Получение гетерологичных сывороток

Принцип подбора животного-продуцента.В производ­ственных условиях такие сыворотки получают от лошадей. Для иммунизации подбирают те виды животных, у которых отсутству­ет видовой иммунитет к данному антигену. Только в таком случае возможен антигензависимый иммунный ответ и получение сыво­роток. Поэтому для каждого антигена подбирают чувствительный вид животных. Лошадь по своей видовой антигенреакционной резистентности во многом сходна с человеком. Это с учетом про­изводственных потребностей (возможности длительной эксплуа­тации, ежегодного получения более 200 литров сыворотки от каж­дого животного) и является обоснованием их выбора в качестве продуцента для получения, сывороточного препарата.

Первые этапы работы: карантин — наблюдение — отбор. За­тем проводится грундиммунизация —введение малых доз антигена с учетом появления в сыворотке иммунных антител. Иммуниза­цию и гипериммунизацию проводят по циклам с использованием определенных схем, учитывающих кратность введения антигена, интервал между ними, нарастание доз.

В начальном периоде эксплуатации для иммунизации исполь­зуют обезвреженные антигены (анатоксины и вакцины). При вы­раженной антителопродукции переходят на введение необезвре­женных антигенов.

Принципиальная схема иммунизации лошади

Через 4-5 дней вводят п/к 5-10-20-40-80-100-120-150 мл антигена. На 7-е сутки — пробное кровопускание На 10-е сутки — 5 л крови (у лощади всего 25 л крови) Отдых 2-3 недели Иммунизация по схеме 4—5 циклов иммунизации Отдых 2-3 месяца 10—12 циклов иммунизации Тотальное кровопускание (10-15 л).

Полученную кровь собирают в цилиндры. После свертыва­ния и отделения сгустка образуется прозрачная часть —нативная сыворотка. К ней добавляют консервант (чаще хлороформ), про­гревают при 60º С, охлаждают до 6-8 °С, и отстаивают. При этом в осадок выпадают нестойкие белки и титр антител в сыворотке ста­билизируется. Затем сыворотку титруют, то есть определяют в ней расчетное содержание иммунных антител. Силу сыворотки опреде­ляют в ME. За 1MEпринимается то минимальное количество сы­воротки, которое нейтрализует установленную дозу токсина.

Титрование сыворотокпроводится тремя методами: по Рамонуinvitro; по Эрлихуinyivo; по Ремеруinvitro.

После определения количества антител в сыворотке ее очи­щают от балластных белков-альбуминов, с которыми не связаны их защитные свойства. Затем сыворотку подвергают очистке и кон­центрируют. Концентрация сыворотки основана на выделении и растворении выделенных активных фракций в меньшем объеме по сравнению с исходным — нативной сывороткой. Это позволя­ет вводить в организм препараты с меньшим содержанием чуже­родных для организма человека белков.

Методы очистки и концентрации:

пропускание через сыворотки на холоде углекислого газа, при этом глобулины выпадают в осадок;

высаливание сывороток на холоде сернокислым аммонием с последующим диализом и т. д.

В настоящее время для чистки и концентрации сывороток используется метод «Диаферм-3». Метод основан на фракциони­ровании сывороток сернокислым аммонием; обработке их пепси­ном с последующим диализом в течение 40—42 часов.

Для диализа у сывороток устанавливают рН == 7,3. Для удале­ния оставшихся балластных белков сыворотку эмульгируют хло­роформом (30%по объему), при этом в осадок выпадает послед­няя порция балластных белков. Хлороформ затем удаляют центрифугированием. Около 70 % сывороточных белков (имму-нологически неактивных) удаляется, а остается глобулиновая фрак­ция — антитела.

Оставшуюся прозрачную жидкость стерилизуют фильтрацией; титруют; испытывают на пирогенность, безвредность и стериль­ность; разливают в ампулы, запаивают, этикетируют.

Получение иммуноглобулинов

Иммуноглобулины направленного действия готовят из сыворотки крови добровольцев, которые подвергаются специ­альной иммунизации против определенного вида инфекции. Та­кие Препараты содержат большое количество антител —γ-глобулины против гриппа, бешенства, оспы, клещевого энцефалита, столбняка, стафилококка, иммуноглобулин Е, анафилактическая фракция IgD.

Иммунные сыворотки или иммуноглобулины следует вводить очень осторожно, так как могут наблюдаться реакции в виде анафилактического шока, сывороточной болезни и т. д. Во избе­жание этого препарат вводят по методу Безредка:

перед введением сывороток определяется индивидуальная чув­ствительность к чужеродному белку. Для этого сыворотку разво­дят 1:100, в объеме 0,1 мл вводят подкожно;

через 20 минут, если реакция отрицательная, вводят 0,1 мл неразведенной сыворотки;

через 30—60 минут вводят всю назначенную дозу.

Если при введении десенсибилизирующей дозы 0,1 мл реак­ция положительная (папула 1 см, краснота), сыворотку разводят всю и вводят очень осторожно с интервалами 20—30 минут в дозах 0,5; 2; 5 мл и т. д. При этом наготове должен быть раствор адрена­лина (1:1000).

ЭУБИОТИКИ

Интенсивная химизация окружающей среды, насыще­ние ее ксенобиотиками актуализирует проблему дисбактериозов. Ксенобиотиками(от греч.xenos— чужой) называют химические вещества неприродного, синтетического происхождения (в том числе лекарственные препараты, средства бытовой химии, ядо­химикаты, продукты промышленного загрязнения и др.), обла­дающие биологической активностью и способные нарушать микробиоценозы организма человека и животных, обусловливая дисбактериозы. Дисбактериозыпредставляют собой количествен­ные и качественные изменения состава, свойств и ассоциатив­ных отношений аутофлоры в экосистемах человеческого орга­низма.

Эффективным способом коррекции микробной экологии раз­личных экосистем организма, прежде всего кишечника, является его заселение эубиотиками— бактериальными препаратами из живых представителей нормальной микрофлоры. Применение биопрепаратов является традиционным лечебно-профилактичес­ким направлением отечественной медицины. Его существенное преимущество перед химиотерапией состоит в полной физиоло­гичности для организма человека и отсутствии какого-либо по­бочного действия, характерного для синтетических антимикроб­ных препаратов и антибиотиков.

Вопрос о положительной роли кишечной микрофлоры воз­ник еще во времена Л. Пастера, который в 1885 году высказал мысль о ее возможном позитивном значении для организма. Начало работ по исследованию микробного антагонизма связа­но с именем И. И. Мечникова, с его идеей борьбы с гнилостными кишечными бактериями с помощью молочнокислых культур. Мечниковская простокваша (лактобациллин) представляла собой молоко, заквашенное культурами болгарской палочки (Lactobacillusbulgaricum), выделенной из йогурта, и молочнокислого стреп­тококка. Дальнейшим шагом в этих исследованиях явилось пред­ложение А. Гартье, который в 1910 году в Петербурге предложил применять ацидофильное молоко, заквашенное ацидофильной палочкой, выделенной из кишечника. В 1900 году Тиссье впервые описал обнаруженные им в кишечнике новорожденных детей грамположительные бесспоровые палочки и назвал их бифидобактериями.

Теория и практика современной бактериотерапии связана с та­кими именами отечественных ученых как Л. Г. Перетц, Б. И. Блан­ков, О. В. Чахава, Б. А. Шендеров, А. А. Ленцнер, И. А. Сытник, С. И. Климнюк.

Широкое распространение разных форм дисбиотических со­стояний, обусловленных нарушением эволюционно сложившихся биологических связей между макроорганизмом и нормальной микрофлорой, требует создания арсенала соответствующих ле­карственных средств для восстановительной терапии. Она обес­печивается бактериальными препаратами, состав которых отра­жает многозвеньевую структуру нормального микробиоценоза человека. Для этих целей используют выпускаемые отечествен­ной промышленностью биопрепараты в сухой форме — бификол, бифидумбактерин, колибактерин, лактобактерин, а также культуры антагонистически активных штаммов в нативной фор­ме (на молоке) — кисломолочные продукты культур лактобактерий (L.acidopriilum,L.fermentun,L.plantarum,L.bulgaricum). Лактобактерии в монокультуре или различных сочетаниях с бифидумбактериями составляют основы многих зарубежных био­препаратов — антибиофилюс, ацидофилюс, «Zyma», синерлак, ортобактер, омнифлора и др. На основании многочисленных ис­следований в этой области сформулированы основные принци­пы создания современных эубиотиков.