – количество креатинина в суточной моче, мг;

С – концентрация креатинина в моче, мг %;

А – суточное количество мочи, мл;

В – количество мочи, взятой для анализа, мл.

Нормальные значения содержания креатинина в моче:

Подростки – (8-30) мг/кг/сут. (71-265) мкмоль/кг/сут.;

Взрослые М:– (14-26) мг/кг/сут. (124-230) мкмоль/кг/сут.;

Ж:– (11-20) мг/кг/сут. (97-177) мкмоль/кг/сут.

За сутки с мочой у здорового человека – (4,4-17,7) мМ.

Контрольные вопросы по теме ”Функциональная и клиническая биохимия органов и тканей”:

  1. Биохимические функции печени: углеводная, белоксинтезирующая, мочевинообразовательная, желчеобразовательная, регуляция липидного состава крови.

  2. Детоксикационная функция печени; типы реакций биотрансформации ксенобиотиков и эндогенных токсинов.

  3. Реакции микросомального окисления. Цитохром Р-450; цепи транспорта электронов в мембранах эндоплазматического ретикулума гепатоцитов.

  4. Реакции конъюгации в гепатоцитах: биохимические механизмы, функциональные значения.

  5. Катаболизм гемоглобина и гема; образование и структура желчных пигментов.

  6. Роль печени в обмене желчных пигментов. Патобиохимия желтух; типы желтух; наследственные (ферментные) желтухи, биохимическая диагностика желтухи.

  7. Водно-солевой обмен в организме. Внутриклеточная и внеклеточная вода; обмен воды, натрия, калия.

  8. Роль почек в регуляции объема, электролитного состава и рН жидкостей организма. Биохимические механизмы мочеобразовательной функции почек.

  9. Ренин-ангиотензиновая система почек. Гипотензивные лекарственные средства – ингибиторы ангиотензинпреобразующего фермента.

  10. Биохимический состав мочи человека в норме и при развитии патологических процессов. Клинико-диагностическое значение анализа состава мочи.

  11. Биохимический состав мышц. Белки миофибрилл: миозин, актин, тропомиозин, тропонин.

  12. Молекулярные механизмы мышечного сокращения. Роль ионов Са2+ в регулировании сокращения и расслабления мышц.

  13. Биоэнергетика мышечной ткани; источники АТФ; роль креатинфосфата в обеспечении энергии мышечного сокращения.

  14. Биохимия нервной системы: особенности биохимического состава и метаболизма головного мозга.

  15. Энергетический обмен в головном мозге человека. Значение аэробного окисления глюкозы; изменения в условиях физиологического сна и наркоза.

  16. Биохимия нейромедиаторов; рецепторы нейромедиаторов и физиологически активных соединений.

  17. Пептидергическая система головного мозга: опиоидные пептиды, рецепторы опиоидных пептидов.

  18. Нарушение обмена медиаторов и модуляторов головного мозга при психических расстройствах. Нейрохимические механизмы действия психотропных средств.